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腫瘤壞死因子α表位結(jié)合肽與模擬肽的研究

發(fā)布時間:2024-07-01 21:29
  腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α,TNFα)具有對某些惡性腫瘤的抑制或殺傷作用,也是致內(nèi)毒素性休克、急性移植物抗宿主病及一些自身免疫病的重要效應(yīng)因子,因此TNFα的改造和TNFα拮抗劑的研究受到各國學(xué)者的重視。重組TNFα及其拮抗劑(包括抗TNFα單抗、抗TNFα受體單抗、可溶性TNFα受體、TNFα突變體)均已應(yīng)用于臨床并取得了一定的治療效果。但單抗的人源化、重組細(xì)胞因子或受體的純化、不同程度的抗原性及價格因素等均成為上述制劑在國內(nèi)應(yīng)用的制約因素。近年來的研究發(fā)現(xiàn),小分子細(xì)胞因子模擬物具有細(xì)胞因子受體激動劑或拮抗劑的作用,且小分子模擬物因容易合成并能夠給予高濃度、可口服等優(yōu)點使其具有更加廣闊的研發(fā)與應(yīng)用前景。篩選TNFα小分子模擬肽及結(jié)合肽對于TNFα研究具有重要的意義。本研究包括以下四個方面: 1、TNFα結(jié)合肽的研究:以rhTNFα為靶對噬菌體環(huán)七肽庫進(jìn)行篩選,以尋求可拮抗TNFα活性的小分子短肽。三輪篩選后,隨機(jī)挑選23個噬菌體克隆經(jīng)ELISA鑒定,其中11個克隆顯示可與TNFα有較強(qiáng)的結(jié)合,DNA測序結(jié)果推導(dǎo)氨基酸序列,其中兩個克隆的氨基...

【文章頁數(shù)】:92 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

圖1一1噬菌體克隆與rhTNFa的結(jié)合

圖1一1噬菌體克隆與rhTNFa的結(jié)合

物加入到rhTNFa包被的酶標(biāo)孔內(nèi),固相表面的rhTNFa與液相中的th飛NFa競爭與噬菌體克隆結(jié)合,以此來鑒定所篩選的噬菌體克隆是否位點準(zhǔn)確即是否確實和TNFa結(jié)合(見圖1一2):


圖2一1噬菌體克隆與包被TNFamAb的結(jié)合

圖2一1噬菌體克隆與包被TNFamAb的結(jié)合

試驗結(jié)果顯示陽性克隆均與TNFamAb具有較強(qiáng)的結(jié)合活性(見圖2一2):


圖2一2TNFamAb與噬菌體克隆的結(jié)合

圖2一2TNFamAb與噬菌體克隆的結(jié)合

斷陽性噬菌體克隆LCS一7與TNFamAb之間的結(jié)合,借此測定陽性噬菌體克隆是否模擬rFNFa的表位與相應(yīng)的受體結(jié)合。設(shè)定低表達(dá)r1NFa受體的CHO細(xì)胞為陰性對照。計算抑制率(見圖2一3):


圖3一1正常包被組噬菌體克隆與TNFa的結(jié)合

圖3一1正常包被組噬菌體克隆與TNFa的結(jié)合

No.ofPhageelonesNol一20:Phageelone,No21:unrelatedPhageelone,No22:12一merPePtidelibrary圖3一2甲醛固定組噬菌體克隆與TNFa結(jié)合試驗Fig.3一2BindingofrhTNFawith12merPh....



本文編號:3999210

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