發(fā)布時間：2020-11-22 10:01

　　 目的:探索TGF-β1誘導Fascin1的表達促進腎癌細胞遷移及侵襲的機制。方法:利用RT-PCR技術(shù)檢測加入TGF-β1前后Fascin1的mRNA水平的變化。通過Western blotting技術(shù)檢測加入TGF-β1前后Fascin1及EMT相關(guān)蛋白水平的變化。用光學顯微鏡及細胞骨架染色觀察加入TGF-β1后細胞形態(tài)及骨架的變化。應(yīng)用Fascin1 siRNA降低Fascin1的表達水平。通過劃痕實驗分析加入TGF-β1前后及用Fascin1 siRNA處理腎癌細胞后,細胞的遷移能力的變化。應(yīng)用Transwell分析加入TGF-β1前后及用Fascin1 siRNA處理腎癌細胞后,細胞的侵襲能力的變化。給予769-P細胞及OSRC細胞ERK及JNK信號通路抑制劑處理后,用Western blotting檢測加入TGF-β1前后Fascin1的表達水平的變化。結(jié)果:相較于對照組,加入TGF-β1后Fascin1的表達水平顯著增加(P0.05)。同時,在加入TGF-β1后,在光學顯微鏡的觀察下,769-P及OSRC細胞的形態(tài)更加趨向于長梭形,與此相對應(yīng)的,在熒光顯微鏡的觀察下,細胞的骨架也會發(fā)生重構(gòu),形成一個長的束狀纖維狀結(jié)構(gòu),沿細胞長軸縱向排列;同時,經(jīng)過Western blotting檢測得出,與EMT發(fā)生相關(guān)的蛋白的水平也發(fā)生了相應(yīng)的陽性改變(P0.05)。經(jīng)過劃痕實驗分析,在加入TGF-β1后,NT組及si-control組的愈合率顯著增加(P0.05),但是經(jīng)過Fascin1 siRNA預(yù)先處理后,由于Fascin1的表達水平下降,再加入TGF-β1后,細胞的愈合率并沒有出現(xiàn)同樣的變化。同樣的,經(jīng)過Transwell分析,加入TGF-β1后,細胞的侵襲能力顯著增加(P0.05),但是經(jīng)過Fascin1 siRNA預(yù)先處理后,同樣由于Fascin1的表達水平下降,細胞的侵襲能力并沒有明顯的改變。與此同時,還發(fā)現(xiàn)在TGF-β1誘導Fascin1的表達水平增加的同時,相應(yīng)的JNK及ERK的磷酸化水平也增加(P0.05),而且在經(jīng)過JNK及ERK信號通路相應(yīng)抑制劑SP600125及FR180204的預(yù)先處理后,會顯著抑制TGF-β1對Fascin1表達水平的促進作用。結(jié)論:TGF-β1會通過ERK及JNK信號通路促進Fascin1的表達水平,進而通過促進腎癌細胞遷移及侵襲的能力,促進腎癌的發(fā)生。
【學位單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R737.11
【部分圖文】：

中國醫(yī)科大學碩士學位論文3 結(jié)果GF-β1 會促進 Fascin1 的表達過 RT-PCR 及 Western blotting 檢測 ，加入 TGF-β1 后，腎癌細胞系中 Fascin1 的表達相較于對照組(0ng/ml)都有了明顯的增加（**P。如下圖所示（圖 1，2）

經(jīng)過 RT-PCR 及 Western blotting 檢測 ，加入 TGF-β1 后，腎癌細胞系 76C 中 Fascin1 的表達相較于對照組(0ng/ml)都有了明顯的增加（**P<0ml）。如下圖所示（圖 1，2）圖 1 RT-PCR 檢測 TGF-β1 對 Fascin1 表達的影響

中國醫(yī)科大學碩士學位論文.2 Fascin1 siRNA 能顯著抑制 Fascin1 表達經(jīng) RT-PCR 及 Western blotting 檢測，加入 Fascin1 siRNA 后，相較于 NT 組i-control 組，F(xiàn)ascin1 的表達水平明顯下降，同時，再次加入 TGF-β1 后，F(xiàn)asc表達水平?jīng)]有明顯的變化（#P<0.05 VS NT 和 Si-control）。如下所示（圖 3，4
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本文編號：2894527