發(fā)布時間：2020-11-13 21:11

　　 目的:研究毛狀樣蛋白1(Cotl1)在炎癥條件下調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞遷移的分子機(jī)制。方法:CRISPR/Cas9敲除小鼠胰島血管內(nèi)皮細(xì)胞MS1的Cotl1基因;黏附實驗比較淋巴細(xì)胞與野生細(xì)胞株和敲除細(xì)胞株在LPS刺激下的黏附能力;RT-PCR及流式細(xì)胞術(shù)比較野生細(xì)胞株和敲除細(xì)胞株在LPS刺激下表面黏附分子ICAM1、VCAM1、P-selectin的表達(dá)情況;Transwell模型比較淋巴細(xì)胞在LPS刺激下穿過野生細(xì)胞株和敲除細(xì)胞株的遷移能力。結(jié)果:敲除細(xì)胞株Cotl1~(-/-)構(gòu)建成功;在LPS刺激下,淋巴細(xì)胞與野生細(xì)胞株MS1的黏附顯著高于敲除細(xì)胞株Cotl1~(-/-);同時,野生細(xì)胞株MS1表面黏附分子ICAM1、VCAM1、P-selectin的表達(dá)顯著高于敲除細(xì)胞株Cotl1~(-/-);淋巴細(xì)胞穿過野生細(xì)胞株MS1的能力顯著高于敲除細(xì)胞株Cotl1~(-/-)。結(jié)論:炎癥條件下Cotl1促進(jìn)淋巴細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附及遷移。
【部分圖文】：

分別采用RT-PCR和流式方法檢測了MS1細(xì)胞和敲除細(xì)胞Cotl1-/-在LPS刺激下黏附分子ICAM1、VCAM1、P-selectin的表達(dá)情況，結(jié)果如圖3。在LPS刺激下，ICAM1、VCAM1、P-selectin的表達(dá)量均顯著升高，且MS1細(xì)胞表達(dá)的ICAM1、VCAM1、P-selectin要顯著高于敲除細(xì)胞Cotl1-/-，證明在炎癥條件下血管內(nèi)皮細(xì)胞MS1表面的黏附分子ICAM1、VCAM1、P-selectin上調(diào)表達(dá)。2.4 淋巴細(xì)胞跨血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移結(jié)果

用Transwell方法比較了在LPS刺激下淋巴細(xì)胞及亞群穿過MS1細(xì)胞和敲除細(xì)胞Cotl1-/-的差異，結(jié)果如圖4。統(tǒng)計結(jié)果發(fā)現(xiàn)總淋巴細(xì)胞穿過MS1細(xì)胞的比例顯著高于敲除細(xì)胞Cotl1-/-，說明Cotl1基因缺失嚴(yán)重影響了淋巴細(xì)胞的跨血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移。我們同時分析了淋巴細(xì)胞不同亞群穿過MS1細(xì)胞和敲除細(xì)胞Cotl1-/-的遷移情況，發(fā)現(xiàn)CD4和CD8 T細(xì)胞穿過MS1細(xì)胞的比例顯著高于敲除細(xì)胞Cotl1-/-，而B細(xì)胞無顯著差異，說明CD4和CD8 T細(xì)胞的跨血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移受到Cotl1基因的影響。圖3 內(nèi)皮細(xì)胞表面黏附分子的檢測

內(nèi)皮細(xì)胞表面黏附分子的檢測
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本文編號：2882652