發(fā)布時(shí)間：2019-07-24 06:55

【摘要】：構(gòu)建了ORF2蛋白原核表達(dá)體系Rosetta-pMAL-c5X-ORF2,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后,對(duì)重組蛋白進(jìn)行SDSPAGE和Western blot分析,并采用鎳柱親和層析法進(jìn)行純化,以該蛋白為抗原建立液相蛋白芯片檢測(cè)方法。結(jié)果顯示:本試驗(yàn)成功表達(dá)了可溶性O(shè)RF2蛋白,具有良好的抗原性。液相蛋白芯片檢測(cè)方法對(duì)豬常見的其他疾病陽性血清無交叉反應(yīng),其批內(nèi)、批間變異系數(shù)分別為5%和6.6%。對(duì)102份臨床血清樣本檢測(cè)結(jié)果顯示,該方法與商品化ELISA試劑盒符合率為93.1%,關(guān)聯(lián)性卡方檢驗(yàn)顯示2個(gè)方法具有一致性(P0.01)。本試驗(yàn)為臨床HEV血清抗體的檢測(cè)提供了一種特異、靈敏的新型快速檢測(cè)技術(shù),為建立豬病多重檢測(cè)方法提供了基礎(chǔ)。
[Abstract]:The prokaryotic expression system Rosetta-pMAL-c5X-ORF2, of ORF2 protein was constructed and expressed by IPTG. The recombinant protein was analyzed by SDSPAGE and Western blot, and purified by nickel column affinity chromatography. The protein was used as antigen to establish a liquid phase protein chip detection method. The results showed that soluble ORF2 protein was successfully expressed and had good antigenicity. There was no cross reaction to the positive serum of other common diseases in pigs by liquid phase protein chip detection, and the coefficients of variation between batches and between batches were 5% and 6.6%, respectively. The results of 102 clinical serum samples showed that the coincidence rate between this method and commercial ELISA kit was 93.1%, and the correlation chi-square test showed that the two methods were consistent (P 0.01). This study provides a specific and sensitive new rapid detection technique for the detection of serum antibodies against HEV in clinic, and provides a basis for the establishment of multiple detection methods for pig diseases.
【作者單位】： 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院;
【基金】：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金項(xiàng)目(CARS-36)
【分類號(hào)】：S852.651

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