發(fā)布時間：2020-11-02 10:47

　　 研究背景維生素D(Vitamine D,VD)是皮膚經(jīng)紫外線照射后產(chǎn)生的一種類固醇激素。它除了在維持骨骼健康、調節(jié)鈣磷平衡方面發(fā)揮重要作用外,研究表明:維生素D受體還存在于子宮、卵巢、睪丸等生殖器官,在子宮內(nèi)膜及卵泡的生長發(fā)育、精子質量優(yōu)劣方面發(fā)揮重要的生物學效應。維生素D代謝通路基因CYP2R1、CYP27B1、CYP24A1、GC和維生素D受體(Vitamine D Receptor,VDR)的異常表達可能影響維生素D水平,從而影響生殖功能的發(fā)揮。1978世界首例試管嬰兒在英國誕生,此后輔助生殖技術(Assisted Reproduction Technique,ART)發(fā)展迅猛。隨著不孕癥發(fā)病率的逐年增加,輔助生殖技術越來越被大眾熟知和接受,但其臨床妊娠率遭遇瓶頸,徘徊在50%。在許多研究中已經(jīng)報道了維生素D對臨床妊娠率和活產(chǎn)率的影響,但是研究結果并不一致,存在很大爭議。維生素D在不孕人群的分布及影響因素缺乏大數(shù)據(jù)研究,同時維生素D在ART過程中是否有明確作用仍然難以捉摸。胚胎質量作為影響臨床妊娠率的關鍵環(huán)節(jié)之一,通過研究維生素D水平與ART技術中獲卵率、正常受精率(2PN率)、優(yōu)質胚胎率(簡稱優(yōu)胚率)的關系,以期為預測胚胎質量,改善胚胎質量提供依據(jù)。CYP2R1、CYP27B1、CYP24A1、GC和VDR作為關鍵調控基因,在維生素D合成、代謝、轉運等方面發(fā)揮重要作用,與卵泡生成、胎盤性激素分泌及子宮內(nèi)膜炎因子的生成等機體許多重要生理學功能密切相關,其異常表達將影響體內(nèi)維生素D水平及其生物學功能的發(fā)揮。本研究將采用逐層遞進,層層深入的方式,從血清維生素D在不孕癥人群中的分布水平及相關因素的研究,到卵泡液維生素D水平與輔助生殖技術中受精、胚胎質量的關系探討,最后進一步研究維生素D代謝通路相關基因的表達,以期為不孕癥處理及更好的提高臨床妊娠率提供線索。第一部分維生素D水平與不孕癥人群相關因素分析目的研究血清中維生素D在不孕癥人群中的分布水平,分析維生素D水平與不孕癥患者基本情況及實驗室相關指標的關系。材料與方法1.研究對象(1)回顧性分析2016年6月～2018年12月鄭州大學第三附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學中心第一次接受輔助生殖技術助孕治療的不孕癥患者,共計12261例。(2)病例納入標準:因輸卵管因素、排卵障礙、子宮內(nèi)膜異位癥、卵巢早衰、復發(fā)性流產(chǎn)、男方因素(重度少弱畸精癥、無精癥)、不明原因而行夫精人工授精(Artificial Insemination by Husband,AIH)和供精人工授精(Artificial Insemination by Donor,AID)、體外受精(In Vitro Fertilization,IVF)、卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射(Intracytoplasmic Sperm Injection,ICSI)、胚胎植入前遺傳學診斷(Preimplantation Genetic Diagnosis,PGD)、胚胎植入前遺傳學篩查(Preimplantation Genetic Screening,PGS)的患者。(2)排除標準:有輔助生殖助孕技術禁忌癥者;近半年內(nèi)補充維生素D藥物史者;嚴重的內(nèi)科疾病如高血壓、糖尿病者。(3)分組情況:根據(jù)血清25(OH)D水平分成兩組:VD缺乏組(25(OH)D≤50 nmol/L),VD非缺乏組(25(OH)D50 nmol/L)。其中缺乏組10077例,非缺乏組2184例。2.研究方法(1)記錄患者的基本情況,包括:年齡、不孕年限、體重指數(shù)(Body Mass Index,BMI)、血壓、家族史;測定實驗室指標包括:血型、肝腎功能、空腹胰島素水平、血清25(OH)D水平及測定時間、基礎內(nèi)分泌、臨床診斷包括是否有PCOS、子宮內(nèi)膜異位癥等。(2)統(tǒng)計方法:所有的數(shù)據(jù)均采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進行整理并作出分析,基礎信息資料采用均數(shù)±標準差((?)±s)來表示。對于分類變量使用卡方檢驗組間進行比較,如果超過20%的期望值小于5,則采用Fisher精確檢驗。對于連續(xù)變量,根據(jù)是否服從正態(tài)性和方差齊性采用Student's t檢驗或Mann-Whitney檢驗,多因素分析均采用logistic回歸。以α=0.05為檢驗水準。結果1.患者一般臨床資料的比較VD缺乏組與非缺乏組兩組間比較,女方BMI、血型、家族史和是否有子宮內(nèi)膜異位癥均無顯著性差異(P0.05)。2.不同維生素D水平組間占比情況VD缺乏組10077例,占82.19%,非缺乏組2184例,占17.81%。3.VD缺乏組與非缺乏組在年齡、VD測定季節(jié)、胰島素抵抗、PCOS方面差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.回歸分析,調整混淆因素后的結果(1)BMI、PCOS、血型、家族史、子宮內(nèi)膜異位癥不影響維生素D水平(P0.05)。(2)高齡(35歲)是維生素D的保護性因素:≤35歲女性較35歲更易維生素D缺乏(P0.05)。(3)維生素D測定季節(jié)影響其水平:夏秋季維生素D水平明顯高于冬春季(P0.05),春季明顯高于冬季(P0.05)。(4)胰島素抵抗影響維生素D水平:胰島素抵抗較非胰島素抵抗組更易維生素D缺乏(P0.05)。小結不孕癥患者多存在維生素D缺乏;維生素D水平受女方年齡、測定季節(jié)、胰島素抵抗的影響;BMI、PCOS、血型、家族史、子宮內(nèi)膜異位癥不影響維生素D水平。第二部分維生素D水平與ART助孕獲卵及胚胎質量關系的探討目的探討血清和卵泡液中維生素D水平的相關性;評估卵泡液中維生素D水平與獲卵率、正常受精率(2PN率)、優(yōu)質胚胎率(簡稱優(yōu)胚率)的關系。材料與方法1.研究對象(1)選取2018年12月～2019年1月于鄭州大學第三附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學中心接受IVF助孕的196例患者為研究對象。(2)病例納入標準:女方年齡≤35歲,男方年齡:40歲,抗苗勒管激素(AMH)1.1 ng/ml或者基礎竇卵泡數(shù)7個,均采用長方案(包括黃體中期長方案和長長方案)。病例排除標準(1)嚴重的內(nèi)科疾病;(2)合并其他影響代謝的內(nèi)分泌疾病(如甲狀腺疾病、高催乳素血癥等);(3)子宮內(nèi)膜異位癥;(4)近半年內(nèi)補充維生素D藥物史者。(3)分組情況:根據(jù)卵泡液中維生素D水平劃分為三組:VD充足組(34例):25(OH)D≥75 nmol/L,VD不足組(64例):50 nmol/L25(OH)D75 nmol/L,VD缺乏組(98例):25(OH)D≤50 nmol/L。2.研究方法(1)記錄患者一般情況、測定空腹胰島素、血清和卵泡液中25(OH)D水平及性激素包括LH、FSH、E2、P等水平,記錄獲卵數(shù)、正常受精數(shù)、胚胎質量等。(2)統(tǒng)計方法:定量資料采用Shapiro-Wilk法進行正態(tài)性檢驗,符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標準差((?)±s)來表示,組間比較采用兩獨立樣本均數(shù)的t檢驗,多組間比較采用單因素方差分析,組間多重比較采用LSD法;不符合正態(tài)分布的定量資料以中位數(shù)和四分位數(shù)[M(P25,P75)]表示,組間比較采用Mann-Whitney U檢驗,多組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗。定性資料以率表示,組間比較采用卡方檢驗。以α=0.05為檢驗水準。結果1.患者一般臨床資料的比較VD缺乏組、不足組與充足組相比較,除血型(P0.05)外,其余均無顯著性差異(P0.05)。2.血清與卵泡液中維生素D水平的比較血清和卵泡液中維生素D水平呈正相關,相關系數(shù)為r=0.832(P0.01)。3.VD缺乏組、不足組與充足組獲卵率的比較VD缺乏組、不足組與充足組,三組間及兩組間比較差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.VD缺乏組、不足組與充足組2PN率及優(yōu)胚率的比較(1)VD缺乏組與充足組比較,兩者2PN率無顯著性差異(P0.05),但對于優(yōu)胚率,VD缺乏組明顯低于充足組(P0.05)。(2)VD缺乏組2PN率及優(yōu)胚率均顯著性低于VD不足組(P0.05)。(3)VD不足組2PN率和優(yōu)胚率與充足組相比無統(tǒng)計學意義(P0.05)。小結血清25(OH)D水平可反映卵泡液中25(OH)D水平。維生素D水平不影響獲卵率,但會對2PN率、優(yōu)胚率產(chǎn)生影響。第三部分維生素D水平與其代謝通路相關基因表達關系的研究目的測定卵泡顆粒細胞內(nèi)維生素D代謝通路相關基因CYP2R1、CYP27B1、CYP24A1、GC和VDR m RNA表達水平,探討血清維生素D水平、PCOS、胰島素抵抗與維生素D代謝通路相關基因表達的關系。材料與方法1.研究對象(1)收集2018年12月至2019年1月在鄭州大學第三附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學中心接受IVF助孕治療的196例患者資料,從中按照血清中維生素D水平高低選取69名患者,測定卵泡顆粒細胞中維生素D代謝通路相關基因m RNA表達。(2)分組情況:(1)根據(jù)血清25(OH)D水平,分成VD充足組(14例):25(OH)D≥75 nmol/L、VD不足組(23例):50 nmol/L25(OH)D75 nmol/L、VD缺乏組(32例):25(OH)D≤50 nmol/L。(2)根據(jù)多囊卵巢綜合征(Polycystic Ovarian Syndrome,PCOS)疾病診斷標準分成PCOS組和非PCOS(non-PCOS);根據(jù)胰島素抵抗(Insulin Resistence,IR)的診斷標準,將PCOS分成:PCOS+IR組(23例)和PCOS+non-IR組(13例);將非PCOS組分成:非PCOS合并胰島素抵抗組(簡寫non-PCOS+IR)(11例)和非PCOS未合并胰島素抵抗簡寫(non-PCOS+non-IR組)(22例)。其中設定non-PCOS+non-IR組為對照組。2.研究方法(1)測定扳機日血清25(OH)D水平;檢測卵泡顆粒細胞中維生素D代謝通路基因CYP2R1、CYP27B1、CYP24A1、GC和VDR m RNA表達水平。(2)統(tǒng)計方法:計量數(shù)據(jù)采用(?)±s來表示,QPCRR原始CT值用2~(-ΔΔ)CT法來進行最終的m RNA相對表達量計算。組間數(shù)據(jù)對比利用單因素方差法(one-way ANOVA)進行分析,組間差異比較采用LSD-T檢驗。以α=0.05為檢驗水準。結果1.患者一般臨床資料的比較VD缺乏組、不足組及充足組間患者年齡、BMI、不孕年限、AMH比較差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.血清維生素D水平與其代謝通路相關基因表達的比較(1)VD缺乏組CYP2R1和VDR基因m RNA表達量低于充足組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。兩組間CYP27B1、CYP24A1、GC基因表達比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。(2)VD不足組與缺乏組及充足組相比,維生素D代謝通路相關基因表達均無顯著性差異(P0.05)。3.PCOS及胰島素抵抗與維生素D代謝通路相關基因表達的比較(1)PCOS+non-IR組與對照組維生素D代謝通路相關基因表達的比較。兩組間CYP2R1、CYP27B1、CYP24A1、GC和VDR m RNA表達無顯著性差異(P0.05)。(2)PCOS+non-IR組與PCOS+IR組維生素D代謝通路相關基因表達的比較PCOS+non-IR組CYP2R1高于PCOS+IR組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。VDR基因表達PCOS+non-IR組較PCOS+IR組有升高趨勢,但差異無統(tǒng)計學意義(P=0.058)。(3)PCOS+IR組與對照組維生素D代謝通路相關基因表達的比較PCOS+IR組CYP2R1和VDR的基因表達量均低于對照組(P0.05),兩組間CYP27B1、CYP24A1、GC m RNA表達無顯著性差異(P0.05)。(4)non-PCOS+IR組與對照組維生素D代謝通路相關基因表達的比較non-PCOS組CYP2R1的表達量明顯低于對照組(P0.05),兩組間CYP27B1、CYP24A1、GC、VDR m RNA表達無顯著性差異(P0.05)。小結血清維生素D水平與CYP2R1基因表達密切相關,CYP2R1表達的酶是維生素D代謝限速酶。CYP24A1、GC基因為維生素D代謝通路的下游基因,維生素D水平增加不能改變其表達。胰島素抵抗是影響維生素D代謝通路相關基因表達的關鍵因素。
【學位單位】：鄭州大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R714.8
【部分圖文】：

圖 2.1 血清和卵泡液維生素 D 水平的散點圖表 2.5 三組間助孕結局的比較F P獲卵率1.070 .345*2PN 率2.476 .087*優(yōu)胚率4.721 .010*注：*代表 ANOVA，其中 P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。表 2.6 三組間獲卵率、2PN 率和優(yōu)胚率的比較獲卵率 2PN 率 優(yōu)胚率VD 缺乏組 1.16±0.35 0.57±0.16 0.43±0.24VD 不足組 1.13±0.33 0.64±0.18 0.52±0.26VD 充足組 1.06±0.26 0.60±0.18 0.57±0.24

三組患者間BMI的比較

三組患者間年齡的比較
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本文編號：2866947