發(fā)布時間：2020-07-01 05:26

【摘要】：目的:肝癌是我國因癌癥引發(fā)死亡的第三大殺手。目前針對其治療方法包括手術(shù)療法(肝切除、肝移植)和非手術(shù)療法(介入療法、放療、化療等),但研究表明大部分肝癌患者會出現(xiàn)術(shù)后癌癥復(fù)發(fā)、單純放化療效果不明顯、容易產(chǎn)生多藥耐藥、出現(xiàn)強烈藥物不良反應(yīng)等現(xiàn)象。所以臨床上急需要尋找一些治療效果好同時又能夠有效降低患者不良反應(yīng)的藥物。我國作為中藥發(fā)展、研究和應(yīng)用領(lǐng)域的大國,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有很多天然藥用植物的活性提取物具有良好的抗腫瘤療效,其中丹參酮I就在近年來的報道中被指出抗癌作用明顯且毒副作用較低,但其相關(guān)作用機制尚不清楚。本實驗?zāi)康氖且匀烁伟?721細胞為對象,研究丹參酮I促使細胞凋亡的相關(guān)作用機制,為丹參酮I作為抗腫瘤藥物進入臨床應(yīng)用提供前期理論和實驗基礎(chǔ)。方法:以不同濃度劑量丹參酮I刺激細胞,利用倒置顯微鏡檢查細胞形態(tài)學(xué)變化,CCK8法對各組細胞活力值進行檢測,RTCA法實時監(jiān)測細胞活力變化,流式細胞儀檢測細胞周期、細胞凋亡及細胞內(nèi)活性氧水平變化情況,同時將細胞用DAPI染色后通過熒光顯微鏡檢測肝癌細胞凋亡情況,應(yīng)用蛋白免印跡法(WB)檢測周期、凋亡及自噬相關(guān)蛋白的表達情況,最后再分別利用活性氧清除劑(NAC)和自噬特異性抑制劑(3-MA)預(yù)處理細胞后進行細胞活力及細胞凋亡方面的檢測。結(jié)果:1.丹參酮I能顯著抑制人肝癌7721細胞增殖,且呈現(xiàn)時間-劑量依賴性,在倒置顯微鏡下顯示經(jīng)藥物刺激后癌細胞變圓且數(shù)量急劇減少。2.丹參酮I可以使人肝癌7721細胞中Cycline A1蛋白的表達量下降,P21的表達量上升,促使細胞被阻滯在S期。3.丹參酮I可以將細胞早期凋亡率由0.24%提高到8.98%,利用DAPI進行核染后隨濃度增加熒光亮點數(shù)量顯著增多,另外可以使P-ERK蛋白表達降低,凋亡標(biāo)志蛋白分子Caspase3和PRAP表達升高,提示藥物可能通過細胞外信號調(diào)節(jié)激酶途徑釋放相關(guān)信號因子促使細胞發(fā)生凋亡。4.丹參酮I刺激癌細胞后可以引發(fā)細胞內(nèi)ROS水平的提高,在加入ROS特異性清除劑NAC孵育,再利用藥物刺激細胞后,細胞活力明顯上升(P0.001)細胞凋亡率則顯著降低(P0.001)。5.丹參酮I可以參與誘導(dǎo)細胞發(fā)生自噬,造成自噬標(biāo)志蛋白LC3-I,LC3-II和Beclin1表達的升高及P62蛋白表達的降低;在利用自噬特異性抑制劑(3-MA)對自噬進行抑制后,細胞活力顯著逐漸下降(P0.01),細胞凋亡水平不斷提高,提示丹參酮I的加入可能引發(fā)細胞內(nèi)保護性自噬的發(fā)生,加入自噬抑制劑后則能夠抑制癌細胞的生長。結(jié)論:丹參酮I對肝細胞癌具有明顯的抗腫瘤活性,可以阻滯細胞周期、促使細胞發(fā)生凋亡,是一種潛在的肝癌治療藥物。丹參酮I促使肝癌細胞凋亡的機制可能是刺激癌細胞后通過引起細胞內(nèi)活性氧水平的增加來有效抑制細胞外信號調(diào)節(jié)激酶活化,使p-ERK蛋白表達水平降低,同時激活caspase3等凋亡蛋白,進而導(dǎo)致細胞發(fā)生凋亡。另外,丹參酮I可以促進肝癌細胞發(fā)生保護性自噬,抑制自噬可以增強丹參酮I誘導(dǎo)的細胞凋亡效應(yīng),因此當(dāng)利用藥物聯(lián)合自噬特異性抑制劑使用時可以有效提高藥物的抗腫瘤活性,從而進一步提高丹參酮I治療肝細胞癌的臨床療效。
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

癌概述簡介全世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，據(jù)全球癌癥流行狀況統(tǒng)亡率第二位，2012 年共 74.6 萬肝癌死亡患者中，有超過 50% 每年全世界約有 25 萬人死于原發(fā)性肝癌，中國約占其中的 4中排名第四，在腫瘤致死原因中排名第三。原發(fā)性肝癌分為肝ular Carcinoma, HCC）、肝內(nèi)膽管癌（Intrahepatic Cholangiocar肝內(nèi)膽管混合型癌癥（HCC-ICC），其中肝細胞癌占原發(fā)性肝細癌多發(fā)于男性，在我國肝細胞癌患者男女比率約為 5:1[4]。乙型感染導(dǎo)致了大部分肝細胞癌的發(fā)生。另外，黃曲霉素、酗酒、吸和遺傳因素等都構(gòu)成肝細胞癌發(fā)生的危險因素，具體相關(guān)危險因

手術(shù)切除是針對無肝硬化和小腫瘤（實體瘤直徑＜3cm），肝功能正常，無門靜脈高癥患者的首選治療方式，這種方法可以比較有效的清楚病灶，但可能還存在其他慢性病，據(jù)調(diào)查這類患者 5 年內(nèi)肝細胞癌的復(fù)發(fā)風(fēng)險為 70%[8]。另外的手術(shù)治療方法是肝植，但往往因缺少合適的肝源成為此種療法的限制。手術(shù)治療僅適用于早期的肝細胞患者[9]，且這些患者中僅有少于 20%的人適合進行手術(shù)治療[10]。非手術(shù)療法適用于大多數(shù)的肝細胞癌患者。其中局部消融術(shù)中的射頻消融術(shù)是最佳療法之一，它通過醫(yī)學(xué)影像技術(shù)對腫瘤進行定位，然后在局部位置對腫瘤進行物理或?qū)W殺傷。有報道顯示，使用這種方法與手術(shù)療法的患者生存率相當(dāng)[11]。介入治療又稱ACE 療法，是在影像學(xué)的幫助下使用抗癌藥物阻塞腫瘤血管等，從而起到化療性栓塞用。這兩種方法是非手術(shù)療法中目前最常用的辦法，一些肝細胞癌化療藥物例如 5-、順鉑、紫杉醇等也能一定程度上提高患者的生存時間，其他療法例如生物療法和中療法可以一定程度上減輕患者的用藥不良反應(yīng)，提高治療效果，也是目前治療過程中較常用的手段。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 宋燁;;丹參酮I和二氫丹參酮I對人胃癌細胞MGC-803、乳腺癌細胞MCF-7的抗腫瘤活性研究[J];數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志;2015年06期

2 王寧;包鶴齡;王寶華;;肝癌預(yù)防和干預(yù)策略探討[J];中國初級衛(wèi)生保健;2014年11期

3 付烊;;痰熱清注射液對晚期肺癌合并肺部感染患者療效分析[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2014年07期

4 張蕾;陳璐;李蒙蒙;金王東;王飄逸;單樂天;;丹參酮Ⅰ抑制小鼠B16黑色素瘤細胞研究[J];浙江林業(yè)科技;2014年03期

5 王捷虹;沈舒文;劉力;汶明琦;許永攀;;中醫(yī)辨證治療胃癌前期病變的臨床觀察與體會[J];遼寧中醫(yī)雜志;2013年01期

6 陳曦;梁文穎;熊靜波;;自噬的檢測方法及評述[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2012年09期

7 代先祥;王萌;徐德智;張利;;丹參中丹參酮Ⅱ_A和丹參酮Ⅰ的提取方法研究[J];中成藥;2010年08期

8 嚴(yán)玉平;由會玲;朱長福;徐樹楠;;丹參種源分布及道地性研究[J];時珍國醫(yī)國藥;2007年08期

9 趙娜;郭治昕;趙雪;趙利斌;;丹參的化學(xué)成分與藥理作用[J];國外醫(yī)藥(植物藥分冊);2007年04期

本文編號：2736334