發(fā)布時間：2020-11-13 10:50

　　 目的:研究鋁對精子線粒體的損傷作用,闡明鋁對精子質量產(chǎn)生負面影響的作用機理,為鋁引起的男性精子質量減低的防治提供理論依據(jù)。方法:取體重為180~200g雄性Wistar大鼠96只,根據(jù)飲水中三氯化鋁對大鼠的半數(shù)致死量(LD_(50)),采用自然飲水法給予雄性Wistar大鼠慢性鋁暴露,設置正常組、低劑量組、中劑量組高劑量組,每組隨機分配24只,各組實驗大鼠每千克體重每天的暴露劑量依次為(純水,0 mg)、(~1_(20)LD50,64.18mg)、(~1_(10)LD50,128.36mg)及(_5~1LD50,256.72mg),暴露時間為16周。16周后,獲取大鼠睪丸組織、附睪頭部組織及附睪精子。對睪丸組織進行SOD活性及MDA含量檢測;對附睪頭部組織進行透射電鏡分析,觀察其內的精子線粒體;對于附睪精子,除進行精子質量分析外,還采用流式細胞術檢測精子的線粒體膜電位及精子線粒體膜通透性轉換孔狀態(tài),運用巢式PCR技術檢測精子線粒體DNA的完整性,運用實時熒光定量法檢測精子線粒體DNA的相對拷貝數(shù)。結果:各劑量鋁暴露組大鼠睪丸組織SOD活性明顯低于對照組(P0.01),SOD活性與鋁暴露劑量呈負相關(r_s=-0.861,P0.001);睪丸組織MDA含量明顯高于對照組(P0.01),MDA含量與鋁暴露劑量呈正相關(r_s=0.459,P0.001)。精子質量檢測結果顯示,各劑量鋁暴露組大鼠其附睪的精子密度(P0.05)、前向運動精子百分比(P0.01)均明顯低于對照組,且隨著鋁暴露劑量的增加,其數(shù)值降低越明顯;死精子百分比(P0.01)、畸形精子百分比(P0.01)明顯高于對照組,且隨著鋁暴露劑量的增加,其百分比增高越明顯。電鏡下觀察到隨著鋁劑量的增加,鋁暴露組大鼠附睪精子線粒體腫脹越明顯。流式細胞術檢測的結果顯示,各劑量鋁暴露組精子線粒體膜電位均低于對照組(P0.01),線粒體膜電位與鋁劑量呈負相關(r_s=-0.819,P0.001);精子線粒體膜通透性轉換孔處于病理性開放狀態(tài)的百分比均高于對照組(P0.01),病理性開放狀態(tài)的線粒體膜通透性轉換孔的百分比與鋁劑量呈正相關(r_s=0.867,P0.001)。各劑量鋁暴露組精子線粒體DNA拷貝數(shù)均高于對照組(P0.01),線粒體DNA拷貝數(shù)與鋁劑量呈正相關(r_s=0.782,P0.001);未檢測到線粒體DNA存在大片段的缺失。結論:鋁暴露可引起精子線粒體腫脹、膜電位下降、膜通透性轉換孔病理性開放及mtDNA拷貝數(shù)上調,并因此導致精子質量下降。鋁損傷精子線粒體的機制可能與ROS攻擊有關。
【學位單位】：右江民族醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R114
【部分圖文】：

圖 1 精子及線粒體指標有很多，在精子質量的研究中，與線粒體損傷相關構、線粒體功能狀態(tài)及 mtDNA 等方面。線粒體作為細學顯微鏡難以對其進行觀察，透射電鏡技術是研究線粒]運用透射電鏡技術，觀察到男性不育癥患者其精子線粒

23圖 3-1 各組大鼠睪丸組織顯微鏡下結構（HE 染色，800×）Figure 3-1 The tissue structure of the testes of each group of rats（HE staining, 800×）正常組，生精小管內有大量的精子；B：低劑量組，生精小管內精子數(shù)量減少，與睪丸間質出現(xiàn)剝離；C：中劑量組，生精小管內精子數(shù)量減少，生精上皮細剝離明顯；D：高劑量組，生精上皮變薄，各級間生精細胞出現(xiàn)斷層：Normal group. There are a large number of sperm in the seminiferous tubules;；B：LowThe number of sperm in the seminiferous tubules decreased, and the spermatogenic epitheli testicular stroma were peeled off；C：Medium-dose group. The number of sperm in theerous tubules decreased, and the spermatogenic epithelial cells and testicular interstitial peevious；D：High-dose group. The spermatogenic epithelium becomes thinner, and thetogenic cells in some stages are missing.

24圖 3-2 實驗中觀察到的大鼠精子形態(tài)（伊紅染色）Figure 3-2 Morphology of rat sperm observed in the experiment (Eosin staining)[注] A:正常精子；B:卷尾；C:折尾；D:尾部鞘膜斷裂；E:短尾；F:無尾；G:無頭；H:頭部畸形Note:A: normal sperm; B: sperm with a curl at the tail; C: tail folded sperm; D: sperm with a broken tailsheath; E: short tail sperm; F: tailless sperm; G: headless sperm; H: sperm with head deformity.
【參考文獻】

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本文編號：2882106