發(fā)布時間：2018-08-31 09:46

【摘要】：目的： 通過實驗來觀察GGTaseI酶抑制劑GGTI-2133對體外培養(yǎng)的人前列腺癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移的影響，并檢測其在腫瘤細(xì)胞對化療藥物敏感性上的影響，以及探討可能的機(jī)制； 方法： 第一部分：（1）體外培養(yǎng)人前列腺癌DU145細(xì)胞，建立細(xì)胞實驗?zāi)Ｐ停唬?）分別用不同濃度的GGTI-2133干預(yù)培養(yǎng)DU145細(xì)胞相同的時間或者相同濃度GGTI-2133干預(yù)培養(yǎng)不同的時間，采用倒置光學(xué)顯微鏡觀察及應(yīng)用MTT法檢測GGTI-2133對DU145細(xì)胞增殖的影響，并FACS法檢測不同濃度GGTI-2133干預(yù)培養(yǎng)DU145細(xì)胞24h后的細(xì)胞周期的情況，并計算細(xì)胞增殖指數(shù)PI值；（3）不同濃度GGTI-2133干預(yù)培養(yǎng)DU145細(xì)胞24h后，應(yīng)用TUNEL法檢測DU145細(xì)胞凋亡情況；（4）采用transwell chamber檢測對照組及實驗組DU145細(xì)胞的遷移情況；（5）應(yīng)用MTT法檢測單用及聯(lián)用GGTI-2133（5μmol/L）時阿霉素對DU145細(xì)胞半抑制濃度IC50值。第二部分：不同濃度的GGTI-2133干預(yù)培養(yǎng)DU145細(xì)胞24h后：（1）應(yīng)用western blot檢測RALA-GTP、RALB-GTP、RALBP1、REPS2/POB1、TBK1、NF-κB蛋白的表達(dá)；（2）應(yīng)用RT-PCR檢測Bcl-2、Bax基因的表達(dá)。 結(jié)果： 第一部分：（1）DU145細(xì)胞增殖受抑制，倒置光學(xué)顯微鏡觀察及MTT檢測結(jié)果顯示，隨著GGTI-2133濃度（在5～20μmol/L范圍內(nèi)）的升高、作用時間的延長，細(xì)胞增殖受抑制情況愈明顯，，且GGTI-2133能誘導(dǎo)DU145細(xì)胞周期G0/G1期阻滯，實驗組細(xì)胞增殖指數(shù)與對照組比較差異明顯（P0.05）；（2）GGTI-2133能促進(jìn)DU145細(xì)胞凋亡，實驗組細(xì)胞凋亡率增高與對照比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；（3）實驗組細(xì)胞遷移受抑制，其遷移到transwell板下室面的細(xì)胞數(shù)（37±16.29）明顯少于對照組（327±22.13），差異顯著（P0.01）；（4）阿霉素單用時C50值為10.1190±0.1220，聯(lián)合GGTI-2133（5μmol/L）時IC50值為5.7600±0.0580，兩者比較差異顯著（P0.05）第二部分：（1）隨著GGTI-2133濃度（在5～20μmol/L范圍內(nèi)）的升高，RALA-GTP、RALB-GTP、RALBP1、TBK1、NF-κB蛋白的表達(dá)量減少，而REPS2/POB1蛋白的表達(dá)量則增加，均與對照組比較差異顯著（P0.05）；（2）GGTI-2133可影響凋亡基因Bcl-2、Bax的表達(dá)，可使Bcl-2基因表達(dá)下調(diào)、Bax基因表達(dá)上調(diào)，且呈濃度依賴性。 結(jié)論： 1、一定的濃度和時間范圍內(nèi)，GGTI-2133能夠抑制體外培養(yǎng)的人前列腺癌細(xì)胞增殖、遷移，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，并可提高阿霉素對人前列腺癌細(xì)胞化療敏感性； 2、GGTI-2133對人前列腺癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移及化療藥物敏感性的影響的可能機(jī)制是：GGTI-2133阻斷了RalGEF-Ral信號通路的激活過程，主要是抑制Ral-GDP轉(zhuǎn)化為Ral-GTP，從而影響了下游相關(guān)蛋白（如RalBP1、REPS2、TBK1、NF-κB）的表達(dá)及下游信號通路（如NF-κB信號通路）的激活；另外在前列腺癌細(xì)胞的凋亡上，GGTI-2133也可通過下調(diào)Bcl-2基因表達(dá)及上調(diào)Bax基因表達(dá)來促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。
[Abstract]:Aim: to observe the effects of GGTaseI enzyme inhibitor GGTI-2133 on the proliferation, apoptosis and migration of human prostate cancer cells in vitro, and to detect the effect of GGTI-2133 on the sensitivity of tumor cells to chemotherapeutic agents. Methods: (1) Human prostate cancer DU145 cells were cultured in vitro and the cell model was established. (2) DU145 cells were incubated with different concentrations of GGTI-2133 for the same time or the same concentration of GGTI-2133 for different time. The effects of GGTI-2133 on the proliferation of DU145 cells were observed by inverted optical microscope and MTT assay. The cell cycle and cell proliferation index (PI) of cultured DU145 cells were measured by FACS method after 24 hours of DU145 cell culture with different concentrations of GGTI-2133. (3) TUNEL assay was used to detect the apoptosis of DU145 cells after 24 hours of GGTI-2133 treatment with different concentrations of GGTI-2133. (4) transwell chamber was used to detect the migration of DU145 cells in the control group and experimental group, and (5) MTT assay was used to detect the IC50 value of the semi-inhibitory concentration of adriamycin on DU145 cells when GGTI-2133 was used alone or in combination with GGTI-2133 (5 渭 mol/L). The second part: after 24 hours of DU145 cell culture with different concentrations of GGTI-2133: (1) western blot was used to detect the expression of RALA-GTP,RALB-GTP,RALBP1,REPS2/POB1,TBK1,NF- 魏 B protein, and (2) RT-PCR was used to detect the expression of Bcl-2,Bax gene. Results: (1) the proliferation of DU145 cells was inhibited. The results of inverted optical microscope and MTT showed that with the increase of GGTI-2133 concentration (in the range of 5 ~ 20 渭 mol/L), the action time was prolonged. The inhibition of cell proliferation was more obvious, and GGTI-2133 could induce G0/G1 phase arrest of DU145 cell cycle. Compared with the control group, the cell proliferation index of the experimental group was significantly different from that of the control group (P0.05); (2) GGTI-2133 could promote the apoptosis of DU145 cells. The increase of apoptosis rate in the experimental group was significantly higher than that in the control group (P0.05); (3). The number of cells migrating to the subplate of transwell (37 鹵16.29) was significantly lower than that of the control group (327 鹵22.13) (P0.01). (4) the C50 value of adriamycin alone was 10.1190 鹵0.1220, and the IC50 value in combination with GGTI-2133 (5 渭 mol/L) was 5.7600 鹵0.0580. There was a significant difference between the two groups (P0.05) in the second part: (1) the expression of RALA-GTPRALB-GTPRALB-GTPRALB-GTPRALB-GTPRALB-GTPRALB1TBK1- 魏 B protein decreased, while the expression of REPS2/POB1 protein increased with the increase of GGTI-2133 concentration (within the range of 5 ~ 20 渭 mol/L). Compared with the control group, GGTI-2133 (P0.05); (2) could affect the expression of apoptotic gene Bcl-2,Bax and down-regulate the expression of Bcl-2 gene in a dose-dependent manner. Conclusion: 1. GGTI-2133 can inhibit the proliferation, migration and apoptosis of human prostate cancer cells in vitro, and increase the chemosensitivity of adriamycin to human prostate cancer cells. The possible mechanism of the effects of GGTI-2133 on the proliferation, apoptosis, migration and chemotherapeutic susceptibility of human prostate cancer cells is that the activation of the RalGEF-Ral signaling pathway is blocked by: GGTI-2133. It mainly inhibited the transformation of Ral-GDP into Ral-GTP, which affected the expression of downstream related proteins (such as RalBP1,REPS2,TBK1,NF- 魏 B) and activation of downstream signaling pathways (such as NF- 魏 B signaling pathway). In addition, GGTI-2133 can promote the apoptosis of prostate cancer cells by down-regulating the expression of Bcl-2 gene and up-regulating the expression of Bax gene.
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.25

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本文編號：2214617