發(fā)布時間：2020-03-21 19:17

【摘要】：目的:通過高糖誘導(dǎo)損傷RSC96細胞,建立糖尿病周圍神經(jīng)病變的細胞模型,采用中藥葛根的有效成分葛根素進行干預(yù),觀察葛根素治療前后凋亡、自噬相關(guān)蛋白的表達情況,旨在探討葛根素對高糖誘導(dǎo)的RSC96細胞凋亡和自噬的影響及其作用機制。方法:實驗用RSC96細胞株購自ATCC細胞庫,建立體外RSC96細胞高糖損傷模型,采用蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot,WB)方法檢測Cleaved Caspase-3蛋白表達情況判定造模成功后,確定造模用葡萄糖濃度為400 mmol.L~(-1)。采用CCK-8法確定葛根素干預(yù)濃度為0.5mmol.L~(-1),之后隨機分為空白對照組、高糖組、葛根素干預(yù)組。其中空白對照組不添加任何藥物;高糖組:正常培養(yǎng)48h后,加400 mmol.L~(-1)高糖孵育1 h;葛根素干預(yù)組:正常培養(yǎng)48h后,用0.5mmol.L~(-1)的葛根素預(yù)處理RSC96細胞15min,隨后加400 mmol.L~(-1)的高糖孵育1 h。采用CCK-8法觀察細胞存活率;免疫細胞化學法檢測Beclin-1蛋白的表達;WB檢測Cleaved Caspase-3、LC3-II、p62、Beclin-1蛋白的表達。結(jié)果:與高糖組相比,葛根素預(yù)處理可顯著提高高糖誘導(dǎo)后的RSC96細胞存活率(P0.05),抑制Cleaved Caspase-3、LC3-II和Beclin-1蛋白的表達(P0.05),增強p62蛋白的表達(P0.05)。具體如下:1.400 mmol.L~(-1)高糖處理6h導(dǎo)致RSC96細胞損傷。用400 mmol.L~(-1)高糖處理0、3、6、9、12、24h;WB方法檢測各組Cleaved Caspase-3蛋白的表達,結(jié)果顯示400 mmol.L~(-1)葡萄糖處理6h時,RSC96細胞中Cleaved Caspase-3蛋白的表達顯著提高(P0.01)。2.葛根素預(yù)處理可提高高糖誘導(dǎo)的RSC96細胞存活率,經(jīng)(0.1-1)mmol.L~(-1)濃度范圍的葛根素處理15min,葛根素干預(yù)濃度為0.5 mmol.L~(-1)時,RSC96細胞存活率高于對照組(P0.05),隨著葛根素濃度的增加,細胞的存活率隨之下降。3.與對照組相比,葛根素干預(yù)組可降低Cleaved Caspase-3蛋白表達,經(jīng)高糖處理后,Cleaved Caspase-3蛋白表達顯著增加(P0.01);用0.5 mmol.L~(-1)葛根素預(yù)孵育15min后,Cleaved Caspase-3蛋白的表達量明顯下降(P0.05)。4.與對照組相比,400 mmol.L~(-1)高糖處理1h可誘導(dǎo)RSC96細胞p62蛋白的表達明顯降低(P0.05);因此,后續(xù)檢測自噬相關(guān)蛋白時,我們選擇用400mmol.L~(-1)高糖處理1h。5.葛根素抑制高糖誘導(dǎo)的RSC96細胞自噬的水平,葛根素干預(yù)組相較于高糖組,LC3-II蛋白表達下降(P0.05),p62蛋白表達升高(P0.05);Beclin-1蛋白的表達在免疫細胞化學法和WB法趨勢一致。免疫細胞化學結(jié)果顯示Beclin-1蛋白在高糖組中呈中陽性,在葛根素干預(yù)組中呈弱陽性;WB結(jié)果表明,葛根素干預(yù)組較高糖組可顯著抑制Beclin-1蛋白的表達(P0.05)。結(jié)論:葛根素預(yù)處理可顯著改善高糖誘導(dǎo)的RSC96細胞凋亡。葛根素對高糖誘導(dǎo)的RSC96細胞自噬的保護作用可能與其抑制LC3-II和Beclin-1蛋白表達、提高p62蛋白表達有關(guān)。
【圖文】：

圖 1 不同濃度 HG 處理 24h，對 Cleaved Caspase-3 蛋白表達的影響Fig. 1 Effects of 24 h treatment with different concentrations of HG on Cleaved Caspase-3protein (#P<0.05vs control)圖 2-1 400mmol.L-1HG 處理不同時間，RSC96 細胞的形態(tài)學變化（200×）

圖 1 不同濃度 HG 處理 24h，對 Cleaved Caspase-3 蛋白表達的影響Fig. 1 Effects of 24 h treatment with different concentrations of HG on Cleaved Caspase-3protein (#P<0.05vs control)
【學位授予單位】：湖北民族大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 朱盼;張彬;向紀明;;水溶性葛根素衍生物的合成[J];化學研究與應(yīng)用;2019年04期

2 鐘靜惠;崔赤梅;顧晴;;葛根素的藥理及臨床應(yīng)用分析[J];健康之路;2017年02期

3 蔡皓;張櫻山;李曉強;李智勤;;UPLC法測定活血定眩提取液中兩個異黃酮的含量[J];家庭醫(yī)藥.就醫(yī)選藥;2016年08期

4 ;可以口服的葛根素安全更方便![J];大家健康;2016年04期

5 ;葛根素也可以口服的 安全更方便![J];大家健康;2015年08期

6 ;葛根素也有口服制劑了![J];大家健康;2015年09期

7 崔書霞;田煒;郝志梅;;葛根素對心臟疾病的保護作用[J];廣東醫(yī)學;2013年07期

8 王廣峰;付海波;;葛根素提取工藝的研究[J];黑龍江科技信息;2012年08期

9 胡人月;張毅;陳國慶;杜洪飛;楊大堅;;超高效液相色譜法測定四乙酰葛根素的含量及有關(guān)物質(zhì)[J];中南藥學;2012年03期

10 李曉俠;李成;;注射用葛根素治療冠狀動脈粥樣硬化性心臟病療效觀察[J];實用中醫(yī)內(nèi)科雜志;2012年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 朱禎;毛定安;劉利群;劉玲娟;;葛根素對成骨細胞凋亡的影響及意義[A];第十九次全國兒科中西醫(yī)結(jié)合學術(shù)會議資料匯編[C];2015年

2 范津玲;;葛根素的臨床應(yīng)用進展[A];新世紀全國中藥研究暨中藥房管理學術(shù)研討會論文匯編[C];2001年

3 陶志勛;;葛根素的臨床應(yīng)用進展[A];2004年全國中藥研究暨中藥房管理學術(shù)研討會論文匯編[C];2004年

4 趙紅;李成建;;葛根素不良反應(yīng)[A];第四屆全國老年醫(yī)學進展學術(shù)會議論文集[C];2004年

5 光紅梅;李應(yīng)全;魏欣冰;張岫美;;羥乙葛根素對過氧化氫致牛腦微血管內(nèi)皮細胞損傷的保護作用[A];山東省藥學會第一屆學術(shù)年會論文集（上）[C];2005年

6 屈凌波;王玲;陳曉嵐;趙玉芬;;7-磷酰化葛根素與牛血清蛋白的相互作用[A];第七屆全國磷化學化工暨第四屆海峽化學生物學、生物技術(shù)與醫(yī)藥發(fā)展討論會論文集[C];2006年

7 張立實;丁曉琴;;葛根素的生物學作用及其應(yīng)用現(xiàn)狀[A];第二屆中國西部營養(yǎng)學術(shù)會議專題報告及論文摘要匯編[C];2006年

8 張立實;;葛根素生物學作用研究進展(綜述)[A];第四屆第二次中國毒理學會食品毒理學專業(yè)委員會與營養(yǎng)食品所毒理室聯(lián)合召開學術(shù)會議論文集[C];2008年

9 王立;梁爽;薛冰;張文君;;葛根素新劑型的研究進展[A];中國商品學會第五屆全國中藥商品學術(shù)大會論文集[C];2017年

10 張少瀚;康洋;顧志鵬;吳鈞;;具有抗氧化作用的聚多巴胺-葛根素納米粒保護骨髓間充質(zhì)干細胞[A];中國化學會2017全國高分子學術(shù)論文報告會摘要集——主題G：藥物控釋載體高分子[C];2017年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 周雨晴;葛根素二次開發(fā)為藥食同源應(yīng)用開辟新途徑[N];科技日報;2015年

2 記者 李松;大健康產(chǎn)業(yè)升級 葛根素市場助力[N];中國食品報;2015年

3 副主任醫(yī)師 羅建國;葛根素可用治多種疾病[N];大眾衛(wèi)生報;2000年

4 李立安;葛根素的臨床新用[N];中國醫(yī)藥報;2002年

5 張生林；陳蕓；張毅;葛根素可治老年VBI[N];中國醫(yī)藥報;2005年

6 陶春祥;葛根素的臨床應(yīng)用[N];中國中醫(yī)藥報;2002年

7 劉海文;葛根素治療糖尿病血管并發(fā)癥[N];中國醫(yī)藥報;2005年

8 程書權(quán);葛根素的臨床應(yīng)用[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

9 時仲省;一項研究顯示 葛根素可預(yù)防酒精性股骨頭壞死[N];中國醫(yī)藥報;2008年

10 本報記者 裘炯華;葛根素或成阿司匹林“替補隊員”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2015年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 羅承鋒;葛根素固體脂質(zhì)納米粒的藥動學及其代謝產(chǎn)物研究[D];廣州醫(yī)學院;2010年

2 宋浩亮;PPC藥效毒理學及作用機理研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2004年

3 郭東艷;葛根素衍生物納米凍干粉針的藥學研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2004年

4 苗維納;葛根素抗快速性心律失常的細胞、分子電生理機制研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2000年

5 婁海燕;腦缺血再灌注損傷的炎癥分子生物學機制及羥乙葛根素的保護作用[D];山東大學;2005年

6 閆莉萍;葛根素心肌保護，，調(diào)節(jié)血脂和舒血管的藥理作用機制[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2006年

7 岳紅文;人心肌細胞離子通道及葛根素對豚鼠心肌細胞離子通道影響的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1997年

8 柴欣樓;葛根素涂層支架對再狹窄的防治及其分子機制研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2006年

9 張三印;葛根素誘導(dǎo)血管生成的作用及分子機制研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2006年

10 劉西京;葛根素衍生物4ac納米粒的制備和體內(nèi)外評價[D];成都中醫(yī)藥大學;2006年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 馮倩;自噬在葛根素促成骨細胞增殖、分化和礦化中的作用[D];南京中醫(yī)藥大學;2019年

2 李丹;葛根素對高糖誘導(dǎo)RSC96細胞凋亡和自噬的影響[D];湖北民族大學;2019年

3 李雪蓮;葛根素協(xié)同5-FU抗結(jié)腸癌的藥效機制研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2019年

4 李洋;葛根素對盆底器官脫垂患者盆底成纖維細胞膠原代謝的影響[D];武漢大學;2017年

5 匡慕予;低溫提取葛根素條件及其抗氧化活性研究[D];云南大學;2017年

6 胡偉倫;天然產(chǎn)物葛根及薄荷有效成分的溶劑浮選分離富集方法研究[D];北京化工大學;2018年

7 袁亭亭;生物催化葛根素脂肪酸酯合成及其生理活性研究[D];華南理工大學;2018年

8 王s

本文編號：2593810