發(fā)布時間：2020-11-09 20:47

　　 目的探究脂筏在柯薩奇病毒A組16型(CA16)感染RD細胞中的作用。方法使用膽固醇抑制劑甲基-β-環(huán)糊精(MβCD)驅(qū)散細胞膜膽固醇并破壞脂筏,分別采用RT-PCR和Western blot技術,在mRNA以及蛋白質(zhì)水平檢測MβCD處理對于CA16病毒感染RD細胞的影響。在RD細胞感染不同時間使用MβCD處理,并檢測其對CA16病毒感染的影響。MβCD處理后,使用添加外源膽固醇的方式對細胞膜膽固醇進行補充,觀察CA16病毒感染的變化。通過Western blot檢測CA16感染后宿主細胞Akt磷酸化水平的變化,以及MβCD處理對宿主細胞Akt磷酸化的影響。結(jié)果 MβCD以劑量依賴方式抑制CA16病毒對RD細胞的感染,MβCD處理濃度為2.5、5、7.5、10 mmol/L時CA16 VP1的mRNA水平和蛋白質(zhì)水平表達均出現(xiàn)降低,差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在感染前1 h使用MβCD處理CA16 VP1 mRNA和蛋白質(zhì)水平的表達分別降低了(84.23±3.70)%和(81.80±5.09)%,與未做處理的對照組相比具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在MβCD處理后添加200、300、400μg/ml的外源膽固醇,VP1 mRNA水平的表達恢復了(26.63±7.69)%、(77.06±6.91)%、(91.36±12.09)%,VP1蛋白質(zhì)水平的表達恢復了(28.71±8.27)%、(51.14±5.82)%、(58.14±7.35)%,且VP1表達與MβCD單獨處理相比差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。CA16感染30 min時pAkt表達上升了(91.86±27.14)%,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。CA16感染MβCD預處理過的細胞pAkt未發(fā)生顯著變化(P0.05)。結(jié)論脂筏在CA16病毒感染RD細胞與激活PI3K/Akt通路中起重要作用。
【部分圖文】：

水平抑制ＣＡ１６病毒的感染。２ＭβＣＤ處理對ＣＡ１６病毒蛋白質(zhì)水平的影響使用不同濃度的ＭβＣＤ對ＲＤ細胞進行預處理，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ檢測病毒感染２４ｈ后細胞內(nèi)ＣＡ１６病毒ＶＰ１蛋白表達，結(jié)果見圖２。隨著ＭβＣＤ預處理濃度的不斷增加，ＣＡ１６病毒ＶＰ１蛋白呈現(xiàn)劑量依賴性減少，與對照組相比差異均具有統(tǒng)計學意義（Ｐ＜０．０５）。說明ＭβＣＤ的處理可以在蛋白質(zhì)水平抑制ＣＡ１６病毒的感染。圖２ＭβＣＤ在蛋白質(zhì)水平抑制ＣＡ１６病毒Ｆｉｇ．２ＭβＣＤｉｎｈｉｂｉｔＣＡ１６ｉｎｐｒｏｔｅｉｎｌｅｖｅｌ３ＭβＣＤ處理時間對ＣＡ１６病毒感染的影響在感染前１ｈ、０ｈ以及感染后１ｈ分別用１０ｍｍｏｌ／ＬＭβＣＤ對ＲＤ細胞進行處理，２４ｈ后分別采用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ檢測病毒在細胞內(nèi)的復制，結(jié)果見圖３。感染前１ｈ、０ｈ以及感染后１ｈ處理組與對照組相比，ＶＰ１ｍＲＮＡ水平表達分別降低了（８４．２３±３．７０）％、（３４．４０±１０．６１）％、（６４．６７±６．７０）％，蛋白質(zhì)水平的表達分別降低了（８１．８０±５．０９）％、（２４．４０±９．６１）％、（４４．６７±６．８８）％。在感染前１ｈ用ＭβＣＤ處理細胞對ＣＡ１６病毒的感染抑制效果尤為明顯，與未用藥物處理的對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義（Ｐ＜０．０５）。說明ＭβＣＤ對ＣＡ１６病毒的抑制主要體現(xiàn)在抑制病毒的入侵。·
【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 李興志;李鵬飛;劉昕旸;程麗鑫;鄭亮;張雅婷;沈玉江;武雪寧;徐嘉欣;王顯赫;張華;曹宏偉;;脂筏在柯薩奇病毒A組16型感染RD細胞中的作用[J];中國病原生物學雜志;2019年06期

2 賈衛(wèi) ,莊然 ,李琦 ,曹云新 ,劉雪松 ,宋朝君 ,金伯泉;凋亡誘導配體TRAIL與細胞膜脂筏形成的關系[J];第四軍醫(yī)大學學報;2005年03期

3 史紅艷;秦鄂德;;脂筏與病毒感染的相關性研究進展[J];軍事醫(yī)學科學院院刊;2009年04期

4 石毅;;脂筏在病原微生物侵入細胞中的作用[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2006年02期

5 馬克智;人體內(nèi)膽固醇含量越低越好嗎[J];生物學教學;2000年10期

6 邵翅;楊林;;調(diào)控膽固醇吸收的分子通路[J];生物信息學;2015年04期

7 姚茂平;陳雄庭;;質(zhì)膜脂筏的研究進展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2007年26期

8 鐘萬芯;;膽固醇[J];科學教育;1996年01期

9 李則一;膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運與高密度脂蛋白受體[J];中國運動醫(yī)學雜志;2000年01期

10 徐墨耕,任雲(yún)峯;測定烏鱧Ophiocepalus argus腦中膽固醇的初步報告[J];動物學報;1955年01期

相關博士學位論文 前7條

1 徐廷雙;脂筏參與調(diào)控PSGL-1介導中性粒細胞黏附的作用和機制研究[D];東北師范大學;2014年

2 易志剛;脂筏相關的丙型肝炎病毒基因復制復合體的研究[D];復旦大學;2006年

3 周孟華;脂筏成份調(diào)節(jié)Kv2.1的機制及在凋亡中作用的研究[D];復旦大學;2011年

4 閔一帆;脂筏在TRAIL引起的細胞凋亡早期事件中的作用研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2007年

5 朱勇喆;脂筏對丙型肝炎病毒、日本腦炎病毒和腸道病毒71型細胞入侵的影響及其機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2012年

6 羅侃;量子點標記的朊蛋白在活細胞內(nèi)的實時示蹤研究[D];武漢大學;2010年

7 李振魯;計算機模擬生物膜膽固醇及膜與多肽的相互作用[D];南京大學;2015年

相關碩士學位論文 前10條

1 李賢舟;膜膽固醇在腸道病原菌黏附和侵襲腸上皮細胞中作用探析[D];揚州大學;2014年

2 竇秀靜;細胞膜膽固醇對豬輪狀病毒感染的影響[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2014年

3 袁敏;SAK-HV蛋白對小腸膽固醇吸收的影響及機制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2015年

4 楊琰;膽固醇誘導的大鼠小腸細胞UPR及其與酰基輔酶A：膽固醇�；�轉(zhuǎn)移酶ACAT2關系的研究[D];華中科技大學;2008年

5 隋文;脂筏介導副粘病毒入胞途徑的初步探討[D];大連醫(yī)科大學;2007年

6 楊清林;膽固醇修飾的s-BLM對ss-DNA的電化學響應研究[D];重慶大學;2005年

7 曹惠雅;脂筏特異蛋白對囊泡轉(zhuǎn)運作用的初步研究[D];華中科技大學;2005年

8 楊威;不同強度運動對大鼠心肌細胞膜膽固醇平衡及穩(wěn)定性的影響研究[D];湖北大學;2014年

9 紀旭;益生乳酸菌中膽鹽水解酶的分離、純化[D];大連工業(yè)大學;2009年

10 吳潔穎;基于電聚合吡咯的電流式膽固醇生物傳感器[D];浙江大學;2006年

本文編號：2876948