發(fā)布時間：2020-11-14 18:31

　　 【目的】通過氯化鋁誘導人神經(jīng)母細胞瘤細胞（SH-SY5Y）死亡，加入凋亡和程序性壞死的特異性抑制劑及MAPK信號通路的抑制劑，初步探討鋁致神經(jīng)細胞死亡與MAPK信號通路的關(guān)系。 【方法】1.4mmol/L的AlCl36H2O染毒SH-SY5Y細胞模擬鋁致神經(jīng)細胞死亡模型,用凋亡的特異性抑制劑zVAD-fmk（濃度為20μmol/L）抑制凋亡發(fā)生，用程序性壞死的特異性抑制劑necrostatin-1（Nec-1，濃度為60μmol/L）抑制程序性壞死發(fā)生，檢測不同組間細胞活力的變化，用流式細胞術(shù)檢測凋亡率壞死率的差異，用蛋白印跡法檢測MAPK信號通路蛋白及其磷酸化水平的改變。2.4mmol/L的AlCl36H2O染毒SH-SY5Y細胞模擬鋁致神經(jīng)細胞死亡模型，用MAPK信號通路的特異性抑制劑（SB203580、SP600125、U0126濃度分別為10μmol/L，15μmol/L，10μmol/L）抑制相關(guān)分子的磷酸化，CCK8法檢測細胞活力的變化，流式細胞術(shù)檢測凋亡率和壞死率的差異，蛋白印跡法檢測MAPK信號通路蛋白及其磷酸化水平的改變。 【結(jié)果】1. CCK-8法檢測細胞活力結(jié)果顯示與空白對照組、溶劑對照組、zVAD-fmk對照組和Nec-1對照組相比較，染鋁組、凋亡抑制組和程序性壞死抑制組的細胞活力下降（P0.01），與染鋁組相比較，程序性壞死抑制組和凋亡抑制組的細胞活力上升（P0.05）。流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率與壞死率結(jié)果顯示，與空白對照組、溶劑對照組、zVAD-fmk對照組和Nec-1對照組相比較，染鋁組、凋亡抑制組和程序性壞死抑制組的凋亡率和壞死率上升（P0.01）；與染鋁組相比較，凋亡抑制組和程序性壞死抑制組的凋亡率和壞死率下降（P0.01）。蛋白免疫印跡結(jié)果顯示，與空白對照組、溶劑對照組、zVAD-fmk對照組和Nec-1對照組相比較，染鋁組、凋亡抑制組和程序性壞死抑制組p38磷酸化水平升高，ERK1/2磷酸化水平下降（P0.05）；與染鋁組相比較，程序性壞死抑制組的p38磷酸化水平下降（P0.01），ERK1/2磷酸化水平上升（P0.05），凋亡抑制組的ERK1/2磷酸化水平上升（P0.05）。 2.（1）細胞活力結(jié)果顯示：1）與空白對照組，溶劑對照組，SB203580對照組相比較，染鋁組和SB203580組的細胞活力下降（P0.01），與染鋁組相比較，SB203580組的細胞活力上升（P0.01）。2）與空白對照組，溶劑對照組和SP600125對照組相比較，染鋁組，SP600125組的細胞活力下降（P0.01）。3）與空白對照組，溶劑對照組和U0126對照組相比較，染鋁組和U0126組差異有統(tǒng)計學意義（P0.01）；與染鋁組相比較，U0126組的細胞活力明顯下降（P0.01）。 （2）流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率與壞死率結(jié)果顯示：1）與空白對照組，溶劑對照組和SB203580對照組相比較，染鋁組和SB203580組凋亡率和壞死率上升，差別有統(tǒng)計學意義（P0.01）；與染鋁組相比較，SB203580組的凋亡和壞死率明顯下降（P0.01）。2）與對照組相比較，染鋁組和SP600125組凋亡和壞死率上升（P0.01）；與染鋁組相比較，SP600125組的凋亡和壞死率下降（P0.05）。3）與空白對照組和溶劑對照組相比較，U0126對照組，染鋁組和U0126組凋亡和壞死率上升（P0.05）；與染鋁組相比較， U0126組凋亡率和壞死率差別有統(tǒng)計學意義（P0.01），凋亡率和壞死率分別上升了1.91倍和0.9倍，凋亡率上升更明顯。 （3）1)各組的p38蛋白印跡結(jié)果顯示，與空白對照組，溶劑對照組相比較，SB203580對照組的磷酸化水平明顯下降（P0.01），染鋁組和SB203580組的p38磷酸化水平升高（P0.01）；與染鋁組相比較，SB203580組的p38信號通路磷酸化水平下降（P0.05）。2)各組的JNK蛋白印跡結(jié)果顯示在空白對照組和溶劑對照組可見磷酸化的JNK，SP600125對照組、染鋁組、SP600125組均未見有磷酸化,差別無統(tǒng)計學意義（P0.05）。3)各組的ERK蛋白印跡結(jié)果顯示與空白對照組、溶劑對照組相比較，U0126對照組、染鋁組、U0126組的ERK磷酸化水平下降（P0.01）；與染鋁組相比較，U0126組的ERK信號通路磷酸化水平差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 【結(jié)論】1.鋁誘導SH-SY5Y細胞發(fā)生凋亡和程序性壞死，以程序性壞死為主。2.在鋁誘導SH-SY5Y細胞死亡過程中，MAPK信號通路中p38信號通路激活促使細胞發(fā)生程序性壞死，p38信號通路是否參與凋亡還有待進一步研究；ERK信號通路失活參與了鋁致SH-SY5Y細胞凋亡和程序性壞死，但ERK信號通路在凋亡過程中的作用更明顯。本實驗中未觀察到JNK信號通路參與鋁致SH-SY5Y細胞死亡
【學位單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2014
【中圖分類】：R114
【文章目錄】：
英文縮略詞表
中文摘要
Abstract
前言
    參考文獻
第一節(jié) 鋁致 SH-SY5Y 細胞死亡過程中 MAPK 信號通路的作用
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
    參考文獻
第二章 抑制 MAPK 信號通路后鋁致 SH-SY5Y 細胞死亡情況的變化
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
    參考文獻
總結(jié)
綜述：程序性壞死及其機制研究進展
    參考文獻
致謝
個人簡歷

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本文編號：2883816