發(fā)布時間：2018-02-27 12:56

  本文關(guān)鍵詞： Tim- 抗體 單克隆 LD U細(xì)胞 炎性因子 膿毒癥　出處：《軍事醫(yī)學(xué)》2014年08期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的制備抗人Tim-3單抗并評價其生物學(xué)活性,為干預(yù)Tim-3表達(dá)失調(diào)引發(fā)的疾病提供實驗基礎(chǔ)。方法制備重組人Tim-3蛋白,常規(guī)方法免疫BALB/c小鼠,篩選出陽性克隆,并對其識別、中和活性進(jìn)行體內(nèi)外驗證,探討其作為免疫干預(yù)手段的可行性。結(jié)果 1獲得一株能夠分泌具有較好結(jié)合活性的抗人Tim-3單克隆抗體細(xì)胞株(克隆號L3D),其分泌的免疫球蛋白亞型為IgG2a;2流式實驗結(jié)果表明,該抗體能夠結(jié)合人U937細(xì)胞上的Tim-3分子,且與小鼠RAW 264.7細(xì)胞上Tim-3有一定的交叉結(jié)合活性;3該抗體能夠阻斷Gal-9分子誘導(dǎo)的人THP1細(xì)胞凋亡,具有良好的體外中和活性;4體內(nèi)注射L3D,顯示該抗體能夠顯著加重膿毒血癥模型小鼠病情,提高炎性因子的表達(dá)水平,顯示出其良好的體內(nèi)中和活性。結(jié)論成功制備一株分泌抗人Tim-3抗體的細(xì)胞株,其良好的結(jié)合及中和活性為基于Tim-3表達(dá)異常相關(guān)疾病的干預(yù)提供了實驗基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to prepare a monoclonal antibody against human Tim-3 and evaluate its biological activity. Methods Recombinant human Tim-3 protein was prepared and immunized BALB/c mice by routine method, and positive clones were screened and recognized. Neutralization activity was verified in vitro and in vivo. Results 1 A monoclonal antibody cell line with good binding activity against human Tim-3 (clone L3DX) was obtained and its immunoglobulin subtype was IgG2aF2. The antibody can bind to the Tim-3 molecule in human U937 cells, and has a certain cross-binding activity with Tim-3 on mouse RAW 264.7 cells. The antibody can block the apoptosis of human THP1 cells induced by Gal-9 molecule. In vivo injection of L3D with a good neutralization activity in vitro showed that the antibody could significantly aggravate the condition of sepsis model mice and increase the expression of inflammatory factors. Conclusion A cell line secreting anti-human Tim-3 antibody was successfully prepared and its good binding and neutralizing activity provided experimental basis for intervention based on abnormal expression of Tim-3.
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所免疫學(xué)研究室;解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院呼吸科;河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室;
【基金】：國家973計劃資助項目(2013CB530506) 國家自然科學(xué)基金資助項目(81072475,81172800,81272320)
【分類號】：R392

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本文編號：1542767