發(fā)布時間：2019-02-26 13:58

【摘要】：目的：放射性皮膚損傷是常見的由射線引起的皮膚炎性反應(yīng),其中急性放射性皮膚損傷是腫瘤放射治療中最常見的并發(fā)癥,約90%以上的放療病人會出現(xiàn)紅斑及以上皮膚反應(yīng),可引起局部感染,疼痛,嚴(yán)重情況下導(dǎo)致治療中斷,造成腫瘤控制率和治愈率的降低。在皮膚的免疫炎性反應(yīng)中,趨化因子在T淋巴細(xì)胞歸巢的多步模式中起到了重要作用。CCL27(CC chemokine ligand 27,CCL27)是一種小分子分泌蛋白趨化因子,其分布具有組織和細(xì)胞特異性,主要由皮膚組織中的角質(zhì)形成細(xì)胞分泌。因此,本研究采用人角質(zhì)形成細(xì)胞,HaCaT細(xì)胞,經(jīng)X射線照射后,觀察輻射對CCL27分泌的影響。方法：本研究采用HaCaT細(xì)胞,經(jīng)2Gy和5Gy的X射線照射后,用DCFH-DA探針孵育,檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平。同時采用ELISA方法,檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中CCL27的濃度和腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor-a,TNF-a)的濃度。繼而以活性氧(ROS)清除劑5mM的N-乙酰半胱氨酸(N-Acetylcysteine, NAC)預(yù)處理細(xì)胞,經(jīng)2Gy和5Gy的X射線照射后,分別檢測細(xì)胞內(nèi)ROS的濃度以及培養(yǎng)液中TNF-α、CCL27的濃度。繼而分別用H2O2、TNF-α預(yù)處理細(xì)胞,檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中CCL27的濃度。此外,以脂質(zhì)體為載體,將TNF-α siRNA轉(zhuǎn)染至HaCaT細(xì)胞中,經(jīng)照射后,用DCFH-DA探針檢測細(xì)胞內(nèi)ROS的表達(dá)含量。同時,單獨采用H2O2處理細(xì)胞,經(jīng)ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α的濃度。最后,以外源性的TNF-α處理細(xì)胞,檢測細(xì)胞內(nèi)ROS的含量。結(jié)果：受照射細(xì)胞內(nèi)ROS水平增高,培養(yǎng)液中的TNF-α和CCL27的濃度增加。經(jīng)NAC預(yù)處理后,受照細(xì)胞培養(yǎng)液中的RCS、TNF-α以及CCL27的濃度下降。經(jīng)H202和TNF-α分別處理后,細(xì)胞培養(yǎng)液中CCL27濃度升高。將siRNA轉(zhuǎn)入細(xì)胞后,經(jīng)X線照射,細(xì)胞內(nèi)ROS的水平降低。H2O2可以促進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α濃度的增加。反之,用外源性的TNF-α處理細(xì)胞也可以導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)ROS的水平升高。結(jié)論：輻射能夠誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞對CCL27分泌的增加。其主要作用機(jī)制與TNF-α與ROS的交互作用有關(guān)。對放射性皮膚損傷的研究具有一定價值。
[Abstract]:Objective: radiation-induced skin injury is a common skin inflammatory reaction caused by radiation, among which acute radiation-induced skin injury is the most common complication in radiotherapy of tumors. More than 90% of radiation-treated patients will have erythema or more skin reactions. Can cause local infection, pain, serious cases lead to treatment interruption, resulting in the reduction of tumor control rate and cure rate. Chemokine plays an important role in the multi-step pattern of T lymphocyte homing in skin immune inflammatory reaction. CCL 27 (CC chemokine ligand 27 (CCL 27) is a small molecule secretory protein chemokine whose distribution is tissue-and cell-specific. It is mainly secreted by keratinocytes in the skin tissue. In this study, human keratinocytes and HaCaT cells were irradiated by X-ray to observe the effect of radiation on CCL27 secretion. Methods: HaCaT cells were exposed to X-ray irradiation of 2Gy and 5Gy and incubated with DCFH-DA probe to detect the level of reactive oxygen species (reactive oxygen species,ROS) in the cells. At the same time, the concentration of CCL27 and tumor necrosis factor (Tumor necrosis factor-a,TNF-a (TNF-(Tumor necrosis factor-a,TNF-a) in cell culture medium were detected by ELISA. Then the cells were pretreated with N-acetylcysteine (NAC) of reactive oxygen species (ROS) scavenger 5mM. After X-ray irradiation with 2Gy and 5Gy, the concentration of ROS in the cells and the concentrations of TNF- 偽 and CCL27 in the culture medium were measured respectively. Then the cells were pretreated with H _ 2O _ 2 and TNF-偽 respectively to detect the concentration of CCL27 in the culture medium. In addition, TNF- 偽 siRNA was transfected into HaCaT cells with liposome as vector. After irradiation, the expression of ROS in HaCaT cells was detected by DCFH-DA probe. At the same time, the cells were treated with H2O2 alone, and the concentration of TNF- 偽 in the culture medium was detected by ELISA. Finally, the cells were treated with exogenous TNF- 偽 to detect the content of ROS in the cells. Results: the level of ROS in irradiated cells increased, and the concentration of TNF- 偽 and CCL27 in culture medium increased. After pretreatment with NAC, the concentration of RCS,TNF- 偽 and CCL27 in the culture medium of irradiated cells decreased. After treated with H2O2 and TNF- 偽 respectively, the concentration of CCL27 in the culture medium increased. After siRNA was transferred into the cells, the intracellular ROS level was decreased by X-ray irradiation. H2O2 could promote the increase of TNF- 偽 concentration in the cell culture medium. On the other hand, exogenous TNF- 偽 treatment can also lead to the increase of intracellular ROS level. Conclusion: radiation can induce the increase of CCL27 secretion in keratinocytes. The main mechanism of action is related to the interaction between TNF- 偽 and ROS. It has some value in the study of radiation skin injury.
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R730.55

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本文編號：2430838