發(fā)布時間：2018-02-23 13:38

  本文關鍵詞： 微小RNA 靶基因 細胞凋亡 基因表達　出處：《天津醫(yī)科大學》2007年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的： MicroRNA (miRNA)是一類新發(fā)現(xiàn)的能夠調控其靶基因表達水平的小RNA分子。近幾年已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并確定了上千種miRNA,目前1miRNA的功能研究正日益成為生物學一個非常活躍的研究領域。本研究旨在結合生物信息學、基因芯片技術檢測血清饑餓狀態(tài)下參與調控的miRNA并預測其靶基因,對血清饑餓狀態(tài)下參與調控的miRNA對細胞活性的影響進行初步研究。 方法： 利用miRNA芯片技術對血清饑餓培養(yǎng)條件下(不含血清的培養(yǎng)基)和正常培養(yǎng)條件下(含10%血清的培養(yǎng)基)人類正常肝細胞系L02中miRNA的表達水平進行比較。對在血清饑餓條件下表達增高的miRNA(miR-27a、miR-320、 miR-338)使用miRNA反義寡聚核苷酸序列特異性抑制細胞內：niRNA (miR-27a、miR-320、miR-338)功能；對在血清饑餓條件下表達降低的miRNA (miR-181b1)使用小干擾RNA特異性增強細胞內miRNA (miR-181b1)功能；然后利用MTT法分析miRNA對細胞活性的影響。然后進行TUNEL法測定它們分別對細胞凋亡的影響。在此基礎上結合靶基因預測程序和mRNA表達譜芯片的結果對miRNA的靶基因進行預測和篩選。 結果： 通過對miRNA表達譜基因芯片結果的分析發(fā)現(xiàn)在血清饑餓狀態(tài)下人類正常肝細胞系L02中miR-27a、miR-320、miR-338的表達升高,miR-181b1的表達下降。隨后利用MTT法和TUNEL法實驗對miR-27a、miR-320、miR-338、 miR-181bl的功能進行篩選分析,發(fā)現(xiàn)在L02細胞中miR-27a、miR-320、miR-338功能受到抑制后細胞的活性均明顯受到抑制,miR-181b1功能增強后細胞的活性明顯被增強。 在此基礎上利用長寡聚核苷酸基因芯片(共7267個人類基因,包含凋亡相關基因、腫瘤相關基因、信號轉導相關基因、肝酶代謝相關基因、細胞因子相關基因)分析血清饑餓狀態(tài)下mRNA表達譜的變化,選取表達有差異基因,經(jīng)基因芯片結果分析與靶基因預測程序相比較初步預測：adcy3、bc13、h1x1等是hsa-miR-27a的靶基因,ctnnb1、ywhaq、adcy3等是hsa-miR-320的靶基因,tps19、p4hb、atp5gl等是hsa-miR-338的靶基因,bcl-9、ddit4、dusp10等是hsa-miR-181b-1的靶基因。 結論： 本文首次確定了血清饑餓狀態(tài)下參與調控的miRNA,并初步確定了miR-27a、miR-320、miR-338和miR-181b1在人類細胞內的靶基因。miR-27a、 miR-320、miR-338和miR-181b1可以分別介導其各自的靶mRNA的降解,調控血清饑餓狀態(tài)下細胞的應答反應。這有助于我們深化對于細胞的生長和凋亡等生物學特性及其調控機制的理解。
[Abstract]:Objective:. MicroRNA simiRNAs are a new class of small RNA molecules which can regulate the expression level of their target genes. In recent years, thousands of miRNAs have been discovered and identified. At present, the functional study of 1miRNAs is becoming a very active research field in biology. The purpose of this study is to combine bioinformatics, The miRNA involved in the regulation of serum starvation was detected by gene chip technique and its target gene was predicted. The effect of miRNA on cell activity was studied preliminarily. Methods:. MiRNA microarray technique was used to compare the expression of miRNA in human normal liver cell line L02 under the condition of serum starvation (medium without serum) and normal culture (medium containing 10% serum). MiRNA antisense oligonucleotide sequence was used to specifically inhibit the function of miRNA antisense oligodeoxynucleotides (miRNA antisense oligodeoxynucleotides). Low expression of miRNA miR-181b1) was used to enhance intracellular miRNA miR-181b1 function with small interfering RNA. Then the effect of miRNA on cell activity was analyzed by MTT method, and then the effect of miRNA on cell apoptosis was determined by TUNEL method. Based on this, the target genes of miRNA were predicted and screened by combining the results of target gene prediction program and mRNA expression microarray. Results:. The results of miRNA gene chip analysis showed that the expression of miR-27a1 miR-320mmiR-338 increased in human normal liver cell line L02 under the condition of serum starvation, and the expression of miR-181b1 was decreased. Then the function of miR-27aF- 320miR-338, miR-181bl was screened by MTT and TUNEL assay. It was found that in L02 cells, the activity of miR-27aanfmiR-320miR-338 was obviously inhibited after the function of miR-181b1 was enhanced. Using oligonucleotide microarray (7267 human genes, including apoptosis-related genes, tumor-related genes, signal transduction related genes, liver enzyme metabolism-related genes, etc. Cytokine related genes (cytokine related genes) were used to analyze the changes of mRNA expression profile under the condition of serum starvation, and the differentially expressed genes were selected. The results of microarray analysis were compared with the program of target gene prediction. It was preliminarily predicted that the target gene of hsa-miR-27a is the target gene of hsa-miR-27a, ttnnb1, ywhaqadcy3 and so on. It is the target gene of hsa-miR-320, tps19, p4hbnatp5gl, etc. It is the target gene of hsa-miR-338, bcl-9DDIT4dusp10 and so on, which is the target gene of hsa-miR-181b-1. Conclusion:. In this paper, we first identified the miRNAs involved in the regulation under the condition of serum starvation, and preliminarily determined that the target genes. MiR-27a, miR-320miR-338 and miR-181b1 can mediate the degradation of their respective target mRNA, respectively. It is helpful to understand the biological characteristics of cell growth and apoptosis and its regulatory mechanism.
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R3416

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本文編號：1526779