發(fā)布時(shí)間：2020-12-13 02:13

　　近年來在海洋軟體動(dòng)物貽貝中發(fā)現(xiàn)了新的抗菌肽家族。該家族是由特定基因編碼的一類具有廣譜抗菌活性的小分子多肽，根據(jù)貽貝抗菌肽家族一級(jí)結(jié)構(gòu)的不同可以將其分為4組：Defensins，Mytilins，Myticins和Mytimycin。由于抗菌肽天然產(chǎn)量低，合成抗菌肽的價(jià)格又太昂貴，因此應(yīng)用基因工程技術(shù)對(duì)其進(jìn)行克隆與表達(dá)，將是研究和開發(fā)利用抗菌肽的一條有效途徑。 MyticinA是貽貝抗菌肽Myticins中的一種，含有40個(gè)氨基酸，對(duì)革蘭陽性菌有抑制作用，但對(duì)革蘭陰性菌和真菌的抑制作用不明顯。本課題選擇MyticinA為研究對(duì)象，首先從貽貝體內(nèi)應(yīng)用RT-PCR方法獲得抗菌肽Myticin A基因，然后將其克隆到畢赤酵母表達(dá)載體中，獲得的MyticinA酵母工程菌能表達(dá)貽貝抗菌肽MyticinA，對(duì)表達(dá)樣品進(jìn)行純化和活性研究。 研究的主要內(nèi)容： 1、MyticinA基因的克隆和重組載體pMD18-MyticinA的構(gòu)建； 2、重組表達(dá)載體pPIC9K-Myticin A的構(gòu)建； 3、MyticinA在畢赤酵母工程菌GS115／pPIC9K-MyticinA中的... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

一mRNA的電泳鑒定Figl一3EleetroPhoresisresultsofto妞1mRNAane、rensaeoou

一185一5寫圖1一mRNA的電泳鑒定Figl一3EleetroPhoresisresultsofto妞1mRNALanel、2di價(jià)rentsamPleofbodyfiuid2.MyticinAcDNA的合成、基因片段的PCR擴(kuò)增、克隆及序列分析以0119。(dT)18為引物，以貽貝的mRNA為模板，用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得136bp的特異擴(kuò)增條帶(圖1一4)，將PCR產(chǎn)物膠回收后，克隆于pMD18一T上，轉(zhuǎn)化大腸桿菌JMlog

抗菌膚Myticin人的克隆表達(dá)及生物學(xué)活性研究第一部分3.克隆的篩選和鑒定上述獲得的轉(zhuǎn)化子經(jīng)華諾生物公司進(jìn)行DNA序列測定(圖1一5)，結(jié)果證明，獲得含有MyticinA基因序列的重組質(zhì)粒pMD18一MyticinA，獲得的MyticinA基因序列與天然產(chǎn)物MyticinA基因完全相同[’l。圖1一5ph4D18一M夕ticinA序列測定圖Figl一5DNASequeneeanalysisofPMD18一MytieinA4.pPIeg一MytieinA的篩選與鑒定含MytieinA基因的Xhol/EeoRI酶切片斷與載體ppICg的眾01/EeoRI片斷連接，轉(zhuǎn)化大腸大腸桿菌ToP10，得到轉(zhuǎn)化子，其質(zhì)粒DNA經(jīng)酶切電泳鑒定，篩選重組質(zhì)粒，結(jié)果如圖1一6所示。1號(hào)泳道為質(zhì)粒pPICg;2號(hào)泳道為質(zhì)粒pPICg經(jīng)勸。I和EcoRI酶切;3號(hào)泳道為重組質(zhì)粒pPICg一MyticinA經(jīng)xhol和EcoRI酶切。由圖可見，眾。I尼coRI可切下一條清晰的136bP的小片斷和一條大片斷

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鎘中毒大鼠睪丸與肝臟金屬硫蛋白表達(dá)的時(shí)相研究[J]. 任緒義,周雍,張建鵬,馮偉華.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2002(05)
[2]內(nèi)源性抗生素肽──天然免疫的重要介質(zhì)[J]. 王伯瑤,吳崎.  生命科學(xué). 1999(S1)



本文編號(hào)：2913699