發(fā)布時(shí)間：2025-01-14 07:42

　　目的：利用噬菌體展示隨機(jī)十五肽庫篩選技術(shù)，獲得與人細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1)特異性靶向結(jié)合的小肽，并明確其生物學(xué)功能，為進(jìn)一步研究肽導(dǎo)向藥物提供基礎(chǔ)。方法：采用固相包被分子和冰凍病理組織切片兩種方法對噬菌體展示隨機(jī)肽庫進(jìn)行親和淘選，利用ELISA法篩選出能與人ICAM-1特異結(jié)合并具有高度親和力的陽性噬菌體單克隆，提取其質(zhì)粒DNA進(jìn)行測序，分析陽性序列的特點(diǎn)。利用ELISA法和蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)模擬技術(shù)從陽性噬菌體單克隆中選取出與人ICAM-1親和力最高的單克隆作為目的肽序列所在的噬菌體單克隆，計(jì)算目的噬菌體單克隆與ICAM-1的親和常數(shù)，進(jìn)一步推論目的肽的氨基酸序列，并在體外合成、純化及標(biāo)記目的肽進(jìn)行體外和動(dòng)物體內(nèi)研究。采用ELISA法檢驗(yàn)合成目的肽與人ICAM-1的結(jié)合性能并行拮抗實(shí)驗(yàn)；利用免疫組織化學(xué)的方法比較合成目的肽、ICAM-1的單克隆抗體在炎癥組織中結(jié)合部位。將等劑量的合成目的肽和對照無關(guān)19肽注射入單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UUO)的動(dòng)物模型體內(nèi)，觀察兩種小肽在動(dòng)物模型雙側(cè)腎臟的分布。結(jié)果：采用兩種方法分別經(jīng)過4-5輪的親和淘選，經(jīng)ELISA篩選并測序后得到6個(gè)與ICAM-1高親...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1ELISA比較6種噬菌體單克隆與ICAM一1的親和力經(jīng)EL工SA方法反復(fù)比較，認(rèn)定與ICAM一1結(jié)合的親和力最高的噬菌體展示單克隆為14#

助87士57體展達(dá)可一10·29l/mol，#不能列與定。

圖3.3.1手術(shù)組注射FITC一日的肚后的梗阻側(cè)腎臟

圖3.3.2手術(shù)組注射FITC一無關(guān)膚后的梗阻側(cè)腎臟UUO模型為經(jīng)典急性腎小管間質(zhì)炎癥模型，術(shù)后3d時(shí)腎小管間質(zhì)中

圖3.3.2手術(shù)組注射FITC一無關(guān)膚后的梗阻側(cè)腎臟UO模型為經(jīng)典急性腎小管間質(zhì)炎癥模型，術(shù)后3d時(shí)腎小

本文編號：4026626