發(fā)布時(shí)間：2020-11-03 13:08

　　 頭頸部鱗狀細(xì)胞癌占全身惡性腫瘤發(fā)病率的第六位,2015年我國(guó)頭頸部惡性腫瘤癌發(fā)病約225,000例,死亡77,500例,其中以頭頸鱗狀細(xì)胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)最為常見,常發(fā)生于鼻腔、鼻竇、口腔、咽部和喉部等部位的黏膜上皮,具有發(fā)病隱匿、侵襲性強(qiáng)、容易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移、預(yù)后差、有較高的致死率和致殘率等特點(diǎn),手術(shù)治療為主輔以放、化療的聯(lián)合治療方法雖然有效地改善了患者的生活質(zhì)量,但不能顯著地提高患者術(shù)后5年生存率。因此,研究者的關(guān)注點(diǎn)正在逐漸轉(zhuǎn)向靶向精確治療,彌補(bǔ)傳統(tǒng)治療策略的不足,達(dá)到提高患者生存率目的。近年來,隨著納米醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展,學(xué)者們相繼報(bào)道了許多應(yīng)用納米載體制劑提高HNSCC診斷治療效率的研究,如:口腔癌周局部注射高載藥量淋巴結(jié)靶向平陽(yáng)霉素活性炭納米微粒,相較平陽(yáng)霉素取得更好治療效果;用載反義表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)寡核苷酸納米顆粒轉(zhuǎn)染小鼠人頭頸鱗癌SCC VII細(xì)胞,阻斷EGFR表達(dá)并聯(lián)合4Gy放射治療,具有放療增敏效應(yīng);纖維連接蛋白模擬肽(FMP)與羧基化氧化鐵納米粒子(IO)共軛結(jié)合并搭載光動(dòng)力療法(PDT)藥物PC 4,靶向腫瘤整合素β1配體,對(duì)人頭頸鱗癌鼠移植瘤給藥后藥物靶向腫瘤富集,較游離PC 4具有更高的抑瘤作用并且可明顯減少PC 4用藥劑量,有效降低機(jī)體藥物毒性。納米載體藥物的優(yōu)點(diǎn)包括:1、納米藥物經(jīng)化學(xué)或物理修飾,如:腫瘤特異性抗體,肽,小分子和寡核苷酸,可實(shí)現(xiàn)靶向給藥;2、納米載體可提高藥物的生物相容性,制備不溶或難溶于水藥物的注射劑型,提高靶細(xì)胞對(duì)藥物的攝取率;3、減小用藥劑量,有效降低藥物毒副作用;4、保護(hù)藥物活性:在循環(huán)過程中可起到與機(jī)體組織隔絕的作用,避免體內(nèi)某些活性成分對(duì)藥物活性的降解和破壞。大量的體外或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)DHA對(duì)多種腫瘤具有殺傷作用,其中DHA具有明確的殺傷HNSCC作用。但要開發(fā)DHA為抗腫瘤藥物,將受到DHA自身物化特性的限制,如:DHA不溶于水、難溶于脂質(zhì),普通固態(tài)制劑不能達(dá)到有效抑瘤血藥濃度;血漿t1/2僅有34~90min等,促使當(dāng)今國(guó)內(nèi)、外對(duì)dha的研究不斷深入,期待通過改變劑型實(shí)現(xiàn)延長(zhǎng)dha有效血藥濃度時(shí)間、提高dha生物相容性的目的。dha與納米載體結(jié)合,就是一種有效的改善手段�；�于上述觀點(diǎn),本研究設(shè)計(jì)磁性納米粒與脂質(zhì)體結(jié)合搭載dha(dha-mag-nl)納米粒,提高dha的生物相容性、保護(hù)dha活性,達(dá)到提高dha血藥濃度、延長(zhǎng)dhat1/2的目的,為開發(fā)dha作為臨床抗腫瘤藥物提供條件和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)大體分為三部分:第一部分磁性雙氫青蒿素納米脂質(zhì)體的制備及表征特性鑒定目的:優(yōu)化納米磁性載藥脂質(zhì)體的合成條件,構(gòu)建dha-mag-nl并檢測(cè)相應(yīng)關(guān)鍵表征,以達(dá)到靜脈用藥要求。方法:1采用改良化學(xué)沉淀法合成fe304,觀察其磁響應(yīng)性和磁穩(wěn)定性。2通過路易斯酸催化反應(yīng)合成peg-dha,定量后建立濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。3采用逆向蒸發(fā)法合成dha-mag-nl磁靶向納米脂質(zhì)體,通過檢測(cè)其包封率優(yōu)化合成配方。4檢測(cè)優(yōu)化配方合成的dha-mag-nl磁靶向納米脂質(zhì)體相應(yīng)關(guān)鍵表征參數(shù),作為載藥系統(tǒng)評(píng)價(jià)指標(biāo)。結(jié)果:1磁性fe3o4納米粒子具有很好的磁響應(yīng)性和超順磁性。2建立peg-dha溶液標(biāo)準(zhǔn)濃度曲線回歸方程,y=55.48x-1.571,r2=0.999,線性良好。3l9(34)正交實(shí)驗(yàn)得到最佳配方為pc:ch(w/w)4:1,pc:dha(w/w)20:1,pc:mag(w/w)10:1,dha:peg(m/m)1:10,可制得具有較高包封率的dha-mag-nl磁性脂質(zhì)體納米粒;影響磁性脂質(zhì)體包封率的各影響因素的重要性依次遞減為:pc:ch(因素a)dha:peg(因素d)pc:mag(因素c)pc:dha(因素b)。4dha-mag-nl納米脂質(zhì)體最佳配方的peg-dha包封率為82.12±0.91%;載藥量為5.87±0.06%;peg-dha含藥量為2.46±0.03mg;粒徑在209.10±4.92nm范圍,pdi=0.25±0.02,粒徑均勻;粒子所帶電荷數(shù)為-37.13±1.01mv。5dha-mag-nl納米粒在4℃條件下保存3個(gè)月,其粒徑與包封率兩項(xiàng)關(guān)鍵物理參數(shù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析與初始合成完畢時(shí)沒有明顯差異(p0.01);dha-mag-nl納米粒在-20℃和室溫(25℃)條件下保存3個(gè)月,其粒徑與包封率兩項(xiàng)關(guān)鍵物理參數(shù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析與初始合成完畢時(shí)有明顯差異(p0.01)。結(jié)論:成功合成dha-mag-nl磁靶向納米脂質(zhì)體dha載藥系統(tǒng)。第二部分磁性雙氫青蒿素納米脂質(zhì)體體外靶向作用的研究目的:觀察磁場(chǎng)作用下dha-mag-nl的靶向分布情況,初步驗(yàn)證dha-mag-nl的靶向作用。方法:1hep-2和cal-27細(xì)胞給予dii標(biāo)記dha-mag-nl,在磁場(chǎng)和無磁場(chǎng)作用下共孵育取1h,dapi復(fù)染,熒光顯微鏡觀察dha-mag-nl磁靶向作用。2kmmice小鼠麻醉后,尾靜脈注射等劑量dii熒光標(biāo)記的dha-mag-nl懸液,左腎暴露于4500高斯磁場(chǎng)中1h,對(duì)比左、右側(cè)腎臟鐵染色組織切片;對(duì)比左、右側(cè)腎組織冰凍切片熒光染色圖像。結(jié)果:1在磁場(chǎng)作用下hep-2、cal-27細(xì)胞給予dii熒光標(biāo)記的dha-mag-nl懸液共孵育1h,dii熒光強(qiáng)度和細(xì)胞結(jié)合磁粒(fe3o4)數(shù)量均明顯高于無磁場(chǎng)作用下的hep-2、cal-27細(xì)胞。2尾靜脈注射dii熒光標(biāo)記的dha-mag-nl懸液,小鼠左腎在磁場(chǎng)作用下與無磁場(chǎng)作用的右腎組織相比熒光強(qiáng)度有顯著差異;常規(guī)組織切片鐵染色觀察,左腎在磁場(chǎng)作用下與無磁場(chǎng)作用的右腎組織相比,左腎局灶可見明顯藍(lán)色顆粒;右腎未見明確藍(lán)色顆粒,兩者差別顯著。3體內(nèi)外靶向?qū)嶒?yàn)結(jié)果提示dha-mag-nl納米顆粒在體內(nèi)外都具有較強(qiáng)的磁靶向性。結(jié)論:初步驗(yàn)證磁性雙氫青蒿素納米脂質(zhì)體具有體內(nèi)外靶向作用。第三部分磁性雙氫青蒿素納米脂質(zhì)體對(duì)人舌鱗癌cal-27細(xì)胞系及喉癌hep-2細(xì)胞系的體外增殖抑制作用的研究目的:觀察dha-mag-nl磁性納米脂質(zhì)體對(duì)cal-27及hep-2細(xì)胞系的體外抑制作用。方法:1mtt法檢測(cè)不同干預(yù)時(shí)間時(shí),dha-mag-nl濃度梯度對(duì)hep-2和cal-27細(xì)胞增殖的影響。2設(shè)立實(shí)驗(yàn)分組:對(duì)照組、dha組、dha-mag-nl組和磁場(chǎng)作用dha-mag-nl組,流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)dha濃度40μm在不同干預(yù)時(shí)間對(duì)hep-2和cal-27細(xì)胞周期的影響。3設(shè)立實(shí)驗(yàn)分組:對(duì)照組、dha組、dha-mag-nl組和磁場(chǎng)作用dha-mag-nl組,流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)dha濃度40μm在不同干預(yù)時(shí)間對(duì)hep-2和cal-27細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果:1mtt法檢測(cè)dha-mag-nl對(duì)hep-2和cal-27腫瘤細(xì)胞作用24h和48h,可抑制腫瘤細(xì)胞增殖,且與藥物劑量及干預(yù)時(shí)間呈依賴關(guān)系。ic50值分別為28.66μm和15.67μm,41.75μm和11.86μm。相對(duì)于hep-2細(xì)胞,dha-mag-nl對(duì)cal-27細(xì)胞干預(yù)24h的增殖抑制作用稍弱。2以dha濃度為準(zhǔn)(60μm),藥物作用24h后,流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期,兩種hnscc細(xì)胞在dha和磁場(chǎng)中dha-mag-nl靶向干預(yù)下與對(duì)照組相比,具有明確的細(xì)胞周期g0/g1期阻滯作用(p0.01);hep-2細(xì)胞在dha-mag-nl干預(yù)下與對(duì)照組相比,具有細(xì)胞周期g0/g1期阻滯作用(p0.01);cal-27細(xì)胞在dha-mag-nl干預(yù)下與對(duì)照組相比,細(xì)胞周期分布比例無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。檢測(cè)結(jié)果表明:dha-mag-nl對(duì)cal-27細(xì)胞抑制作用相應(yīng)較弱。3以dha濃度為準(zhǔn)(60μm),藥物作用24h后,流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡,兩種hnscc細(xì)胞在dha、dha-mag-nl和磁場(chǎng)中dha-mag-nl靶向干預(yù)下與對(duì)照組相比,早期和晚期凋亡細(xì)胞比例顯著增加(p0.01);dha-mag-nl在非靶向作用下對(duì)細(xì)胞凋亡影響明顯弱于dha和磁場(chǎng)中dha-mag-nl靶向干預(yù)作用(p0.01);統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,dha-mag-nl靶向作用24h對(duì)cal-27腫瘤細(xì)胞的促凋亡作用弱于dha的促凋亡作用(p0.01)。結(jié)論:dha-mag-nl可抑制hep-2和cal-27腫瘤細(xì)胞的增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,且與藥物劑量及干預(yù)時(shí)間呈依賴關(guān)系。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R739.91
【部分圖文】：

04混懸液透明玻瓶一側(cè)如圖1-1，見混懸液快速向磁鐵一側(cè)聚集(顏色加深)；說明Fe3O4有很好的磁響應(yīng)性。2 PEG-DHA產(chǎn)量按照2.3方法制備的PEG-DHA，經(jīng)2.5方法提純蒸去有機(jī)溶劑后，得到約241.70±10.97mg PEG-DHA，用氯仿定溶至10ml，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩? 建立DHA溶液標(biāo)準(zhǔn)濃度曲線按照2.7.3方法配制DHA標(biāo)準(zhǔn)溶液系列濃度，HPLC檢測(cè)色譜圖像顯示DHA呈現(xiàn)α、β異構(gòu)體雙峰色譜圖像（圖1-2），保留時(shí)間分別為7.056min和10.398min

研 究 論 文附 圖normal 0min 5min 30min 60min圖 1-1 磁場(chǎng)中磁性 Fe3O4納米粒子的磁響應(yīng)性Fig.1-1 The response of Fe3O4nanoparticle to magnetic field.

圖 1-5 DHA-Mag-NL 納米粒子 TEM 圖象Fig.1-5 The TEM image of DHA- Mag - NLnanoparticles.PhospholipidsFe3O4PEG-DHA
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2868615