發(fā)布時間：2019-07-20 21:45

【摘要】：為獲得能高效水解大豆異黃酮糖苷的芽孢桿菌,利用七葉苷平板分離法從動物的新鮮糞便中篩選產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的芽孢桿菌菌株,然后對酶活最高的菌株進(jìn)行種屬鑒定和水解大豆異黃酮糖苷的研究.結(jié)果顯示:篩選到1株酶活力較高的芽孢桿菌R2-2,經(jīng)鑒定為解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens);該菌株有較高的糖苷水解能力,黃豆苷水解率最高達(dá)到53.65%,染料木苷為48.80%.
【圖文】：

的冰醋酸＋乙腈∶甲醇∶水＝３０∶１０∶６０（體積比）．２結(jié)果與分析２．１β－葡萄糖苷酶產(chǎn)生菌的篩選由于七葉苷（６，７－２－羥基－香豆素－β－Ｄ－葡萄糖苷）被β－葡萄糖苷酶分解會釋放出七葉素（６，７－２－羥基－香豆素），七葉素能與Ｆｅ３＋反應(yīng)形成黑色化合物，可依據(jù)菌落背面或周圍顯現(xiàn)黑色來篩選產(chǎn)β－葡萄糖苷酶的菌株，如圖１．經(jīng)纖維二糖培養(yǎng)基富集培養(yǎng)后，利用七葉苷分離培養(yǎng)基分離篩癬純化獲得１８株產(chǎn)酶較高的菌株．圖１菌株篩選結(jié)果Ｆｉｇ．１Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｏｆａｅｓｃｕｌｉｎｓｅｐａｒａｔｉｏｎｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ將初篩獲得的菌株進(jìn)行產(chǎn)酶發(fā)酵，提取粗酶液，按照酶活測定方法繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定菌株酶活，，進(jìn)行復(fù)篩．葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)為Ｙ＝０．００９Ｘ＋０．００４，Ｒ２＝０．９９８．各菌株的β－葡萄糖苷酶活性見表１，選取酶活最高且產(chǎn)芽孢的Ｒ２－２進(jìn)行后續(xù)研究．表１各菌株發(fā)酵液的β－葡萄糖苷酶活力測定結(jié)果Ｔａｂ．１Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆβ－ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｒｏｔｈｏｆｓｔｒａｉｎｓ菌株編號酶活／（Ｕ·ｍＬ－１）菌株編號酶活／（Ｕ·ｍＬ－１）Ｂ１－１０．１５６±０．０２５Ｃ３－３０．１７３±０．０２５Ｂ１－２０．１１０±０．０２０Ｒ１０．１２３±０．０２５Ｂ２－１０１３３±０．０２５Ｒ２－１０．２０７±０．０１５Ｂ３－１０．１８７±０．０３１Ｒ２－２０．２８３±０．０２５Ｂ３－２０．１７０±０．０

ａ．菌落；ｂ．菌體（×１０００）；ｃ．芽孢（×２０００）．圖２菌株Ｒ２－２的菌落、菌體和芽孢Ｆｉｇ．２Ｃｏｌｏｎｙ，ｍｙｃｅｌｉｕｍａｎｄｓｐｏｒｅｏｆｓｔｒａｉｎＲ２－２表２菌株Ｒ２－２的菌落、菌體和芽孢的形態(tài)特征Ｔａｂ．２Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｃｏｌｏｎｙ，ｍｙｃｅｌｉｕｍａｎｄｓｐｏｒｅｏｆｓｔｒａｉｎＲ２－２項目形態(tài)項目形態(tài)菌落形狀圓形菌體形態(tài)桿狀菌落大小中偏小革蘭氏染色＋菌落顏色白色，邊緣灰色菌體大�。ǎ保�８２～１．９３μｍ）×０．６５μｍ菌落邊緣不規(guī)則異染粒染色＋光學(xué)特性不透明芽孢形態(tài)圓柱形或橢圓形菌落表面干燥，有火山口芽孢著生位置端生或次端生＋代表陽性；－代表陰性．２．２．２１６ＳｒＲＮＡ基因序列測定、分析及系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建經(jīng)測定，菌株Ｒ２－２的１６ＳｒＲＮＡ基因序列的長度為１２７５ｂｐ．將基因序列提交ＮＣＢＩ數(shù)據(jù)庫獲得登錄號ＭＦ０００３５０．與ＥｚＢｉｏＣｌｏｕｄ數(shù)據(jù)庫中的核苷酸序列進(jìn)行在線同源性序列分析．采用ＭＥＧＡ．５軟件進(jìn)行多序列比對，用鄰位連接法構(gòu)建發(fā)育樹（圖３），結(jié)果顯示菌株Ｒ２－２與Ｂａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ親緣關(guān)系最接近．圖３Ｒ２－２菌株１６ＳｒＲＮＡ基因序列系統(tǒng)發(fā)育樹Ｆｉｇ．３Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｏｆ１６ＳｒＲＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｓｔｒａｉｎＲ２－２６２４河北大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版）第３７卷
【作者單位】： 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：河北省重點研發(fā)計劃農(nóng)業(yè)關(guān)鍵共性技術(shù)攻關(guān)專項(16226604D) 河北省技術(shù)創(chuàng)新引導(dǎo)計劃科技型中小企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新資金專項(15C1303121015) 滄州市科技支撐計劃項目(161201007D) 保定市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計劃項目(16ZN007)
【分類號】：S816


本文編號：2516924