發(fā)布時(shí)間：2020-11-13 10:50

　　 目的:研究鋁對(duì)精子線粒體的損傷作用,闡明鋁對(duì)精子質(zhì)量產(chǎn)生負(fù)面影響的作用機(jī)理,為鋁引起的男性精子質(zhì)量減低的防治提供理論依據(jù)。方法:取體重為180~200g雄性Wistar大鼠96只,根據(jù)飲水中三氯化鋁對(duì)大鼠的半數(shù)致死量(LD_(50)),采用自然飲水法給予雄性Wistar大鼠慢性鋁暴露,設(shè)置正常組、低劑量組、中劑量組高劑量組,每組隨機(jī)分配24只,各組實(shí)驗(yàn)大鼠每千克體重每天的暴露劑量依次為(純水,0 mg)、(~1_(20)LD50,64.18mg)、(~1_(10)LD50,128.36mg)及(_5~1LD50,256.72mg),暴露時(shí)間為16周。16周后,獲取大鼠睪丸組織、附睪頭部組織及附睪精子。對(duì)睪丸組織進(jìn)行SOD活性及MDA含量檢測(cè);對(duì)附睪頭部組織進(jìn)行透射電鏡分析,觀察其內(nèi)的精子線粒體;對(duì)于附睪精子,除進(jìn)行精子質(zhì)量分析外,還采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)精子的線粒體膜電位及精子線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔狀態(tài),運(yùn)用巢式PCR技術(shù)檢測(cè)精子線粒體DNA的完整性,運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量法檢測(cè)精子線粒體DNA的相對(duì)拷貝數(shù)。結(jié)果:各劑量鋁暴露組大鼠睪丸組織SOD活性明顯低于對(duì)照組(P0.01),SOD活性與鋁暴露劑量呈負(fù)相關(guān)(r_s=-0.861,P0.001);睪丸組織MDA含量明顯高于對(duì)照組(P0.01),MDA含量與鋁暴露劑量呈正相關(guān)(r_s=0.459,P0.001)。精子質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果顯示,各劑量鋁暴露組大鼠其附睪的精子密度(P0.05)、前向運(yùn)動(dòng)精子百分比(P0.01)均明顯低于對(duì)照組,且隨著鋁暴露劑量的增加,其數(shù)值降低越明顯;死精子百分比(P0.01)、畸形精子百分比(P0.01)明顯高于對(duì)照組,且隨著鋁暴露劑量的增加,其百分比增高越明顯。電鏡下觀察到隨著鋁劑量的增加,鋁暴露組大鼠附睪精子線粒體腫脹越明顯。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)的結(jié)果顯示,各劑量鋁暴露組精子線粒體膜電位均低于對(duì)照組(P0.01),線粒體膜電位與鋁劑量呈負(fù)相關(guān)(r_s=-0.819,P0.001);精子線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔處于病理性開放狀態(tài)的百分比均高于對(duì)照組(P0.01),病理性開放狀態(tài)的線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔的百分比與鋁劑量呈正相關(guān)(r_s=0.867,P0.001)。各劑量鋁暴露組精子線粒體DNA拷貝數(shù)均高于對(duì)照組(P0.01),線粒體DNA拷貝數(shù)與鋁劑量呈正相關(guān)(r_s=0.782,P0.001);未檢測(cè)到線粒體DNA存在大片段的缺失。結(jié)論:鋁暴露可引起精子線粒體腫脹、膜電位下降、膜通透性轉(zhuǎn)換孔病理性開放及mtDNA拷貝數(shù)上調(diào),并因此導(dǎo)致精子質(zhì)量下降。鋁損傷精子線粒體的機(jī)制可能與ROS攻擊有關(guān)。
【學(xué)位單位】：右江民族醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R114
【部分圖文】：

圖 1 精子及線粒體指標(biāo)有很多，在精子質(zhì)量的研究中，與線粒體損傷相關(guān)構(gòu)、線粒體功能狀態(tài)及 mtDNA 等方面。線粒體作為細(xì)學(xué)顯微鏡難以對(duì)其進(jìn)行觀察，透射電鏡技術(shù)是研究線粒]運(yùn)用透射電鏡技術(shù)，觀察到男性不育癥患者其精子線粒

23圖 3-1 各組大鼠睪丸組織顯微鏡下結(jié)構(gòu)（HE 染色，800×）Figure 3-1 The tissue structure of the testes of each group of rats（HE staining, 800×）正常組，生精小管內(nèi)有大量的精子；B：低劑量組，生精小管內(nèi)精子數(shù)量減少，與睪丸間質(zhì)出現(xiàn)剝離；C：中劑量組，生精小管內(nèi)精子數(shù)量減少，生精上皮細(xì)剝離明顯；D：高劑量組，生精上皮變薄，各級(jí)間生精細(xì)胞出現(xiàn)斷層：Normal group. There are a large number of sperm in the seminiferous tubules;；B：LowThe number of sperm in the seminiferous tubules decreased, and the spermatogenic epitheli testicular stroma were peeled off；C：Medium-dose group. The number of sperm in theerous tubules decreased, and the spermatogenic epithelial cells and testicular interstitial peevious；D：High-dose group. The spermatogenic epithelium becomes thinner, and thetogenic cells in some stages are missing.

24圖 3-2 實(shí)驗(yàn)中觀察到的大鼠精子形態(tài)（伊紅染色）Figure 3-2 Morphology of rat sperm observed in the experiment (Eosin staining)[注] A:正常精子；B:卷尾；C:折尾；D:尾部鞘膜斷裂；E:短尾；F:無尾；G:無頭；H:頭部畸形Note:A: normal sperm; B: sperm with a curl at the tail; C: tail folded sperm; D: sperm with a broken tailsheath; E: short tail sperm; F: tailless sperm; G: headless sperm; H: sperm with head deformity.
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2882106