發(fā)布時(shí)間：2020-11-09 19:43

　　 破傷風(fēng)梭菌能夠分泌破傷風(fēng)外毒素,該外毒素經(jīng)過(guò)甲醛滅毒,再經(jīng)精制純化之后即制成破傷風(fēng)類(lèi)毒素疫苗。該疫苗可接種人和動(dòng)物,用以預(yù)防破傷風(fēng)。但目前國(guó)內(nèi)企業(yè)采用常規(guī)制備方法制備的破傷風(fēng)類(lèi)毒素疫苗存在純化程度低、免疫原性弱和副作用高等缺點(diǎn),嚴(yán)重限制了破傷風(fēng)類(lèi)毒素疫苗的應(yīng)用,優(yōu)化培養(yǎng)基和制備方法是解決這些問(wèn)題的關(guān)鍵。因此,本研究著力于對(duì)破傷風(fēng)精制類(lèi)毒素的培養(yǎng)基和制備方法進(jìn)行優(yōu)化,希望能夠改善疫苗目前存在的缺點(diǎn)。我們對(duì)培養(yǎng)基的成分進(jìn)行了調(diào)整,將普通庖肉培養(yǎng)基換成以蛋白胨酵母粉為主要成分的改良型培養(yǎng)基,并且對(duì)制備方法在脫毒、鹽析和脫鹽等步驟上進(jìn)行了改進(jìn),在此基礎(chǔ)之上,就細(xì)菌的增殖能力、類(lèi)毒素效價(jià)、類(lèi)毒素的純度和產(chǎn)量、免疫原性等指標(biāo)進(jìn)行了全面比較,得到以下主要結(jié)果:1.比濁法檢測(cè)細(xì)菌生長(zhǎng)曲線(xiàn)和破傷風(fēng)類(lèi)毒素效價(jià)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),改良型培養(yǎng)基能夠明顯提高細(xì)菌的增殖能力(P=0.033)和類(lèi)毒素效價(jià)(P=0.032),并且通過(guò)兩種工藝生產(chǎn)的類(lèi)毒素毒力無(wú)明顯差別(P=0.792)。2.BCA蛋白濃度檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),改良制備方法提取的精制破傷風(fēng)類(lèi)毒素總蛋白濃度高于常規(guī)制備方法,但兩者無(wú)顯著性差異(P=0.605);聚丙烯酰胺凝膠電泳和Western Blot結(jié)果表明,改良的制備方法能夠明顯提高破傷風(fēng)類(lèi)毒素的純度(P=0.001)和產(chǎn)量(P=0.001)。3.動(dòng)物急性特異性毒性和動(dòng)物長(zhǎng)期特異性毒性研究發(fā)現(xiàn),通過(guò)改良工藝制備的疫苗沒(méi)有外源性毒性物質(zhì),能明顯提高動(dòng)物的存活率(P=0.027)并維持體重穩(wěn)定(P=0.016);免疫原性評(píng)價(jià)結(jié)果發(fā)現(xiàn),與常規(guī)方法提取的類(lèi)毒素疫苗相比,改良方法提取的破傷風(fēng)類(lèi)毒素疫苗具有更高的免疫原性(P=0.001)。綜上,與常規(guī)培養(yǎng)基和制備方法相比,我們改良的培養(yǎng)基和制備方法能夠明顯提高破傷風(fēng)類(lèi)毒素疫苗的純化程度和免疫原性,降低疫苗的外源性毒性物質(zhì)和副作用,并且可適應(yīng)規(guī)模化生產(chǎn)破傷風(fēng)精制類(lèi)毒素的工藝條件,對(duì)于國(guó)內(nèi)企業(yè)生產(chǎn)破傷風(fēng)類(lèi)毒素疫苗具有指導(dǎo)和借鑒意義。
【學(xué)位單位】：云南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R392
【部分圖文】：

破傷風(fēng)毒素進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)

破傷風(fēng)毒素的作用機(jī)制[11]

破傷風(fēng)類(lèi)毒素結(jié)構(gòu)
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2876884