發(fā)布時間：2024-06-01 09:09

　　食欲素A作為一種重要的神經(jīng)肽類激素,通過與G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合影響生殖功能。為研究食欲素A對綿羊黃體化顆粒細胞的基因表達的影響及其信號網(wǎng)絡(luò),參照本實驗室已經(jīng)建立的綿羊卵巢顆粒細胞培養(yǎng)體系進行細胞培養(yǎng),在顆粒細胞內(nèi)聯(lián)合添加FSH、LH、E2,用ELISA進行鑒定是否黃體化;提取黃體化顆粒細胞組和添加Orexin A的黃體化顆粒細胞組的RNA,采用Illumina測序技術(shù)進行測序,用生物信息學(xué)方法對轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進行分析,在測序數(shù)據(jù)質(zhì)量控制合格的基礎(chǔ)上,對差異表達的基因進行篩選、功能注釋和富集分析;運用熒光定量PCR和Western blot對差異顯著基因進行驗證;其中篩選出的PRRT2可能參與cGMP-PKG、MAPK、Wnt等信號通路影響黃體化顆粒細胞孕酮分泌,所以對PRRT2進一步驗證,在黃體化顆粒細胞和外加OrexinA的黃體化顆粒細胞添加不同濃度(0.01 μmol/L、0.1 μmol/L、1 μmol/L)PRRT2抑制劑(HY-10230),ELISA檢測上清液中孕酮分泌量,WB檢測添加HY-10230和Orexin A的黃體化顆粒細胞中PRRT2和StAR含量。結(jié)果表明,黃體化...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１轉(zhuǎn)錄組測序流程??Ｆｉｇ．?１?Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ?ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ?ｐｒｏｃｅｓｓ??

?和ＲＮＡ翻譯以及挖掘潛在新功能性基因。??—??！?：?４?；?ｉ??Ｉ?ｔ?＇?ｔ?■?？?、??廣＇ｉ?？??４．?＿??Ｌ?、．ｖ?－＿??ｉ．?．?＇?．?：＂??ｉ?；?，?－?＊?ｆ?．?？?＊??ｒ?—??ｉ?４?？?＊?＊＊?ｆ??ｉ．．?”：??：．－Ｉ?？－....

圖２綿羊卵巢顆粒細胞??Ｆｉｇ．２?Ｏｖａｒｉａｎ?ｇｒａｎｕｌｏｓａ?ｃｅｌｌｓ??注：Ａ：原代顆粒細胞?Ｂ：Ｆ１代顆粒細胞??

?內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文?２３??４實驗結(jié)果??４．１卵巢顆粒細胞培養(yǎng)結(jié)果??體外培養(yǎng)卵巢顆粒細胞，鏡檢可見細胞形狀為梭形，狀態(tài)良好，傳代生長穩(wěn)定。??％?Ｂ?．??＊?＇?＂?■＇?＾?：＇?－Ｖ??；?：＇■；／＇?？；?＇?？?／?．？?＼?－?：?＾?＇??■?？廣？....

圖３卵巢顆粒細胞黃體化鑒定??

２４?食欲素Ａ對綿羊黃體化顆粒細胞孕酮分泌相關(guān)基因表達的調(diào)控研究???２５－Ｊ??ｒ。??ｉ：：ｌ?＿?圍??Ａ?Ｂ??圖３卵巢顆粒細胞黃體化鑒定??Ｆｉｇ．３?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｌｕｔｅｉｎｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｏｖａｒｉａｎ?ｇｒａｎｕｌｏｓａ?ｃｅｌｌｓ?....

圖４細胞總ＲＮＡ質(zhì)量檢測結(jié)果??Ｆｉｇ．４?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃｅｌｌｓ?ｔｏｔａｌ?ＫＮＡ?ｂｙ?ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ??

２４?食欲素Ａ對綿羊黃體化顆粒細胞孕酮分泌相關(guān)基因表達的調(diào)控研究???２５－Ｊ??ｒ。??ｉ：：ｌ?＿?圍??Ａ?Ｂ??圖３卵巢顆粒細胞黃體化鑒定??Ｆｉｇ．３?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｌｕｔｅｉｎｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｏｖａｒｉａｎ?ｇｒａｎｕｌｏｓａ?ｃｅｌｌｓ?....

本文編號：3985675