發(fā)布時(shí)間：2020-11-15 03:30

　　 目的:三鄰甲苯基磷酸酯(Tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP)在工業(yè)及日常生活上應(yīng)用廣泛,TOCP對(duì)女性生殖系統(tǒng)有一定的損傷,但其作用機(jī)制尚不清楚。本文擬研究TOCP對(duì)小鼠卵巢和卵巢顆粒細(xì)胞的損傷及其可能機(jī)制,并初步探討茶多酚(Tea polyphenols,TP)對(duì)TOCP誘導(dǎo)的小鼠卵巢和卵巢顆粒細(xì)胞損傷是否具有保護(hù)作用及其可能機(jī)制。方法:用Western blot檢測(cè)TOCP及TP干預(yù)后TOCP對(duì)小鼠卵巢組織及卵巢顆粒細(xì)胞自噬的影響;用活性氧檢測(cè)試劑盒檢測(cè)TOCP及TP干預(yù)后TOCP對(duì)小鼠卵巢組織及卵巢顆粒細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響;用MTT法檢測(cè)TOCP及TP干預(yù)后TOCP對(duì)小鼠卵巢顆粒細(xì)胞活性的影響;用透射電子顯微鏡(Transmission electron microscopy,TEM)檢測(cè)TOCP及TP干預(yù)后TOCP對(duì)小鼠卵巢顆粒細(xì)胞自噬的影響。結(jié)果:用不同劑量的TOCP(0,100,200,400 mg/kg)給小鼠連續(xù)灌胃14天,結(jié)果顯示,TOCP可顯著增加小鼠卵巢組織中自噬蛋白LC3-II/LC3-I的比例以及Beclin1和Atg5表達(dá)量,表明TOCP可誘導(dǎo)小鼠卵巢組織自噬。同時(shí),TOCP還可增加小鼠卵巢組織中MDA含量,降低GSH含量以及SOD和GSH-PX活性,表明TOCP可誘導(dǎo)小鼠卵巢組織產(chǎn)生氧化應(yīng)激。而TP預(yù)處理可抑制TOCP對(duì)小鼠卵巢組織氧化應(yīng)激和自噬的誘導(dǎo)。提示TP可通過(guò)抑制小鼠卵巢組織產(chǎn)生氧化應(yīng)激,從而抑制小鼠卵巢組織自噬。用不同濃度TOCP(0,0.125,0.25,0.5 mM)處理原代培養(yǎng)的小鼠卵巢顆粒細(xì)胞48小時(shí),MTT結(jié)果顯示,TOCP呈濃度依賴式地抑制小鼠卵巢顆粒細(xì)胞活性(P0.05);同時(shí)TOCP可顯著增加體外培養(yǎng)的小鼠卵巢顆粒細(xì)胞中自噬蛋白LC3-II/LC3-I的比例以及Beclin1和Atg5表達(dá)量,表明TOCP可誘導(dǎo)小鼠卵巢顆粒細(xì)胞自噬。TOCP可顯著增加小鼠卵巢顆粒細(xì)胞中MDA含量,降低GSH含量以及SOD和GSH-PX活性,表明TOCP可誘導(dǎo)小鼠卵巢顆粒細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激。而TP預(yù)處理可挽救TOCP對(duì)小鼠卵巢顆粒細(xì)胞活性的抑制(P0.05);同時(shí),TP預(yù)處理還可顯著抑制TOCP對(duì)小鼠卵巢顆粒細(xì)胞氧化應(yīng)激。Western blot結(jié)果顯示,TP預(yù)處理可降低TOCP處理組中的LC3-II/LC3-I的比例以及Beclin1和Atg5表達(dá)量;TEM結(jié)果顯示,TOCP處理組的細(xì)胞中均出現(xiàn)大量的自噬泡,而TP預(yù)處理后可顯著減少TOCP處理組中細(xì)胞的自噬泡數(shù)量。提示TP可通過(guò)抑制細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激,從而抑制TOCP誘導(dǎo)的小鼠卵巢顆粒細(xì)胞自噬。結(jié)論:TOCP可通過(guò)誘導(dǎo)小鼠卵巢組織及其顆粒細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激而導(dǎo)致自噬并造成損傷;TP可通過(guò)抑制TOCP誘導(dǎo)的卵巢組織及其顆粒細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激而抑制細(xì)胞自噬的發(fā)生,并對(duì)TOCP引起卵巢及其顆粒細(xì)胞的損傷起保護(hù)作用。
【學(xué)位單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R114
【部分圖文】：

用不同劑量的 TOCP（0, 100, 200, 400 mg/kg）給小鼠連續(xù)灌胃給藥 14 d 后，用 Western Blot 檢測(cè)卵巢組織內(nèi) LC3、Atg5 和 Beclin1 的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TOCP 可使小鼠卵巢組織內(nèi) LC3-II/LC3-I 的比例以及 Atg5 和 Beclin1 的表達(dá)量顯著增加（圖 1），提示 TOCP 可誘導(dǎo)小鼠卵巢組織自噬。

第 3 章 結(jié)果制 GSH 含量；并且 TOCP 還顯著抑制小鼠卵巢組織內(nèi) GSH-PX 的活性（圖 2），提示 TOCP 可誘導(dǎo)小鼠卵巢組織產(chǎn)生氧化應(yīng)激。

圖 3 TP 抑制 TOCP 誘導(dǎo)的小鼠卵巢組織氧化應(yīng)激Fig.3. TP inhibits TOCP-induced oxidative stress in mouse ovarian tissue. Ovaries wereobtained from the mice treated with 0, 400 mg/kg/day TOCP and 400 mg/kg/day TOCP plus 100mg/kg/day for 14 days. Then the contents of MDA (A) and GSH (B) and the activities of SOD (C)and GSH-PX (D) were determined. Data were analyzed by one-way ANOVA. n=8, *P< 0.05 vsthe control group,＃P< 0.05 vs the TOCP-treated group.3.4 TP 抑制 TOCP 誘導(dǎo)的小鼠卵巢組織自噬用 0, 400 mg/kg TOCP 及 400 mg/kg TOCP+100 mg/kg TP 給小鼠連續(xù)灌胃給藥 14 d 后，用 Western Blot 檢測(cè)卵巢組織內(nèi) LC3、Atg5 和 Beclin1 的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與 TOCP 處理組相比，TP 預(yù)處理可使小鼠卵巢組織內(nèi) LC3-II/LC3-I的比例以及 Atg5 和 Beclin1 的表達(dá)量顯著降低（圖 4），提示 TP 可抑制 TOCP誘導(dǎo)的小鼠卵巢組織自噬。
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