發(fā)布時(shí)間：2018-02-23 13:38

  本文關(guān)鍵詞： 微小RNA 靶基因 細(xì)胞凋亡 基因表達(dá)　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2007年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的： MicroRNA (miRNA)是一類(lèi)新發(fā)現(xiàn)的能夠調(diào)控其靶基因表達(dá)水平的小RNA分子。近幾年已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并確定了上千種miRNA,目前1miRNA的功能研究正日益成為生物學(xué)一個(gè)非常活躍的研究領(lǐng)域。本研究旨在結(jié)合生物信息學(xué)、基因芯片技術(shù)檢測(cè)血清饑餓狀態(tài)下參與調(diào)控的miRNA并預(yù)測(cè)其靶基因,對(duì)血清饑餓狀態(tài)下參與調(diào)控的miRNA對(duì)細(xì)胞活性的影響進(jìn)行初步研究。 方法： 利用miRNA芯片技術(shù)對(duì)血清饑餓培養(yǎng)條件下(不含血清的培養(yǎng)基)和正常培養(yǎng)條件下(含10%血清的培養(yǎng)基)人類(lèi)正常肝細(xì)胞系L02中miRNA的表達(dá)水平進(jìn)行比較。對(duì)在血清饑餓條件下表達(dá)增高的miRNA(miR-27a、miR-320、 miR-338)使用miRNA反義寡聚核苷酸序列特異性抑制細(xì)胞內(nèi)：niRNA (miR-27a、miR-320、miR-338)功能；對(duì)在血清饑餓條件下表達(dá)降低的miRNA (miR-181b1)使用小干擾RNA特異性增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)miRNA (miR-181b1)功能；然后利用MTT法分析miRNA對(duì)細(xì)胞活性的影響。然后進(jìn)行TUNEL法測(cè)定它們分別對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。在此基礎(chǔ)上結(jié)合靶基因預(yù)測(cè)程序和mRNA表達(dá)譜芯片的結(jié)果對(duì)miRNA的靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)和篩選。 結(jié)果： 通過(guò)對(duì)miRNA表達(dá)譜基因芯片結(jié)果的分析發(fā)現(xiàn)在血清饑餓狀態(tài)下人類(lèi)正常肝細(xì)胞系L02中miR-27a、miR-320、miR-338的表達(dá)升高,miR-181b1的表達(dá)下降。隨后利用MTT法和TUNEL法實(shí)驗(yàn)對(duì)miR-27a、miR-320、miR-338、 miR-181bl的功能進(jìn)行篩選分析,發(fā)現(xiàn)在L02細(xì)胞中miR-27a、miR-320、miR-338功能受到抑制后細(xì)胞的活性均明顯受到抑制,miR-181b1功能增強(qiáng)后細(xì)胞的活性明顯被增強(qiáng)。 在此基礎(chǔ)上利用長(zhǎng)寡聚核苷酸基因芯片(共7267個(gè)人類(lèi)基因,包含凋亡相關(guān)基因、腫瘤相關(guān)基因、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因、肝酶代謝相關(guān)基因、細(xì)胞因子相關(guān)基因)分析血清饑餓狀態(tài)下mRNA表達(dá)譜的變化,選取表達(dá)有差異基因,經(jīng)基因芯片結(jié)果分析與靶基因預(yù)測(cè)程序相比較初步預(yù)測(cè)：adcy3、bc13、h1x1等是hsa-miR-27a的靶基因,ctnnb1、ywhaq、adcy3等是hsa-miR-320的靶基因,tps19、p4hb、atp5gl等是hsa-miR-338的靶基因,bcl-9、ddit4、dusp10等是hsa-miR-181b-1的靶基因。 結(jié)論： 本文首次確定了血清饑餓狀態(tài)下參與調(diào)控的miRNA,并初步確定了miR-27a、miR-320、miR-338和miR-181b1在人類(lèi)細(xì)胞內(nèi)的靶基因。miR-27a、 miR-320、miR-338和miR-181b1可以分別介導(dǎo)其各自的靶mRNA的降解,調(diào)控血清饑餓狀態(tài)下細(xì)胞的應(yīng)答反應(yīng)。這有助于我們深化對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)和凋亡等生物學(xué)特性及其調(diào)控機(jī)制的理解。
[Abstract]:Objective:. MicroRNA simiRNAs are a new class of small RNA molecules which can regulate the expression level of their target genes. In recent years, thousands of miRNAs have been discovered and identified. At present, the functional study of 1miRNAs is becoming a very active research field in biology. The purpose of this study is to combine bioinformatics, The miRNA involved in the regulation of serum starvation was detected by gene chip technique and its target gene was predicted. The effect of miRNA on cell activity was studied preliminarily. Methods:. MiRNA microarray technique was used to compare the expression of miRNA in human normal liver cell line L02 under the condition of serum starvation (medium without serum) and normal culture (medium containing 10% serum). MiRNA antisense oligonucleotide sequence was used to specifically inhibit the function of miRNA antisense oligodeoxynucleotides (miRNA antisense oligodeoxynucleotides). Low expression of miRNA miR-181b1) was used to enhance intracellular miRNA miR-181b1 function with small interfering RNA. Then the effect of miRNA on cell activity was analyzed by MTT method, and then the effect of miRNA on cell apoptosis was determined by TUNEL method. Based on this, the target genes of miRNA were predicted and screened by combining the results of target gene prediction program and mRNA expression microarray. Results:. The results of miRNA gene chip analysis showed that the expression of miR-27a1 miR-320mmiR-338 increased in human normal liver cell line L02 under the condition of serum starvation, and the expression of miR-181b1 was decreased. Then the function of miR-27aF- 320miR-338, miR-181bl was screened by MTT and TUNEL assay. It was found that in L02 cells, the activity of miR-27aanfmiR-320miR-338 was obviously inhibited after the function of miR-181b1 was enhanced. Using oligonucleotide microarray (7267 human genes, including apoptosis-related genes, tumor-related genes, signal transduction related genes, liver enzyme metabolism-related genes, etc. Cytokine related genes (cytokine related genes) were used to analyze the changes of mRNA expression profile under the condition of serum starvation, and the differentially expressed genes were selected. The results of microarray analysis were compared with the program of target gene prediction. It was preliminarily predicted that the target gene of hsa-miR-27a is the target gene of hsa-miR-27a, ttnnb1, ywhaqadcy3 and so on. It is the target gene of hsa-miR-320, tps19, p4hbnatp5gl, etc. It is the target gene of hsa-miR-338, bcl-9DDIT4dusp10 and so on, which is the target gene of hsa-miR-181b-1. Conclusion:. In this paper, we first identified the miRNAs involved in the regulation under the condition of serum starvation, and preliminarily determined that the target genes. MiR-27a, miR-320miR-338 and miR-181b1 can mediate the degradation of their respective target mRNA, respectively. It is helpful to understand the biological characteristics of cell growth and apoptosis and its regulatory mechanism.
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R3416

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 邊春景;劉鐵剛;劉霞;邵榮光;;microRNAs在動(dòng)物體內(nèi)的功能[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2005年05期

2 桂樂(lè);吳翔;郭新;秦小同;魏美芳;景宏美;;前體脂肪細(xì)胞分化相關(guān)的miRNA表達(dá)變化[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2008年21期

3 劉俊;黃陳;江_";鐘福全;;microRNA在胰腺癌中的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2009年23期

4 王雪;王紅靜;;微小RNA與卵巢癌的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2010年08期

5 劉東;陳云昭;李鋒;;microRNA與食管癌關(guān)系的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年05期

6 黃文濤;郭向前;戴甲培;陳潤(rùn)生;;MicroRNA,lncRNA與神經(jīng)退行性疾病[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2010年08期

7 高玉;吳晉暉;柳林;;哺乳動(dòng)物視網(wǎng)膜microRNA的表達(dá)及功能[J];眼科新進(jìn)展;2010年08期

8 吳微;楊歡;;MicroRNA與自身免疫性疾病[J];免疫學(xué)雜志;2010年12期

9 涂軼;梅金紅;;乳腺癌相關(guān)microRNA研究進(jìn)展[J];實(shí)用臨床醫(yī)學(xué);2010年11期

10 胡慶偉;杜英;梅麗娜;邢建民;鄧再興;;微小RNA-200家族在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及意義[J];中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2011年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 李鴻;屈晶晶;王睿;盛春君;程曉蕓;王吉影;蘇斌;柴尚玉;曲伸;;體外培養(yǎng)胰島的microRNA表達(dá)譜及功能研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

2 李炯;段德民;鄭克孝;;新型非標(biāo)記高通量microRNA芯片技術(shù)[A];第一屆全國(guó)生物物理化學(xué)會(huì)議暨生物物理化學(xué)發(fā)展戰(zhàn)略研討會(huì)論文摘要集[C];2010年

3 王俊峰;李巍;吳小江;阮康成;;大鼠附睪microRNA表達(dá)譜的研究[A];第十一次中國(guó)生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)暨第九屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)摘要集[C];2009年

4 蔣義國(guó);劉斌斌;;毒理學(xué)中的microRNA研究[A];廣東省環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)、廣東省預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)衛(wèi)生毒理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)2010年學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2010年

5 鞏麗穎;孫開(kāi)來(lái);;兩種microRNA在先心病心肌組織中的表達(dá)[A];中國(guó)的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進(jìn)步推動(dòng)中國(guó)西部經(jīng)濟(jì)與社會(huì)發(fā)展——2011年中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)大會(huì)論文摘要匯編[C];2011年

6 李夢(mèng)龍;;Systematically analyze and select key features to microRNA precursors identification based on random forests[A];第十一屆全國(guó)計(jì)算（機(jī)）化學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2011年

7 徐晨;鮑堅(jiān)強(qiáng);李定;郭強(qiáng)蘇;;microRNA-449在小鼠精子發(fā)生過(guò)程中的作用研究[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2011年年會(huì)論文文摘匯編[C];2011年

8 江建霞;蔣晶晶;曹家樹(shù);;白菜花粉發(fā)育及授粉受精過(guò)程相關(guān)microRNA篩選及驗(yàn)證[A];中國(guó)園藝學(xué)會(huì)2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2011年

9 劉娜;楊景華;張明方;;嫁接西瓜microRNA的鑒定以及表達(dá)差異研究[A];中國(guó)園藝學(xué)會(huì)2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2011年

10 王國(guó)坤;朱嘉琦;荊清;秦永文;;缺氧刺激影響心肌細(xì)胞釋放microRNA[A];第十三次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 陳英云 喬蕤琳;哈醫(yī)大成功研發(fā)國(guó)內(nèi)首例microRNA轉(zhuǎn)基因及敲減小鼠模型[N];黑龍江經(jīng)濟(jì)報(bào);2010年

2 聶松義;我國(guó)脾臟功能研究達(dá)世界先進(jìn)水平[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2001年

3 劉向;基因研究：從測(cè)序轉(zhuǎn)入功能研究[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

4 記者 朱敏麗;醫(yī)藥城創(chuàng)新牛奶檢測(cè)技術(shù)[N];泰州日?qǐng)?bào);2010年

5 記者 許曉惠;乳品中微小核糖核酸科研成果公布[N];中國(guó)食品質(zhì)量報(bào);2010年

6 趙紹華;給孩子減肥必須“餓一餓”[N];健康時(shí)報(bào);2007年

7 胡德榮;阿片受體功能研究有了新發(fā)現(xiàn)[N];保健時(shí)報(bào);2003年

8 白毅;我國(guó)計(jì)算生物學(xué)研究取得重要進(jìn)展[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

9 中國(guó)社會(huì)科學(xué)院研究生院二○○五屆碩士畢業(yè)生 謝禮曄;微痕分析在磨制石器功能研究中的初步嘗試[N];中國(guó)文物報(bào);2005年

10 包海山;鄂爾多斯文化是開(kāi)拓創(chuàng)新的文化[N];鄂爾多斯日?qǐng)?bào);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 崔熠;microRNA在砷致胚胎發(fā)育毒性中的作用機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

2 朱霓;血管內(nèi)皮細(xì)胞microRNA的表達(dá)譜分析和功能研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

3 王雷;胰管內(nèi)乳頭狀粘液性腫瘤：臨床特征與microRNA的差異表達(dá)[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

4 王鎮(zhèn);食管黏膜鱗狀上皮癌變相關(guān)microRNA的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

5 侯晉;microRNA在病毒感染和肝細(xì)胞癌中的作用及相關(guān)機(jī)制研究[D];清華大學(xué);2010年

6 駱黎靜;人卵巢癌干細(xì)胞的分離、鑒定及其特異性microRNA的篩選[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

7 于曼麗;Let-7d對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖調(diào)控的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

8 陳勇;microRNA-200c在胃癌SGC7901/CDDP細(xì)胞中的作用及其機(jī)制的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

9 于琦;雄激素受體在乳腺癌中表達(dá)意義和相關(guān)microRNA篩選的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

10 翁春華;血管生成素特異microRNAs的鑒定與功能分析[D];浙江大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 胡德亮;microRNA-19b在P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化中的作用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

2 曹靈芝;Myostatin調(diào)控的microRNA的篩選[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

3 宋永站;microRNA-200c對(duì)ZEB1表達(dá)影響及對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲遷移作用[D];江蘇大學(xué);2010年

4 曲婷;基于生物信息學(xué)方法的H1N1流感病毒致病及傳播特性研究[D];吉林大學(xué);2010年

5 呂賽群;基于microRNA調(diào)控靶向腫瘤細(xì)胞的溶瘤腺病毒的研究[D];浙江理工大學(xué);2010年

6 張秀梅;韌帶成纖維細(xì)胞成骨分化過(guò)程microRNA、mRNA和蛋白表達(dá)譜分析[D];濟(jì)南大學(xué);2011年

7 申健;人膀胱癌中DNA甲基化對(duì)microRNA-203表達(dá)機(jī)制調(diào)控及其功能研究[D];暨南大學(xué);2011年

8 孫佃臣;低磷脅迫響應(yīng)microRNA及靶基因的克隆和大豆遺傳轉(zhuǎn)化研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

9 吉娜;自發(fā)性高血壓大鼠肥厚心肌和纖維化腎臟組織中microRNA-21的表達(dá)[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2010年

10 陳娟;靶向Livin的microRNA干擾對(duì)人卵巢癌細(xì)胞SKOV3體外作用的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

，

本文編號(hào)：1526779