發(fā)布時(shí)間：2020-11-13 04:41

　　 大量研究表明，五羥色胺(5-HT)作為晡乳類(lèi)動(dòng)物腦內(nèi)的一種神經(jīng)遞質(zhì)或調(diào)質(zhì)，具有調(diào)節(jié)記憶、敵對(duì)行為、焦慮、抑郁、睡眠和神經(jīng)內(nèi)分泌的功能。杏仁核的五羥色胺能神經(jīng)元來(lái)自背側(cè)中縫核，其軸突和末梢較高密度地分布在杏仁核的大部分區(qū)域。杏仁核對(duì)於情緒和情感的控制和調(diào)節(jié)具有密切的關(guān)系，而且可能參與精神分裂癥、抑郁、癲癇和應(yīng)激后緊張性疾病的病理過(guò)程。在這些疾病中，五羥色胺能神經(jīng)傳遞的重要作用已被廣泛認(rèn)可。 在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)、活動(dòng)依賴性的突觸傳遞效能的改變被認(rèn)為是記憶貯存的基本模式。在這類(lèi)活動(dòng)依賴性的突觸可塑性中，長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)作為最重要的一種模型已被大量地研究。長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)最初是在海馬的興奮性突觸發(fā)現(xiàn)的，之后這種現(xiàn)象在包括杏仁核在內(nèi)的其它腦區(qū)相繼被報(bào)道。杏仁核的突觸可塑性與情感的形成和異常、自主性行為等密切相關(guān)。大量證據(jù)表明，五羥色胺等許多神經(jīng)調(diào)質(zhì)具有調(diào)節(jié)突觸可塑性的作用。基底外側(cè)杏仁核富含五羥色胺能終末端并表達(dá)較高密度的五羥色胺Ⅱ受體，但五羥色胺Ⅱ受體對(duì)突觸可塑性和突觸傳遞的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制目前尚不清楚，有待于深入的研究。 本課題采用細(xì)胞內(nèi)記錄、場(chǎng)電位記錄和熒光成像等技術(shù)，在大白鼠腦片上研究五羥色胺Ⅱ受體選擇性的激動(dòng)劑DOI對(duì)基底外側(cè)杏仁核神經(jīng)細(xì)胞的突觸可塑性、突觸傳遞和鈣內(nèi)流的調(diào)節(jié)作用。來(lái)自皮層的神經(jīng)纖維經(jīng)外囊投射至基底外側(cè)杏仁核，刺激外囊可激活皮層的興奮輸入。在解剖顯微鏡下把雙極鎢刺激電極置于外囊，把記錄微電極(包括細(xì)胞內(nèi)記錄電極和場(chǎng)電位記錄電極)的尖端置于杏仁核的基底外側(cè)區(qū)，刺激電極與記錄電極之間的距離大約為2毫米。刺激信號(hào)由MASTER～8刺激器產(chǎn)生，通過(guò)光電刺激隔離 器產(chǎn)生恒流輸出。實(shí)驗(yàn)中采用波寬為0.lms、頻率為0.1赫茲的單相方波刺激腦片的外 囊，在基底外側(cè)杏仁核區(qū)用盲插的方法進(jìn)行細(xì)胞刺穿記錄細(xì)胞內(nèi)突觸電反應(yīng)，當(dāng)記錄場(chǎng) 電位時(shí)，記錄微電極的尖端置于腦片表面下大約250微米處。在突觸可塑性的實(shí)驗(yàn)研究 中，采用o頻率波(TBS)刺激外囊，以誘發(fā)短或長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)現(xiàn)象，即以SHz頻率送出短時(shí) 間高頻串脈沖(5個(gè)脈沖，頻率為100赫茲)，刺激持續(xù)時(shí)間為4秒，之所以用e頻率波刺 激是因?yàn)樗�模擬學(xué)習(xí)過(guò)程錐體細(xì)胞的放電模式。細(xì)胞內(nèi)電位通過(guò)Aoc lamp一2B放大器放 大，場(chǎng)電位通過(guò)一差分放大器放大，輸出信號(hào)通過(guò)1200數(shù)字采集接口，輸入計(jì)算機(jī)，由 軟件whole Cell eleetrophysiology program(WCP)進(jìn)行信號(hào)的記錄、分析和處理。 應(yīng)用單串的e頻率波刺激，在基底外側(cè)杏仁核區(qū)可誘發(fā)強(qiáng)直后增強(qiáng)及之后的持續(xù) 時(shí)間約為10分鐘的短時(shí)程增強(qiáng)。e頻率波刺激30分鐘后，細(xì)胞內(nèi)記錄突觸電位的斜率為 基礎(chǔ)值的96.8士2.20/0(n=5，戶0.05)，場(chǎng)電位的斜率為基礎(chǔ)值的1巧.5士5.10k(n=5， 戶0.05)。灌流液中加100剛DOI，灌流15一20分鐘，對(duì)基礎(chǔ)的突觸反應(yīng)沒(méi)有明顯的作 用。然而，在DOI存在的情況下，單串的0頻率波刺激就可引起基底外側(cè)杏仁核的突觸 可塑性從短時(shí)程增強(qiáng)轉(zhuǎn)為長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)，即表現(xiàn)為o波刺激作用后30分鐘，增強(qiáng)的場(chǎng)電位 和細(xì)胞內(nèi)興奮性突觸后電位的斜率仍然分別維持在 164士n.8%(n=7，盡0.01)和 166.6士31.0%(n=5，盡0.05)。為檢驗(yàn)DOI對(duì)上述e波誘導(dǎo)的突觸增強(qiáng)的易化作用是否依 賴于NMDA受體的激活，NMDA受體拮抗劑APV與DO工加在一起灌流，在這種情況下，DOI易 化e頻率波引導(dǎo)的突觸增強(qiáng)作用被阻斷，e波刺激30分鐘后，場(chǎng)電位的斜率仍保持在基 礎(chǔ)值的1巧.4士5.1%(n=4，戶0.05)。上述結(jié)果表明在基底外側(cè)區(qū)杏仁核，由e波刺激 激活NMDA受體是 DOI易化突觸可塑性的必要環(huán)節(jié)。為進(jìn)一步確認(rèn)DOI對(duì)0波刺激誘導(dǎo)的突 觸可塑性的易化作用是否與增強(qiáng)NMDA受體的功能相關(guān)，我們檢驗(yàn)了DOI對(duì)基底外側(cè)杏仁 核區(qū)NMDA受體介導(dǎo)的突觸電位及鈣內(nèi)流的調(diào)節(jié)作用。灌流液中加100剛DOI灌流巧分 鐘，DOI明顯加強(qiáng)NMDA受體介導(dǎo)的突觸電位而不影響配對(duì)雙脈沖刺激引起的易化作用 (即F)的比率，提示，DOI可能是通過(guò)突觸后五輕色胺n受體而加強(qiáng)NMDA受體介導(dǎo)的突 觸反應(yīng)。在D沮作用下，NMDA受體介導(dǎo)的興奮性突觸后電位顯著增強(qiáng)，至基礎(chǔ)值的 144.1士6.8%(壞0.01，n=12)。而且，DOI對(duì)突觸可塑性和NMDA受體調(diào)節(jié)的興奮性突觸后 電位的易化作用呈劑量依賴性，在20和100剛時(shí)均作用明顯，而1剛時(shí)無(wú)作用。100剛 D0工灌流腦片5分鐘，雖然未觀察到其本身引起的細(xì)胞內(nèi)鈣反應(yīng)，NMDA介導(dǎo)的鈣內(nèi)流卻增 加了43.0士13.4%(盡0.01，n=19)。然而，在基底外側(cè)杏仁核區(qū)，DOI對(duì)AMPA/kainate 受體介導(dǎo)的突觸傳遞功能并無(wú)影響，很顯然，這說(shuō)明DOI并不是通過(guò)易化突觸前的谷氨 酸釋放而調(diào)節(jié)NMDA受體功能的，否則，DOI應(yīng)當(dāng)也可增強(qiáng)AMPA/kainate受體介導(dǎo)的突觸 電位。DOI對(duì)突觸可塑性和NMDA受體介導(dǎo)的興奮性突觸后電位的易化作用可被五輕色胺 ZA/ZC受體選擇性的拮抗劑ketanserin、五輕色胺2C受體拮抗劑RS102221所阻斷。這些 結(jié)果表明，五輕色胺ZA/ZC受體的激活可增強(qiáng)基底外側(cè)杏仁核區(qū)NMDA受體介導(dǎo)的突觸功 能。本項(xiàng)研究首次發(fā)現(xiàn)五輕色胺n受體對(duì)腦部杏仁核區(qū)的NMDA受體功能具調(diào)節(jié)作用，這
【學(xué)位單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類(lèi)】：R33
【文章目錄】：
一. 摘要
二. 英文縮寫(xiě)表
三. 前言
四. 材料和方法
    杏仁核腦片制備
    細(xì)胞內(nèi)和場(chǎng)電位記錄
    刺激
    膜阻抗的測(cè)定
    細(xì)胞內(nèi)鈣測(cè)定
    藥物應(yīng)用
    統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
五. 結(jié)果
    DOI易化θ頻率波刺激誘導(dǎo)的突觸可塑性
    DOI易化作用是通過(guò)激活五羥色胺2A/2C受體起作用
    DOI特異性地增強(qiáng)突觸后NMDA受體及通道的功能
六. 討論
    五羥色胺2A/2C受體的激活可易化突觸可塑性
    DOI對(duì)NMDA受體功能的增強(qiáng)作用
七. 總結(jié)
八. 參考文獻(xiàn)
九. 文獻(xiàn)綜述
    中樞5-HT系統(tǒng)
    5-HT能神經(jīng)元及其受體
    皮層的5-HT系統(tǒng)
    海馬的5-HT系統(tǒng)
    杏仁核的5-HT系統(tǒng)
    5-HT的研究對(duì)醫(yī)學(xué)的貢獻(xiàn)
    總結(jié)
    參考文獻(xiàn)
十. 致謝

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2881742