發(fā)布時(shí)間：2020-11-08 19:08

　　 目的·篩選耐藥肺炎克雷伯菌的噬菌體,并檢驗(yàn)其是否符合耐藥肺炎克雷伯菌噬菌體庫(kù)的入庫(kù)要求。方法·將分離自1例泌尿系統(tǒng)感染患者的1株耐藥肺炎克雷伯菌作為宿主菌,從環(huán)境污水中進(jìn)行噬菌體篩選,分離、純化噬菌體并進(jìn)行生物學(xué)特性的研究及噬菌體基因組測(cè)序,并基于全基因組數(shù)據(jù)分析其使用安全性。結(jié)果·分離到1株耐藥肺炎克雷伯菌噬菌體,將其命名為JD902,屬有尾目,裂解量為88 pfu/cell,在pH值4.0～11.0范圍內(nèi)都能保持較好的活性�；�因組分析表明,其不攜帶抗生素抗性基因和毒力因子基因。結(jié)論·JD902為1株烈性噬菌體,體外穩(wěn)定性及安全性均較高,可以納入臨床治療使用噬菌體庫(kù)。
【部分圖文】：

使用透射電鏡觀察噬菌體JD902形態(tài)，其由多面體對(duì)稱的頭部組成，屬于有尾目噬菌體，其頭部直徑約為82 nm（圖1）。2.2 噬菌體JD902的生物學(xué)特性

分別按MOI=10、1、0.1、0.01、0.001混合噬菌體和宿主菌，檢測(cè)共培養(yǎng)后的噬菌體效價(jià)；實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其最佳MOI為0.001～0.01（圖2）。2.2.2噬菌體JD902的體外殺菌活性

以橫坐標(biāo)表示噬菌體和宿主細(xì)菌作用時(shí)間，以縱坐標(biāo)表示未被宿主菌吸附的噬菌體的百分率繪制噬菌體的吸附曲線。以橫坐標(biāo)表示噬菌體和宿主菌共同作用的時(shí)間，縱坐標(biāo)表示培養(yǎng)混合物中噬菌體的效價(jià)，繪制噬菌體一步生長(zhǎng)曲線。根據(jù)吸附曲線的結(jié)果，該噬菌體與宿主菌共同孵育6 min后，約93.2%的噬菌體可吸附于宿主菌上。從噬菌體的一步生長(zhǎng)曲線來(lái)看，其潛伏期約為10 min，裂解期約為50 min，隨后進(jìn)入穩(wěn)定期，噬菌體JD902的溶菌周期約60 min（圖4）。根據(jù)噬菌體裂解量計(jì)算公式：噬菌體裂解量=穩(wěn)定期噬菌體效價(jià)/感染初期宿主菌數(shù)量，該噬菌體裂解量約為88 pfu/cell，即平均每個(gè)宿主菌裂解釋放約88個(gè)子代噬菌體。圖4 噬菌體JD902的吸附曲線（A）和一步生長(zhǎng)曲線（B)
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本文編號(hào)：2875208