目的:通過體外預刺激方法制備高干細胞活性與旁分泌功能的心肌球(cardiospheres,CSps)作為移植干細胞,在大鼠急性心肌梗死模型中建立心包腔內(nèi)移植治療途徑,探究CSps移植后的療效與相關(guān)再生機制。方法:從大鼠心臟分離培養(yǎng)CSps,免疫熒光鑒定心臟干細胞標記物的表達情況;使用不同濃度心肌梗死后心包積液(Pericardial fluid with myocardial infarction,PFMI)培養(yǎng)CSps,q PCR檢測干細胞標記物(c-kit、Sca-1和KDR)、心肌細胞標記物(c Tn T)與生長因子(VEGF、b FGF、HGF和IGF-1)轉(zhuǎn)錄水平;與磷酸鹽緩沖液對比,使用基質(zhì)水凝膠混懸CSps置于4℃條件下,檢測兩者對細胞活性的影響;結(jié)扎冠狀動脈左前降支制備急性心肌梗死模型,將Di R標記的CSps—基質(zhì)水凝膠懸液注入大鼠心包腔,觀察心梗4周內(nèi)心功能與形態(tài)學變化,分析CSps體內(nèi)存活,治療效果及其治療機制。結(jié)果:體外培養(yǎng)獲得球狀生長的CSps,使用50%心包積液預處理促進了CSps中干性基因(c-kit、Sca-1和KDR)、心肌細胞c Tn T和生長因子(...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1CSps的體外培養(yǎng)

1CSps的體外培養(yǎng)。A，P2代CSps體外培養(yǎng)形態(tài)；B，不同代數(shù)形成CSpsn=10皿/代）；C，免疫熒光檢測c-kit，Sca-1和KDR在CSps中的表達情況（n實時熒光定量PCR檢測不同培養(yǎng)代數(shù)生長因子（VEGF,bFGF,HGF和....

圖2不同濃度心包腔積液培養(yǎng)液對CSps的刺激作用

暨南大學碩士學位論文中干性基因表達水平，且50%和100%的心包腔積液對干性基因的提高作用顯著強于25%的心包腔積液的作用。分析心包腔積液對CSps中心肌細胞cTnT基因表達水平的影響，結(jié)果如圖2C所示，所有濃度的心包腔積液均可顯著提高cTnT的基因表達水平，且....

圖3CSps-基質(zhì)水凝膠混懸液對CSps的保護作用

基質(zhì)水凝膠對CSps具有保護作用流式細胞儀檢測使用PBS和基質(zhì)水凝膠與CSps混懸，置于4℃下1h、6h胞凋亡情況，結(jié)果如圖3。對照組用PBS與CSps混懸，置于4℃下1h細胞凋亡，并隨著放置時間的延長，凋亡細胞的數(shù)量逐漸增多，良好狀例分別為86....

圖4急性心梗模型制備示意圖

暨南大學碩士學位論文質(zhì)水凝膠混懸液移植CSps于培養(yǎng)皿中，加入3.5μg/mlDiR于37℃孵育30min，并轉(zhuǎn)移至15ml離心管中離心去除PBS，加入0.1ml基質(zhì)水至1.5mlEP管中，4℃條件下運輸?shù)絼游锓�。CSps組進行L留置針注射CSp....

本文編號：4002897