發(fā)布時間：2020-12-05 18:54

　　為探討27nt-miRNA對間充質(zhì)干細(xì)胞向血管平滑肌細(xì)胞分化影響,構(gòu)建27nt-miRNA過表達(dá)、反義序列Anti-27nt-miRNA以及陰性對照的表達(dá)質(zhì)粒,慢病毒包裝后分別轉(zhuǎn)染人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（hUCMSC）,加入Ⅳ型膠原誘導(dǎo)hUCMSC定向分化為血管平滑肌細(xì)胞。四唑鹽（MTT）比色法檢測分化后細(xì)胞活力,免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測分化后細(xì)胞SM22α（兔抗平滑肌22α,smooth muscle 22α）的表達(dá),Western印跡法和RT-PCR檢測分化后細(xì)胞內(nèi)的SMA （兔抗平滑肌肌動蛋白,smooth muscle actin） mRNA、SM 22α mRNA及其蛋白質(zhì)表達(dá)情況。經(jīng)檢測,27nt-miRNA過表達(dá)分化組與陰性對照組相比,細(xì)胞活力下降20.48%（P<0.05）,SMA mRNA、SM22α mRNA及其蛋白質(zhì)表達(dá)量明顯升高（P<0.05）;而Anti-27nt-miRNA分化組細(xì)胞活力上升了18.07%（P<0.05）,SMA mRNA、SM22α mRNA及其蛋白質(zhì)表達(dá)量下降（P<0.05）。綜上所述,27nt-miRNA能夠促進(jìn)間充質(zhì)... 

【文章來源】：生物工程學(xué)報. 2019年02期 第290-297頁 北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

顯微鏡下觀察到hUCMS的轉(zhuǎn)染情況

ISSN1000-3061CN11-1998/Q生物工程學(xué)報ChinJBiotechhttp://journals.im.ac.cn/cjbcn294圖2MTT檢測27nt-miRNA對細(xì)胞活力影響Fig.2MTTdetectstheeffectof27nt-miRNAoncellviability.xs.n=3.*P<0.05vs.NC.P<0.05)，而Anti-27nt-miRNA組升高18.07%(0.83±0.03vs.0.98±0.07，P<0.05)。以上結(jié)果提示，27nt-miRNA抑制hUCMSC分化后細(xì)胞的活力。2.327nt-miRNA對VSMC分化標(biāo)志物SM22α表達(dá)的影響用免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法(ICC)檢測分化后各組細(xì)胞中的VSMC特異性蛋白SM22α的表達(dá)量，如圖3所示，SM22α蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞胞漿，陽性染色呈棕黃色顆粒。運用IPP6.0軟件對SM22α蛋白表達(dá)量進(jìn)行計算：平均光密度(Meanopticaldensity)越大，SM22α蛋白表達(dá)越高。與陰性對照NC組比較，27nt-miRNA組SM22α表達(dá)量增加63.64%(0.22±0.02vs.0.36±0.04，P<0.05)；而Anti-27nt-miRNA組SM22α表達(dá)量下降36.36%(0.22±0.02vs.0.14±0.03，P<0.05)。結(jié)果提示，27nt-miRNA促進(jìn)了VSMC分化標(biāo)志物SM22α表達(dá)。2.4RT-PCR檢測27nt-miRNA對SMAmRNA和SM22αmRNA的影響用RT-PCR檢測分化后各組細(xì)胞的SMAmRNA、SM22αmRNA的表達(dá)水平(圖4)。與陰圖3免疫組化檢測27nt-miRNA對細(xì)胞SM22α蛋白表達(dá)的影響Fig.3Effectof27nt-miRNAontheproteinexpressionofSM22αwasdetectedbyimmunohistochemistry,xs.n=3,*P<0.05vsNC.圖4PT-PCR檢測27nt-miRNA對SMAmRNA和SM22αmRNA表達(dá)的影響Fig.4Effectof27nt-miRNAonthemRNAexp

SM22α表達(dá)量下降36.36%(0.22±0.02vs.0.14±0.03，P<0.05)。結(jié)果提示，27nt-miRNA促進(jìn)了VSMC分化標(biāo)志物SM22α表達(dá)。2.4RT-PCR檢測27nt-miRNA對SMAmRNA和SM22αmRNA的影響用RT-PCR檢測分化后各組細(xì)胞的SMAmRNA、SM22αmRNA的表達(dá)水平(圖4)。與陰圖3免疫組化檢測27nt-miRNA對細(xì)胞SM22α蛋白表達(dá)的影響Fig.3Effectof27nt-miRNAontheproteinexpressionofSM22αwasdetectedbyimmunohistochemistry,xs.n=3,*P<0.05vsNC.圖4PT-PCR檢測27nt-miRNA對SMAmRNA和SM22αmRNA表達(dá)的影響Fig.4Effectof27nt-miRNAonthemRNAexpressionofSMAmRNAandSM22αmRNAwasdetectedbyRT-PCR.xs.n=3.*P<0.05vsNC.性對照NC組比較，27nt-miRNA組的SM22αmRNA表達(dá)量增加31.40%(0.86±0.03vs.1.13±0.08，P<0.05)、SMAmRNA表達(dá)量上升25.00%(0.72±0.03

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]27-nt miRNA對血管內(nèi)皮細(xì)胞eNOS表達(dá)/活性的調(diào)節(jié)及其代謝產(chǎn)物的影響[J]. 羅雪蘭,陳偉,莫國君,楊鵬,歐和生.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2017(08)
[2]內(nèi)含子源性miRNA通過轉(zhuǎn)錄因子AP1調(diào)節(jié)內(nèi)皮型一氧化氮合酶表達(dá)及血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用[J]. 李玉媚,王輝,張文宇,陳偉,胡楠,歐和生.  中國動脈硬化雜志. 2014(07)



本文編號：2899923