目的:器官移植是臨床治療器官衰竭的唯一有效手段[1],而免疫排斥問題是器官移植面臨的主要障礙。目前器官移植術(shù)后抗排斥藥物在免疫抑制效果以及毒副作用方面不夠理想,亟需開發(fā)新型的免疫抑制劑。本實(shí)驗(yàn)室前期從板藍(lán)根中提取若干單體,篩選出具有免疫抑制活性的單體成分,并通過藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了驗(yàn)證。在此基礎(chǔ)上,為了克服這些有效成分溶解性較差的問題,我們經(jīng)過結(jié)構(gòu)修飾得到新的化合物MSR405。本研究中,我們將通過一系列的體外實(shí)驗(yàn)研究MSR405的抑制作用及其可能的作用機(jī)制方法:首先,我們通過淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)、無能實(shí)驗(yàn)、凋亡實(shí)驗(yàn)等體外實(shí)驗(yàn)研究MSR405對(duì)淋巴細(xì)胞抑制增殖作用和機(jī)制。然后,采用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)MSR405抑制淋巴細(xì)胞增殖的作用機(jī)制進(jìn)行研究。最后,在測(cè)序結(jié)果的基礎(chǔ)上使用qRT-PCR和WB驗(yàn)證MSR405可能作用的通路,并進(jìn)一步探索作用機(jī)制。結(jié)果:首先,MSR405以劑量依賴性的方式抑制淋巴細(xì)胞的增殖。其次,RNA-seq的結(jié)果表明MSR405抑制淋巴細(xì)胞增殖的能力與細(xì)胞周期有顯著相關(guān)性,并且流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明,MSR405用藥組的淋巴細(xì)胞的G1期比例增加,S期比例減少,G2/M期的比例無明...

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
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第一章 前言
    1.1 器官移植概況
    1.2 器官移植排斥反應(yīng)類型及其機(jī)制概述
        1.2.1 超急性排斥反應(yīng)
        1.2.2 急性排斥反應(yīng)
        1.2.3 慢性排斥反應(yīng)
    1.3 淋巴細(xì)胞與器官排斥反應(yīng)
        1.3.1 同種異體識(shí)別途徑
        1.3.2 T細(xì)胞的激活
    1.4 免疫抑制劑發(fā)展與應(yīng)用
        1.4.1 皮質(zhì)激素類免疫抑制劑
        1.4.2 抗代謝類抑制劑
        1.4.3 鈣調(diào)磷酸酶抑制劑類
        1.4.4 雷帕霉素靶蛋白抑制劑
        1.4.5 生物學(xué)免疫抑制劑
        1.4.6 中藥類免疫抑制劑
    1.5 N,N'-二環(huán)己基-N-亞麻酸酰脲(MSR405)與細(xì)胞周期信號(hào)通路
        1.5.1 N,N'-二環(huán)己基-N-亞麻酸酰脲
        1.5.2 細(xì)胞周期與細(xì)胞周期調(diào)控
        1.5.3 TGF-β/Smad信號(hào)通路
        1.5.4 PI3K-Akt信號(hào)通路
    1.6 本研究的目的、意義和內(nèi)容
        1.6.1 研究目的
        1.6.2 研究意義
        1.6.3 研究內(nèi)容
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 主要耗材
    2.2 研究方法
        2.2.1 細(xì)胞免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)與方法
        2.2.2 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)與方法
        2.2.3 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(RNA-seq)
        2.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 結(jié)果與討論
    3.1 MSR405對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞的作用
        3.1.1 MSR405對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響
        3.1.2 MSR405對(duì)混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的影響
        3.1.3 MSR405對(duì)移植免疫相關(guān)基因表達(dá)的影響
        3.1.4 MSR405對(duì)淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-4和IFN-γ的影響
    3.2 MSR405對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞抑制增殖可能機(jī)制的探索
        3.2.1 MSR405對(duì)淋巴細(xì)胞的克隆無能的影響
        3.2.2 MSR405對(duì)淋巴細(xì)胞凋亡的影響
    3.3 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(RNA-seq)研究MSR405對(duì)淋巴細(xì)胞的作用機(jī)制
        3.3.1 差異表達(dá)分析
        3.3.2 差異基因表達(dá)富集分析
    3.4 細(xì)胞周期阻滯參與MSR405抑制淋巴細(xì)胞增殖的機(jī)制
        3.4.1 MSR405對(duì)P15、TGF-β、Cyclin E的表達(dá)的影響
        3.4.2 MSR405對(duì)淋巴細(xì)胞周期的影響
        3.4.3 MSR405對(duì)淋巴細(xì)胞周期G1/S期的影響
        3.4.4 MSR405和TGF-β抑制劑協(xié)同抑制淋巴細(xì)胞增殖
        3.4.5 MSR405對(duì)Pdk1/Akt通路的影響
    3.5 討論
第四章 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：4002566