目的:沉默信息調節(jié)因子1(silent information regulator 1,SIRT1)為第III類組蛋白去乙�；讣易宓囊粏T,研究表明SIRT1在多種腫瘤中呈異常表達并與腫瘤的耐藥密切相關。本研究通過細胞水平研究靶向SIRT1的小干擾RNA對宮頸癌Hela細胞增殖、遷移、侵襲和凋亡的影響,探討其在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。在此基礎上將siRNA-SIRT1與順鉑聯(lián)合作用Hela細胞,檢測SIRT1對相關耐藥基因的影響。方法:化學合成靶向SIRT1的小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)及其陰性對照序列,應用Lipofectamine RNAi MAX脂質體轉染宮頸癌Hela細胞。實驗分為三組:空白細胞對照組、陰性對照siRNA轉染組和siRNA-SIRT1轉染組。轉染72h后,分別提取各組細胞總RNA和總蛋白。RT-PCR檢測細胞中SIRT1 mRNA的表達;免疫印跡檢測細胞SIRT1蛋白的表達。采用siRNA轉染和順鉑藥物聯(lián)合作用Hela細胞,CCK-8法測定Hela細胞的增殖及順鉑對Hela的IC_(50)值;RT-PCR和qRT-PCR檢測Hela細胞ABCC1和ABCG2 mRNA的表達;免疫印跡法檢測Hela細胞ABCC1蛋白的表達水平;Transwell小室分別檢測細胞的遷移和侵襲能力;流式細胞術檢測Hela細胞凋亡。結果:RT-PCR結果顯示:與陰性對照siRNA組和空白細胞對照組相比,siRNA-SIRT1組SIRT1 mRNA表達均明顯下調(P0.05)。免疫印跡結果顯示:與陰性對照siRNA組和空白對照組相比,siRNA-SIRT1組SIRT1蛋白的表達明顯下調(P0.05)。CCK-8結果顯示:順鉑對Hela細胞的IC_(50)值分別為5.34μM(24h)和3.70μM(48h)。siRNA-SIRT1與順鉑聯(lián)合作用組中順鉑對Hela細胞的IC_(50)為1.58μM(24h),明顯低于單獨順鉑作用組。siRNA-SIRT1組細胞增殖抑制率為28.6%,而陰性對照si RNA組細胞增殖抑制率為6.3%,空白細胞對照組細胞增殖抑制率為4.7%。si RNA-SIRT1轉染組的細胞增殖抑制率明顯高于其他對照組(P0.05)。RT-PCR和qRT-PCR結果均顯示:與陰性對照siRNA組和空白對照組相比,siRNA-SIRT1組ABCC1mRNA的表達明顯下調(P0.05),而ABCG2表達無顯著性差異。免疫印跡結果顯示:與陰性對照siRNA組和空白對照組相比,siRNA-SIRT1組ABCC1蛋白的表達明顯下調(P0.05)。與陰性對照siRNA和順鉑聯(lián)合作用組及空白對照和順鉑聯(lián)合作用組相比,siRNA-SIRT1轉染和順鉑聯(lián)合作用組的ABCC1蛋白的表達明顯下調(P0.05)。細胞遷移和侵襲實驗結果顯示:siRNA-SIRT1轉染組的細胞遷移和細胞侵襲能力均明顯高于其他對照組(P0.05)。流式檢測結果表明:空白細胞對照組細胞的早期凋亡率為2.9%,陰性siRNA對照組細胞的早期凋亡率為3.7%,siRNA-SIRT1組的細胞早期凋亡率為11.7%。與陰性對照si RNA組和空白細胞對照組相比,siRNA-SIRT1組細胞的早期凋亡率明顯提高(P0.05)。結論:siRNA-SIRT1不僅能抑制宮頸癌發(fā)生細胞的增殖、遷移和侵襲,并誘導細胞凋亡,而且可以下調耐藥基因ABCC1的表達,其與順鉑的聯(lián)合作用可以通過降低耐藥基因ABCC1表達進而提高Hela細胞對順鉑的敏感性。SIRT1有望通過影響ABCC1的表達進一步逆轉宮頸癌的化療耐藥。
【學位單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R737.33
【部分圖文】：

結果結 果 Hela 細胞 SIRT1 表達的影響ela 細胞 SIRT1 mRNA 水平實驗，選擇最佳轉染濃度為 30nM 的小干陰性對照 siRNA 組和空白細胞對照組均顯對照組及空白細胞對照組相比，siRNA-SIRT降（P<0.05），差異有統(tǒng)計學意義，見圖 1。

12圖 2. siRNA-SIRT1 對 SIRT1 蛋白的表達的影響. Effects of siRNA-SIRT1 on the expressions of SIRT1 proestern blot 結果； B：Western blot 檢測 SIRT1 灰度值對照 siRNA 轉染組、空白對照組相比，***P<0.0001

結果-SIRT1 對 Hela 細胞增殖及順鉑 IC50的影響-8 結果顯示：siRNA-SIRT1 轉染組細胞增殖抑制率為 28.6%，細胞的增殖抑制率為 6.3%，空白細胞對照組細胞增殖抑制率為 siRNA 組和空白對照組相比，siRNA-SIRT1 組細胞的增殖抑制率計學意義（P<0.05）。測得順鉑對 Hela 細胞 24h 的 IC50為 5.34μMM。siRNA-SIRT1 與順鉑聯(lián)合作用，測得順鉑對 Hela 細胞 24h 與單獨順鉑作用相比，siRNA-SIRT1 與順鉑聯(lián)合作用組細胞的 I 3。
【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 譚逢梅;董文斌;雷小平;劉興玲;李清平;康蘭;趙帥;張嬋;;早產兒氧暴露后沉默信息調節(jié)因子1(SIRT1)表達減少與支氣管肺發(fā)育不良有關[J];細胞與分子免疫學雜志;2016年12期

2 杜強;朱成華;沈立;蔡健康;査王健;黃茂;;慢性阻塞性肺疾病患者SIRT1蛋白表達與急性加重風險的相關性研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2016年36期

3 熊禹真;汪亞君;張海濤;;SIRT1抑制高良姜素誘導的HepG2細胞凋亡的研究[J];醫(yī)學研究生學報;2017年03期

4 牛戰(zhàn)斌;朱玲;劉向云;魏玉琴;汪陽;楊亞兵;周儻;向玖琳;陳佩杰;王茹;;SIRT1基因多態(tài)性和不同有氧運動與高膽固醇血癥的關聯(lián)性初探[J];天津體育學院學報;2016年04期

5 馮英同;高春城;葉福林;朱建福;馮英備;王增輝;周峰;黃兵;;褪黑素通過激活SIRT1信號通路發(fā)揮抗肺缺血再灌注損傷作用[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2017年02期

6 趙維;劉俊彥;李玉英;;SIRT1減弱對脂多糖致急性呼吸窘迫綜合征小鼠的促炎作用[J];中華肺部疾病雜志(電子版);2017年02期

7 俞建;錢琦;;穩(wěn)定性心絞痛患者SIRT1表達與氧化應激的相關性研究[J];南京醫(yī)科大學學報(自然科學版);2017年05期

8 熊玉龍;姚宏偉;許賢林;;SIRT1對急性腎損傷大鼠的抗纖維化作用[J];江蘇醫(yī)藥;2017年11期

9 朱朝娟;王倩梅;梁赫;劉思達;馬軒;梁業(yè);梁逸飛;;SIRT1在帕金森病中的研究進展[J];臨床誤診誤治;2017年09期

10 許昭;董思源;趙勇;楊振;陳群;;SIRT1對氟中毒生殖功能損傷的作用[J];國外醫(yī)學(醫(yī)學地理分冊);2017年03期

相關博士學位論文 前10條

1 謝月霞;SirT1與內質網(wǎng)應激在乏氧輻射抗性與輻射旁效應中的作用及其分子機制[D];復旦大學;2013年

2 楊向紅;Sirt1對膿毒癥致急性腎損傷保護作用及機制的實驗研究[D];浙江大學;2014年

3 張寧;Sirt1在骨肉瘤轉移中的作用及可能機制研究[D];浙江大學;2014年

4 冷文修;Sirt1在自發(fā)性高血壓大鼠心肌中的表達及其在瑞舒伐他汀心肌保護中的作用[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2013年

5 劉麗梅;去乙�；窼IRT1在肝癌干細胞自我更新中的作用及其機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2013年

6 錢聰;SIRT1在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷模型的神經保護作用及機制研究[D];浙江大學;2016年

7 李翀;SIRT1在肺腺癌中的生物學作用及機制研究[D];蘇州大學;2016年

8 邵海軍;脊髓SIRT1活化在治療小鼠神經病理性疼痛中的作用[D];上海交通大學;2013年

9 陳靜;曲美他嗪通過Sirt1緩解巨噬細胞介導的膿毒癥心肌病及其機制研究[D];華中科技大學;2016年

10 張永國;SIRT1在胃癌惡性生物學表型中的作用和機制研究[D];第四軍醫(yī)大學;2012年

相關碩士學位論文 前10條

1 董國英;SIRT1通過下調ARHGAP5的表達抑制胃癌的浸潤和轉移[D];山東大學;2018年

2 齊月雯;SIRT1在宮頸癌發(fā)生發(fā)展及化療耐藥中作用的初步研究[D];青島大學;2018年

3 曹詩夢;蟲草素上調SIRT1表達減少內皮細胞凋亡相關信號通路研究[D];福建醫(yī)科大學;2017年

4 劉洋;SIRT1信號通路介導咖啡因預防早產兒支氣管肺發(fā)育不良[D];西南醫(yī)科大學;2018年

5 于登峰;Sirt1在結直腸癌中的表達和意義[D];大連醫(yī)科大學;2013年

6 徐傳翀;小檗堿通過SIRT1途徑抑制巨噬細胞炎癥反應的機制研究[D];南京中醫(yī)藥大學;2016年

7 衛(wèi)美辰;SIRT1的選擇性剪接變異體參與大鼠神經干細胞的分化研究[D];山西醫(yī)科大學;2015年

8 程飛飛;SIRT1在結直腸癌轉移中的作用和機制研究[D];浙江理工大學;2016年

9 雷軍平;辛伐他汀通過上調SIRT1抵抗血管內皮細胞衰老[D];第二軍醫(yī)大學;2012年

10 賈曉暉;白藜蘆醇對SIRT1基因mRNA表達的影響[D];山東大學;2006年

本文編號：2880617