目的構(gòu)建新型抗炎因子IL-37的真核表達(dá)載體p IRES2-EGFP/IL-37(p IEIL37)并進(jìn)行鑒定。方法 Trizol法提取THP-1細(xì)胞RNA,RT-PCR擴(kuò)增IL-37基因,將目的基因片段定向克隆到真核表達(dá)載體p IRES2-EGFP;將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5,并進(jìn)行PCR、雙酶切和DNA測序鑒定。結(jié)果瓊脂糖凝膠電泳顯示1條約710 bp大小的條帶;雙酶切結(jié)果顯示約675 bp大小的條帶;DNA測序表明IL-37基因正確插入真核表達(dá)載體p IRES2-EGFP。結(jié)論成功構(gòu)建IL-37真核表達(dá)載體p IRES2-EGFP/IL-37。

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圖3pIEIL37PCR鑒定250100

分特異片段的擴(kuò)增。PCR反應(yīng)的條件如下：94℃預(yù)變性5min、PCR鑒定也顯示擴(kuò)增出了IL-37的部分性的片段約94℃變性30s、55℃退火30s，72℃延伸30s，共30220bp(見圖3)。DNA測序結(jié)果顯示IL-37基因正確插個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸7min。PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂....

圖4pIEIL37測序部分結(jié)果

indstotheIL-18receptorbutdoesnot的作用[J].中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào),2013,35(3):381-386.induceIFN-production[J].Cytokine,2002,18(2):61-70.[16]GaoW,KumarS,LotzeM....

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