發(fā)布時間：2024-12-21 20:42

　　 目的構建PhoP和PhoR基因過表達結核分枝桿菌國際標準強毒株H37Rv(以下簡稱H37Rv),檢測不同電壓條件下電轉化構建的PhoP/PhoR基因過表達H37Rv菌株PhoP/PhoR基因的表達水平。方法提取并鑒定結核分枝桿菌重組穿梭質粒pMV361-PhoP和pMV361-PhoR,利用電轉化技術將結核分枝桿菌重組穿梭質粒pMV361-PhoP和pMV361-PhoR導入H37Rv的感受態(tài)細胞中,構建PhoP/PhoR基因過表達H37Rv,應用實時熒光定量PCR檢測不同電壓條件下電轉化構建的PhoP/PhoR基因過表達H37Rv的PhoP/PhoR基因表達水平。結果成功構建PhoP/PhoR基因過表達H37Rv。應用實時熒光定量PCR檢測不同電壓條件下電轉化構建的PhoP/PhoR基因過表達H37Rv的PhoP/PhoR基因表達水平,其中在電壓為2 300～2 500V的范圍內,電壓越高,電轉化菌的PhoP/PhoR基因表達量越高。結論成功構建了PhoP/PhoR基因過表達H37Rv菌株,以電壓為2 500V電轉化構建的PhoP/PhoR基因過表達H37Rv的PhoP/PhoR基因...

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【文章目錄】：
材料和方法
    1 材料
        1.1 菌株
        1.2 主要試劑和儀器
    2 方法
        2.1 pMV361-Phop和pMV361-PhoR質粒的提取
        2.2 制備H37Rv感受態(tài)細胞
        2.3 重組質粒電轉化導入H37Rv感受態(tài)細胞
        2.4 PhoP/PhoR基因過表達H37Rv的檢測及鑒定
        2.5 PhoP/PhoR基因過表達H37Rv總RNA的提取
        2.6 總RNA的反轉錄反應
        2.7 實時熒光定量PCR檢測MTB
        2.8 統(tǒng)計學分析
    3 PhoP/PhoR基因過表達H37Rv質粒的提取與鑒定
    4 PhoP/PhoR基因的PCR擴增及雙酶切鑒定
    5 MTB總RNA的提取及鑒定
    6 PhoP/PhoR基因過表達H37Rv的Phop基因相對表達量
    7 PhoP/PhoR基因過表達H37Rv的PhoR基因相對表達量
    8 H37Rv、BCG、H37Ra的PhoP/PhoR基因相對表達量比較
結果
    1 pMV361-Phop和pMV361-PhoR質粒的提取與鑒定
    2 PhoP/PhoR基因過表達H37Rv耐藥性檢測
討論



本文編號：4018878