丙烯酰胺(acrylamide,ACR)是一種水溶性烯烴,作為化工原料生產(chǎn)聚丙烯酰胺。ACR的神經(jīng)毒性在人群流行病學研究中得到充分驗證。慢性ACR中毒患者的主要臨床表現(xiàn)為:手掌多汗蛻皮、四肢麻木、跟腱反射減弱或消失等。在電鏡下腫脹的軸突末端微管(microtubules,MT)數(shù)量異常,但ACR導致MT損傷的機制不清楚。微管相關蛋白(microtubule-associated proteins,MAPs)中最豐富的是MAP2,MAP2最主要的功能是參與調節(jié)MT的組裝過程。鈣蛋白酶(Calpain)是一類依賴于Ca2+激活的中性半胱氨酸水解酶,它具有水解信號酶、細胞骨架蛋白(MAP2和Tau)和膜蛋白的功能,并且與神經(jīng)病的發(fā)生發(fā)展有關。Calpeptin(CP)作為一種人工合成的肽類Calpain抑制劑,具有高效性、特異性及細胞滲透性好等優(yōu)點,與Calpain的活力位點結合,可逆的抑制Calpain的活力。假設由ACR誘導的MT損傷與calpain活力升高,MAP2降解有關。目的為了驗證ACR誘導的MT損傷與calpain活力升高和MAP2降解有關這個假設,探索CP對ACR中毒大鼠MT損傷的干預作用及機制,為ACR中毒的預防與治療提供依據(jù)。方法1.動物處理:適應性飼養(yǎng)后將Wistar大鼠隨機分為4組(每組10只),分別記為對照組、CP組、ACR組、ACR+CP組。對照組的大鼠腹腔注射(intraperitoneal,i.p.)給予生理鹽水;CP組的大鼠給予CP2000μg/kg(i.p.);ACR和ACR+CP組的大鼠給予ACR30 mg/kg(i.p.),給予ACR 1小時后,ACR+CP組給予CP200μg/kg(i.p.)。ACR隔天染毒,3次/周,共4周。CP隔天干預,早晨和晚上各一次,6次/周,共4周。將ACR溶于0.9%的生理鹽水中(濃度為30mg/ml)并以1ml/kg給予大鼠。2.體重及神經(jīng)行為功能觀察:在染毒期間,每周測量體重、后肢撐力、加速轉棒試驗和步態(tài)評分。3.組織形態(tài)觀察:進行HE染色以在光學顯微鏡下觀察脊髓切片的形態(tài)變化。4.免疫組化法分析蛋白表達:應用免疫組織化學方法在光學顯微鏡下觀察m-calpain、μ-calpain、MAP2、α-tubulin和β-tubulin蛋白在脊髓中的表達。5.免疫印跡法蛋白半定量:應用凝膠電泳和半定量免疫印跡方法,對脊髓中m-calpain、μ-calpain、MAP2、α-tubulin和β-tubulin蛋白含量進行半定量分析。6.統(tǒng)計方法:所有實驗數(shù)據(jù)以平均值±標準差(X±s)表示。步態(tài)評分的數(shù)據(jù)用Mann-Whitney U test分析,其它的數(shù)據(jù)采用單因素方差分析(ANOVA)進行分析,組間兩兩比較采用LSD法進行分析。結果1.體重對照組與CP組4周之間基本相似不變;與對照組相比,自第2周開始,ACR組的大鼠體重下降了 5.6%(P0.05),隨著染毒的繼續(xù),這種趨勢更加明顯,到第4周時,ACR組的大鼠體重下降了 8.8%(P0.01);與ACR組相比,自第3周開始,ACR+CP組的大鼠體重增加了4.2%(P0.05),到第4周時,ACR+CP組的大鼠體重增加了6.2%(P0.01),且與對照組比較無顯著性差異(P0.05)。2.行為學指標(1)后肢撐力:對照組與CP組4周之間基本相似不變;與對照組相比,自第2周開始,ACR組的大鼠后肢展寬增加了 26.9%(P0.01),隨著染毒的繼續(xù),這種趨勢更加明顯,到第4周時,ACR組的大鼠后肢展寬增加了34.4%(P0.01);與ACR組相比,自第3周開始,ACR+CP組的大鼠后肢展寬降低了15.9%(P0.01),到第4周時,ACR+CP組的大鼠后肢展寬降低了 16.3%(P0.01),且與對照組比較仍有顯著性差異(p0.05)。(2)加速轉棒試驗:對照組與CP組4周之間基本相似不變。與對照組相比,自第3周開始,ACR組的大鼠潛伏期下降了27.0%(P0.01),隨著染毒的繼續(xù),這種趨勢更加明顯,到第4周時,ACR組的大鼠潛伏期下降了 61.7%(P0.01);與ACR組相比,自第3周開始,ACR+CP組的大鼠潛伏期增加了20.2%(P0.01),到第4周時,ACR+CP組的大鼠潛伏期增加了 70.7%(P0.01),且與對照組比較仍有顯著性差異(P0.05)。(3)步態(tài)評分:對照組與CP組4周之間基本相似不變。與對照組相比,自第2周開始,ACR組的大鼠步態(tài)評分增加了 40%(P0.05),隨著染毒的繼續(xù),這種趨勢更加明顯,到第4周時,ACR組的大鼠步態(tài)評分增加了 150%(P0.01);與ACR組相比,自第3周開始,ACR+CP組的大鼠步態(tài)評分降低了35%(P0.05),到第4周時,ACR+CP組的大鼠步態(tài)評分降低了32%(P0.05),且與對照組比較仍有顯著性差異(P0.05)。3.組織病理在染毒終點,對照組和CP組大鼠的脊髓組織形態(tài)正常,組織結構完整;運動神經(jīng)元的細胞核主要位于細胞中央,核仁清晰。但是ACR組脊髓組織排列疏松,囊泡狀改變;運動神經(jīng)元數(shù)目減少,部分細胞核固縮,核仁溶解甚至消失。與ACR組相比較,ACR+CP組的運動神經(jīng)元形態(tài)趨于正常,數(shù)量略有增加,但仍沒有恢復到對照組的正常水平。4.免疫組織化學與對照組相比,μ-calpain在ACR組和ACR+CP組表達無明顯差異。與對照組相比,m-calpain在ACR組過度表達,與ACR組相比,ACR+CP組中m-calpain的表達降低。與對照組相比,MAP2在ACR組表達減少,與ACR組相比,ACR+CP組中MAP2的表達增加。與對照組相比,α-tubulin在ACR組和ACR+CP組表達無明顯差異。與對照組相比,β-tubulin在ACR組過度表達,與ACR組相比,ACR+CP組中β-tubulin的表達減少。5.免疫印跡法蛋白半定量(1)Calpain與對照組相比,CP組、ACR組和ACR+CP組U-calpain含量的變化差別沒有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與對照組相比,CP組m-calpain含量的變化差別沒有統(tǒng)計學意義(P0.05),ACR組的m-calpain含量增加了41.7%(P0.01),ACR+CP組的m-calpain含量增加了 14.6%(P0.05);然而與ACR組相比,ACR+CP組的m-calpain含量降低了 19.1%(P0.01)。(2)MAP2與對照組相比,CP組MAP2含量的變化差別沒有統(tǒng)計學意義(P0.05),ACR組MAP2的含量下降了43.4%(P0.01)。然而與ACR組相比,ACR+CP組的MAP2含量上升了 67.5%(P0.01)。(3)MT與對照組相比,CP組、ACR組和ACR+CP組α-tubulin含量的變化差別沒有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與對照組相比,CP組β-tubulin含量的變化差別沒有統(tǒng)計學意義(P0.05),ACR組β-tubulin的含量增加23%(P0.01);與ACR組相比,ACR+CP組β-tubulin的含量降低13.1%(P0.05)。結論1.ACR誘導的MT損傷與calpain活力升高和MAP2降解有關,這可能是ACR誘導的MT損傷的機制之一。2.CP通過改變calpain和MAP2干預由ACR引起的MT損傷。
【學位單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R114
【部分圖文】：
呈角狀膨大，稱前角，前角內含有大量運動神經(jīng)元的細胞體，其軸突貫穿白質，??經(jīng)前外側溝走出脊髓，組成脊神經(jīng)的前根，直接支配骨骼肌的運動。脊髓的白質??主要由感覺和運動有髓鞘神經(jīng)纖維組成（縱行排列），詳見圖３－１。脊髓損傷主要??表現(xiàn)為運動障礙、感覺障礙及自主神經(jīng)功能障礙等。ＡＣＲ誘導的神經(jīng)病變在大??鼠模型中主要體現(xiàn)其對大鼠的運動功能損傷。為了與后肢撐力、加速轉棒試驗和??步態(tài)評分行為學指標一致，在本次研宄中我們主要觀察ＡＣＲ對脊髓前角運動神??經(jīng)元形態(tài)的影響。??４６??
【相似文獻】
相關期刊論文 前10條
1 宋歌;呂月濤;狄林林;宗文納;陳伯旺;;早期腸內營養(yǎng)對重癥肺炎大鼠免疫功能的影響分析[J];中國醫(yī)學前沿雜志(電子版);2017年01期
2 葉敏;陳達柔;陳宇中;杜少冰;杜展鑫;李玉鳳;唐珮瑜;楊昌山;朱曉琴;;右美托咪定后處理對大鼠肝缺血再灌注損傷的保護作用[J];臨床醫(yī)學工程;2017年02期
3 王雅樂;李文泉;姚鳳云;;黃連解毒湯對營養(yǎng)性肥胖大鼠的毒性研究[J];光明中醫(yī);2017年10期
4 關智宇;;三七總皂甙對骨折大鼠血管內皮生長因子基因擴增及蛋白表達水平影響的研究[J];臨床醫(yī)藥文獻電子雜志;2017年51期
5 王帥;賈琦珍;陳根元;程勇;張玲;馬春暉;;小花棘豆中毒對大鼠下丘腦—垂體—卵巢軸α-甘露糖苷酶的影響[J];福建農林大學學報(自然科學版);2016年01期
6 周挺;夏菁;李增攀;徐麗艷;韓文文;方建江;;法舒地爾對百草枯致大鼠肺纖維化的干預作用[J];浙江實用醫(yī)學;2016年01期
7 王亞東;李東朋;郭德偉;宋及時;李紅偉;錢偉強;楊波;;富血小板血漿對創(chuàng)傷性顱腦損傷大鼠神經(jīng)功能的保護作用[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2016年05期
8 鄭國祥;于強;;白虎湯對全身炎癥反應綜合征大鼠炎癥因子的影響[J];四川中醫(yī);2015年01期
9 符暉;王橋生;方志雄;劉雁;周斌;彭忠田;梁咸章;;辛伐他汀預處理對大鼠神經(jīng)源性肺水腫的作用及其機制[J];中國動脈硬化雜志;2015年10期
10 商明紅;何龍其;;西維來司鈉對大鼠腦出血保護作用機制的實驗研究[J];現(xiàn)代養(yǎng)生;2017年10期
相關博士學位論文 前10條
1 張雪瑩;LncRNA CD36-005在PCOS大鼠模型子宮中的表達及相關功能的研究[D];吉林大學;2019年
2 潘磊磊;Orexin-A對暈動癥緩解作用機制的研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學;2019年
3 成晨;NPPA基因突變通過激活炎癥和心肌纖維化引起房顫[D];華中科技大學;2019年
4 卞藝斐;馬齒莧對實驗性腸炎大鼠的保護作用及其機制研究[D];中國農業(yè)大學;2018年
5 白方會;正天丸和川芎嗪對偏頭痛模型大鼠三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)神經(jīng)遞質表達的影響[D];南方醫(yī)科大學;2016年
6 頓晶晶;補腎中藥更康顆粒的藥效學及急性毒理實驗研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2016年
7 穆道周;芍藥苷抗抑郁促動力作用的實驗研究[D];南京中醫(yī)藥大學;2016年
8 王躍旗;楓寥腸胃康對腹瀉型腸易激綜合征大鼠結腸動力及氯離子分泌的影響[D];北京中醫(yī)藥大學;2017年
9 王成書;Apelin改善RUPP大鼠模型妊娠結局的作用機制探討[D];河北醫(yī)科大學;2016年
10 李少源;耳甲區(qū)電刺激對CUMS模型大鼠抗抑郁效應及ERK信號通路作用機制[D];中國中醫(yī)科學院;2018年
相關碩士學位論文 前10條
1 金偉中;出生前尼古丁暴露對新生大鼠orexin A呼吸調節(jié)作用的影響[D];復旦大學;2009年
2 胡湘;有氧運動對CUMS大鼠學習記憶及海馬SYP、PSD-95的影響[D];成都體育學院;2019年
3 葉琪;有氧運動對CUMS大鼠下丘腦AVP的影響[D];成都體育學院;2019年
4 關雪峰;MiR-204-5p通過靶基因Cav-1調節(jié)大鼠血管平滑肌細胞增殖的研究[D];吉林大學;2019年
5 牛澤峰;鋅預處理通過促進骨髓間充質干細胞向神經(jīng)元樣細胞分化并降低自噬修復大鼠脊髓缺血再灌注損傷的作用機制研究[D];吉林大學;2019年
6 董陽;Aicardi-Goutieres綜合征相關基因SAMHD1敲除大鼠模型的構建及分析[D];安徽醫(yī)科大學;2019年
7 劉京京;IL-28B在SD大鼠非酒精性脂肪性肝炎形成中的作用研究[D];延安大學;2019年
8 鮑璐璐;TLR4/MyD88/NF-κB信號通路在腹瀉型腸易激綜合征中的作用及機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2019年
9 段聲梁;燒傷大鼠血清對血管內皮細胞通透性影響[D];安徽醫(yī)科大學;2019年
10 胡珊珊;IL-6下調腺苷A3受體信號促進膠原性關節(jié)炎大鼠Thl7細胞分化的機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2019年
本文編號：
2880695
