目的構(gòu)建人TBC1D10C(hTBC1D10C)基因過表達(dá)慢病毒載體,并對(duì)其進(jìn)行功能鑒定。方法利用PCR技術(shù)擴(kuò)增hTBC1D10C基因片段,構(gòu)建pLVX-hTBC1D10C-mCMVZsGreen-PGK-Puro過表達(dá)載體質(zhì)粒,將構(gòu)建的過表達(dá)載體質(zhì)粒和系統(tǒng)包裝質(zhì)粒應(yīng)用高效轉(zhuǎn)染試劑盒轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞,以包裝rLV-hTBC1D10C-zpp,在HEK293細(xì)胞中檢測(cè)病毒滴度。rLV-hTBC1D10C-zpp感染H9C2心肌細(xì)胞,蛋白免疫印跡法檢測(cè)hTBC1D10C蛋白表達(dá)。結(jié)果 pLVX-hTBC1D10C-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro過表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建成功,rLV-hTBC1D10C-zpp包裝順利,滴度為1×10⁸ TU/ml,感染H9C2心肌細(xì)胞后,hTBC1D10C蛋白表達(dá)上調(diào)(P <0.05)。結(jié)論 rLV-hTBC1D10C-zpp構(gòu)建成功,在心肌細(xì)胞中具有高效表達(dá)hTBC1D10C的效應(yīng)。

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    一、材料
        1. 材料
        2. 主要試劑及儀器
        3. 引物設(shè)計(jì)及合成
    二、方法
        1.pLVX-h TBC1D10C-m CMV-Zs Green-PGK-Puro載體的構(gòu)建
        2. rLV-hTBC1D10C-zpp慢病毒的包裝、收集、擴(kuò)增及滴度測(cè)定
        3. rLV-hTBC1D10C-zpp功能鑒定
    三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
    一、pLVX-hTBC1D10C-mCMV-ZsGreen-PGK-Puro載體的構(gòu)建
    二、rLV-hTBC1D10C-zpp慢病毒的包裝、收集、擴(kuò)增及滴度測(cè)定
    三、rLV-hTBC1D10C-zpp功能鑒定
討論



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