發(fā)布時(shí)間：2020-10-29 17:42

　　 目的:本研究觀察炎癥因子IL 1-β對(duì)高脂負(fù)荷下人腎臟系膜細(xì)胞(Human glomerular mesangial cells,HMCs)C型尼曼匹克蛋白1(Niemann-pick Protein C1,NPC1)表達(dá)的影響,并初步探討NPC1介導(dǎo)的膽固醇積聚導(dǎo)致腎系膜細(xì)胞損傷的作用機(jī)制。方法:體外培養(yǎng)HMCs,將其分為正常對(duì)照組、高脂組、高脂+炎癥組。Western blot檢測(cè)NPC1蛋白含量;酶法檢測(cè)細(xì)胞總膽固醇及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膽固醇濃度;CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖變化;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HMCs細(xì)胞周期;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)NPC1、GRP78、PERK、ATF6、FN、Col IV mRNA的表達(dá);免疫熒光技術(shù)檢測(cè)NPC1、GRP78、FN的熒光強(qiáng)度以及NPC1/LAMP-1共定位。予以NPC1阻斷劑u18666a干預(yù)后,觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膽固醇、細(xì)胞增殖以及GRP78、FN、Col IV mRNA水平的變化。結(jié)果:高脂可促進(jìn)HMCs NPC1的表達(dá),同時(shí)使細(xì)胞總膽固醇及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膽固醇水平增加,增殖加快、S期比例增加、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)分子—GRP78、PERK、ATF6及系膜基質(zhì)成分—FN、Col IV mRNA水平均顯著增加,GRP78、FN的熒光強(qiáng)度也明顯增加;炎癥進(jìn)一步上調(diào)高脂負(fù)荷下上述各指標(biāo)水平。u18666a干預(yù)NPC1后可減輕高脂和炎癥導(dǎo)致的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膽固醇積聚及細(xì)胞損傷。結(jié)論:炎癥可通過(guò)上調(diào)NPC1表達(dá),加重高脂負(fù)荷下腎系膜細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膽固醇積聚,誘發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及細(xì)胞損傷。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R692
【部分圖文】：

各組HMCsNPC1的表達(dá)

檢測(cè)各組 HMCs NPC1 的表達(dá)&平均熒光強(qiáng)度 (400×)。*p<0.05,**p<0.01 與對(duì)照組比較▲p<0.05 與高脂+炎癥組比較。mmunofluorescence detection of NPC1 & Mean fluorescence intensity in different groups(400×). *p<0.05,**p<0.01 vs CTL group, ▲p<0.05 vs LDL+IL-1β group./LAMP-1 免疫熒光共定位相關(guān)膜蛋白（Lysosome Associated Membrane Protein-1,LAMP-1）是溶記蛋白，共聚焦顯微鏡下觀察 NPC1 和 LAMP-1 共定位。NPC1 在呈紅光，LAMP-1 在 FITC 激發(fā)呈綠光。半定量分析共定位系數(shù)rrelation，結(jié)果（圖 3）所示：與對(duì)照組（0.52±0.03）相比，高脂+

29PC1/LAMP-1 免疫熒光共定位&共定位系數(shù) (400×).*p<0.05 與對(duì)照組比較，高脂+炎癥組比較。unofluorescence colocalization of NPC1/LAMP-1 & Pearson's Colocalization igroups (400×). *p<0.05 vs CTL group, ▲p<0.05 vs LDL+IL-1β group.胞內(nèi)總膽固醇及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膽固醇濃度 4）所示：細(xì)胞內(nèi)總膽固醇濃度及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膽固醇濃度，與對(duì)照組（64.117±5.41）相比，高脂組（88.13±6.98，65.99±3.97）、高脂+炎癥10.46，92.39±4.83）均顯著增加（P 分別<0.05，<0.001）；與高脂癥+炎癥組細(xì)胞內(nèi)及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膽固醇沉積進(jìn)一步增加（P 均<0.05）。提
【參考文獻(xiàn)】

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1 于小函;邸波;;腎小球系膜細(xì)胞與糖尿病腎病[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2015年09期

2 劉練;張高福;李秋;王墨;;阿霉素腎病小鼠的腎臟病理轉(zhuǎn)變過(guò)程[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào);2014年02期

本文編號(hào)：2861239