目的:通過構建小鼠穿透性角膜移植模型探討角膜植片細胞衰老對角膜移植免疫排斥反應的影響及機制。方法:1、小鼠角膜移植免疫排斥期間的細胞衰老表型分析。分別以BALB/C或C57BL/6小鼠為角膜供體,BALB/C小鼠為角膜受體構建穿透性角膜移植模型,分為正常組、同系角膜移植組和異系角膜移植組,于移植免疫排斥反應階段收集角膜樣本。通過衰老相關的β-半乳糖苷酶（senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-Gal）染色明確角膜植片的細胞衰老表型,并借助角膜植片冰凍切片分析衰老細胞在角膜中的分布;使用Western Blot分析角膜植片中衰老相關蛋白p16、p21的表達水平。2、供體角膜衰老相關基因p16缺失對小鼠角膜移植免疫排斥反應的影響。分別將野生型和p16缺失型的C57BL/6小鼠作為角膜供體構建異系角膜移植模型,評價角膜供體細胞衰老對角膜移植免疫排斥反應的影響:通過裂隙燈觀察角膜移植免疫排斥反應并記錄角膜植片存活時間;通過免疫熒光實驗評估不同組別角膜植片中炎性細胞的浸潤情況。3、抗衰老藥物ABT-263清除衰老細胞對小鼠角膜移植免疫排斥反應的影響。建立...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.角膜移植免疫排斥期間存在細胞衰老表型(A)正常(Con)、同系(Syn)和異系(Allo)移植組角膜移植免疫排斥期間角膜植片細胞衰老染色結果;(B)三組角膜植片SAβ-Gal染色冰凍切片,觀察細胞衰老表達與分布;(C)Western Blot檢測三組小鼠角膜植片衰老蛋白p16及p21的表達情況。

2、初步明確衰老細胞可通過刺激抗原遞呈細胞活化促進角膜移植免疫排斥反應。圖2.供體角膜衰老相關基因p16缺失對小鼠角膜移植免疫排斥反應的影響(A)正常野生型(WT)角膜供體異系移植組和p16缺失型(p16KO)角膜供體異系移植組術后2周眼前節(jié)大體相;(B)Kaplan-Meier....

圖2.供體角膜衰老相關基因p16缺失對小鼠角膜移植免疫排斥反應的影響(A)正常野生型(WT)角膜供體異系移植組和p16缺失型(p16KO)角膜供體異系移植組術后2周眼前節(jié)大體相;(B)Kaplan-Meier生存分析比較兩組小鼠角膜移植術后植片存活情況;(C)免疫熒光檢測兩組術前及角膜移植免疫排斥期間角膜植片中CD45+炎性細胞的浸潤情況。

圖1.角膜移植免疫排斥期間存在細胞衰老表型(A)正常(Con)、同系(Syn)和異系(Allo)移植組角膜移植免疫排斥期間角膜植片細胞衰老染色結果;(B)三組角膜植片SAβ-Gal染色冰凍切片,觀察細胞衰老表達與分布;(C)WesternBlot檢測三組小鼠角膜植片衰老蛋白p1....

圖3.抗衰老藥物ABT-263可有效清除衰老細胞(A)使用SAβ-Gal染色檢測正常小鼠(Con)、異系移植(Allo)和異系移植并ABT-263干預組(Allo+ABT-263)角膜植片的衰老情況;(B)使用RT-PCR檢測正常、異系移植和異系移植并ABT-263干預組角膜植片中衰老相關基因p16、p21表達情況,**P<0.01、***P<0.001。

圖2.供體角膜衰老相關基因p16缺失對小鼠角膜移植免疫排斥反應的影響(A)正常野生型(WT)角膜供體異系移植組和p16缺失型(p16KO)角膜供體異系移植組術后2周眼前節(jié)大體相;(B)Kaplan-Meier生存分析比較兩組小鼠角膜移植術后植片存活情況;(C)免疫熒光檢測兩組術前....

圖4.清除衰老細胞可以抑制或減輕角膜移植免疫排斥反應(A)異系移植組(Allo)、異系移植并ABT-263干預組(Allo+ABT-263)術后2周眼前節(jié)大體相;(B)Kaplan-Meier生存分析比較兩組小鼠角膜移植術后植片存活情況;(C)RT-PCR檢測正常小鼠(Con)、異系移植(Allo)、異系移植并ABT-263干預組(Allo+ABT-263)的角膜植片中主要炎性相關因子IL-1β、IL-17A、TNF-α、IFN-γ表達情況,*P<0.05、**P<0.01、***P<0.001。

圖3.抗衰老藥物ABT-263可有效清除衰老細胞(A)使用SAβ-Gal染色檢測正常小鼠(Con)、異系移植(Allo)和異系移植并ABT-263干預組(Allo+ABT-263)角膜植片的衰老情況;(B)使用RT-PCR檢測正常、異系移植和異系移植并ABT-263干預組角膜植片....

本文編號：4052611