發(fā)布時(shí)間：2024-07-02 20:42

　　目的:確證血液特異性mRNA分子存在人群多態(tài)性,并可利用這種多態(tài)性進(jìn)行混合斑個(gè)體識(shí)別。方法:本課題利用復(fù)合擴(kuò)增技術(shù)(multiplex PCR)和單堿基延伸技術(shù)(SNaPshot)對(duì)血液特異性mRNA分子上的SNP位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。構(gòu)建針對(duì)5個(gè)血液特異性基因的16個(gè)SNP位點(diǎn)的檢測(cè)試劑盒方法如下:(1)通過(guò)文獻(xiàn)尋找血液特異性mRNA分子,同時(shí)利用NCBI的dbSNP數(shù)據(jù)庫(kù)尋找這些基因上的SNP位點(diǎn)。(2)對(duì)篩選出的SNP位點(diǎn)利用Primer3軟件設(shè)計(jì)引物。(3)對(duì)每對(duì)設(shè)計(jì)好的引物進(jìn)行引物特異性和體液特異性檢測(cè)。(4)將所有引物進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增,并調(diào)整復(fù)合擴(kuò)增體系。(5)利用SNaPshot技術(shù)檢測(cè)16個(gè)血液特異性SNP位點(diǎn),得出分型結(jié)果。(6)對(duì)構(gòu)建好的體系進(jìn)行應(yīng)用性驗(yàn)證并計(jì)算法醫(yī)學(xué)參數(shù),包括人群多態(tài)性,和對(duì)混合斑檢測(cè)能力的驗(yàn)證。結(jié)果:1、成功構(gòu)建了基于毛細(xì)管電泳平臺(tái)(CE)利用SNaPshot技術(shù)檢測(cè)16個(gè)血液特異性SNP位點(diǎn)的檢測(cè)試劑盒。2、對(duì)山西人群進(jìn)行多態(tài)性統(tǒng)計(jì),這一體系的個(gè)體識(shí)別能力達(dá)到0.99929。3、利用該檢測(cè)體系對(duì)混合斑進(jìn)行分析,在進(jìn)行血液供者占比為1%的極度不平衡混合斑檢測(cè)...

【文章頁(yè)數(shù)】：52 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖116個(gè)血液特異性mRNA分型檢測(cè)結(jié)果

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文12圖116個(gè)血液特異性mRNA分型檢測(cè)結(jié)果圖中藍(lán)色峰代表鳥(niǎo)嘌呤（G）；綠色代表腺嘌呤（A）；黑色代表胞嘧啶（C）；紅色代表胸腺嘧啶（T）。圖片展示的是5ng血液模板所獲得的分型結(jié)果。3討論許多混合斑樣本由多人多種體液構(gòu)成，且這種檢材往往伴隨著極度不平衡混....

圖1陰道分泌液，唾液，精液，皮膚特異性檢測(cè)結(jié)果

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文222.5混合斑檢測(cè)結(jié)果很多在案發(fā)現(xiàn)場(chǎng)發(fā)現(xiàn)的檢材是混合斑檢材，我們這一課題的目的也在于解決多人構(gòu)成的混合斑和極度不平衡混合斑問(wèn)題。因此我們制作了兩種體液構(gòu)成的極度不平衡混合斑樣本和多人多種體液構(gòu)成的極度不平衡混合斑樣本。對(duì)于前者，我們將血液RNA分別與唾液....

圖2月經(jīng)血特異性檢測(cè)結(jié)果

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文23圖2月經(jīng)血特異性檢測(cè)結(jié)果利用本體系對(duì)5ng月經(jīng)血模板進(jìn)行檢測(cè)電泳結(jié)果圖�？蓹z測(cè)到大部分靜脈血特異性SNP位點(diǎn)，但大部分峰的峰高低于500RFU。圖3靈敏度檢測(cè)結(jié)果上圖表示1ngRNA模板經(jīng)電泳檢測(cè)分型結(jié)果圖，下圖表示0.1ngRNA模板經(jīng)電泳檢測(cè)結(jié)果圖....

圖3靈敏度檢測(cè)結(jié)果

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文23圖2月經(jīng)血特異性檢測(cè)結(jié)果利用本體系對(duì)5ng月經(jīng)血模板進(jìn)行檢測(cè)電泳結(jié)果圖。可檢測(cè)到大部分靜脈血特異性SNP位點(diǎn)，但大部分峰的峰高低于500RFU。圖3靈敏度檢測(cè)結(jié)果上圖表示1ngRNA模板經(jīng)電泳檢測(cè)分型結(jié)果圖，下圖表示0.1ngRNA模板經(jīng)電泳檢測(cè)結(jié)果圖....

本文編號(hào)：3999983