發(fā)布時間：2020-11-03 03:32

　　 目的:初步探究擬在吸入七氟烷基礎(chǔ)上探討右美托咪定對七氟烷引起大鼠海馬神經(jīng)細胞凋亡的影響,為降低臨床麻醉中神經(jīng)細胞損傷產(chǎn)生提供更多理論依據(jù)。方法:健康雄性SD大鼠隨機分為四組:假手術(shù)組(A組)、七氟烷組(S組)、右美托咪定+七氟烷組(D+S組)、育亨賓+右美托咪定+七氟烷組(Y+D+S組)。各組做好標記,Y+D+S組腹腔注射育亨賓2.5mg/kg,右美托咪定20ug/kg,吸入1.5%七氟烷1 h/d。D+S組右美托咪定20ug/kg,吸入1.5%七氟烷1h/d。S組吸入1.5%七氟烷1h/d。A組動物實驗中心常溫飼養(yǎng)。14 d后采用Y迷宮檢測各組大鼠學習記憶能力,應(yīng)用HE染色技術(shù)和尼氏染色技術(shù)觀察大鼠海馬神經(jīng)細胞形態(tài)學改變,采用免疫組化技術(shù)、Western blot技術(shù)測定大鼠海馬Caspase-3、Bax和Bcl-2的表達量。結(jié)果:Y迷宮檢測發(fā)現(xiàn),S組和Y+D+S組SD大鼠空間學習、記憶能力明顯下降。而D+S組SD大鼠空間學習、記憶能力也下降,但比S組和Y+D+S組SD大鼠下降程度小。免疫組化和Western blot檢測發(fā)現(xiàn)A組和D+S組Caspase-3、Bax的表達比S組和Y+D+S組表達少,而Bcl-2比S組和Y+D+S組表達多。D+S組海馬神經(jīng)細胞HE染色細胞皺縮少,形態(tài)多數(shù)完整,海馬神經(jīng)細胞尼氏染色尼氏小體較多,有層次感。A組幾乎未見異常。S組和Y+D+S組海馬神經(jīng)細胞HE染色松散,形態(tài)不完整。尼氏染色尼氏小體明顯減少,層次感差。結(jié)論:1.SD大鼠間斷吸入七氟烷后空間學習、記憶能力明顯下降,證明吸入七氟烷會對學習、記憶產(chǎn)生影響。2.右美托咪定對七氟烷引起SD大鼠海馬神經(jīng)細胞產(chǎn)生保護作用,其作用機制可能通過α_2-腎上腺素受體實現(xiàn)。
【學位單位】：大理大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R614
【部分圖文】：

1. 電泳1) 將玻璃板放入電泳槽中，小玻璃板面向內(nèi)側(cè)，大玻璃板面向外側(cè)卡緊。電泳槽放入裝滿碎冰的盆子里。2) 倒入足夠電極緩沖液，注意電泳液要沒過內(nèi)側(cè)小玻璃板高度，準備蛋白加樣3) 將預先變性的樣品蛋白按之前算好的體積緩慢加入對應(yīng)加樣孔里，避免產(chǎn)生氣泡，其中一道加樣孔加入 5 ul 的 Marker。如果有加樣孔有剩余，要用 5 uLoading Buffer 填滿（保證每個孔都有“樣品”）。4) 接好正負極，電泳槽蓋子蓋好，打開電源開始電泳，開始穩(wěn)壓在 60 V，待 Marke跑到分離膠后出現(xiàn)明顯分層后將電壓調(diào)到 120 V，繼續(xù)電泳，當樣品中的溴酚藍指示劑達到下沿邊緣時，可以停止電泳。3.轉(zhuǎn)膜1) 電泳完成后取出玻璃板，先用凝膠鏟緩慢把玻璃板撬開，倒一點雙蒸水保持凝膠濕潤，撬開后可以先切去濃縮膠，然后按著 Marker 給出的分子量標準分別切取有效部分目的凝膠，準確量好每個目的凝膠長和寬，將凝膠放入提前配好的轉(zhuǎn)膜液中。（Caspase-3、Bax、Bcl-2 蛋白分子量見圖 4）

圖 5 SD 大鼠 Y 迷宮檢測 10 次正確需要的電擊次數(shù)比較.5 SD rat Y maze test 10 times need to compare the number of electric shocks.aPpared with group A;bP>0.05 compared with group S;cP<0.05 compared with groupsham surgery group；S，sevoflurane group；D+S，dexmedetomidine+ sevoflurane gD+S，Yohimbe+ dexmedetomidine+ sevoflurane group.組 SD 大鼠海馬區(qū) HE 染色結(jié)果各組大鼠海馬組織神經(jīng)細胞 HE 染色結(jié)果（見圖 6）：A 組：與其他三組相比較，HE 染色顯示 A 組海馬神經(jīng)細胞結(jié)構(gòu)完整，形排列整齊緊密，細胞漿紅染，細胞核藍染且清晰，未見凋亡細胞，分布均S 組和 Y+D+S 組：與 A 組和 D+S 組相比較，HE 染色顯示海馬神經(jīng)細胞異常，細胞輪廓模糊，形態(tài)不規(guī)則，排列紊亂松散，細胞結(jié)構(gòu)不完整，清晰，可見大量細胞凋亡，細胞體積縮小，細胞核固縮且深染，神經(jīng)細失。D+S 組：與 S 組和 Y+D+S 組相比較，HE 染色顯示海馬神經(jīng)細胞結(jié)構(gòu)相

圖 6.1 A 組 SD 大鼠海馬神經(jīng)細胞 HE染色結(jié)果 200×Fig.6.1 results of HE staining ofhippocampal neurons in group A SDrats 200×圖 6.2 S 組 SD 大鼠海馬神經(jīng)細胞 HE染色結(jié)果 200×Fig.6.2 results of HE staining ofhippocampal neurons in group S SDrats 200×圖6.3 D+S組SD大鼠海馬神經(jīng)細胞HE圖 6.4 Y+D+S 組 SD 大鼠海馬神經(jīng)細胞
【參考文獻】

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1 李建立;劉玉茹;張煜東;吳紅海;侯艷寧;;右美托咪定誘導原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元凋亡的影響[J];醫(yī)學研究生學報;2015年12期

2 孔林林;張軍;喬楓;祁金順;;基于小鼠Morris水迷宮和Y迷宮聯(lián)合試驗的多任務(wù)行為學測試研究[J];神經(jīng)解剖學雜志;2013年04期

3 林琳;蘭愛平;張莉莉;周舸;華瀟瀟;劉明姬;馮鑒強;莫利求;;右美托咪定對抗化學性低氧引起神經(jīng)細胞的損傷及其機制[J];廣東醫(yī)學;2012年08期

本文編號：2868030