發(fā)布時(shí)間：2024-05-20 05:49

　　近年來(lái),世界各地肉制品摻假情況頻繁發(fā)生。為維護(hù)市場(chǎng)穩(wěn)定,保障食品安全,迫切需要量化肉制品中所含動(dòng)物成分的質(zhì)量百分比。本研究建立了一種實(shí)時(shí)熒光定量PCR定量檢測(cè)系統(tǒng),借助微滴式數(shù)字PCR技術(shù)(droplet digital, ddPCR),有效實(shí)現(xiàn)靶向基因拷貝數(shù)的絕對(duì)定量,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(real-time quantitative PCR detecting system, q-PCR),將擴(kuò)增Ct值轉(zhuǎn)化為基因拷貝數(shù),再?gòu)幕�因拷貝�?shù)轉(zhuǎn)換為肉的質(zhì)量,有效實(shí)現(xiàn)了Ct值與質(zhì)量間的轉(zhuǎn)化,從而實(shí)現(xiàn)了羊肉中摻假雞肉的精確定量。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,該方法可以很好地應(yīng)用于摻假羊肉中雞肉質(zhì)量百分比的檢測(cè),雞肉的最低定量檢測(cè)限(LOD)為5%,在5%～80%范圍內(nèi)相對(duì)誤差小于±9%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)小于±20%,定量結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性高,可以有效區(qū)分生產(chǎn)污染與故意摻假,為肉類摻假的監(jiān)管工作提供有力的技術(shù)參考。

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【部分圖文】：

圖1引物和探針的特異性實(shí)驗(yàn)

為建立羊肉、雞肉基因拷貝數(shù)與Ct值之的關(guān)系，將已知基因拷貝數(shù)的羊肉、雞肉核酸樣品進(jìn)行5個(gè)梯度的系列稀釋，進(jìn)行q-PCR檢測(cè)，結(jié)果顯示樣品擴(kuò)增Ct值均隨著基因拷貝數(shù)的增加而減小，兩者間具有著良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(R2)≥0.98(圖3C;圖3D)，擴(kuò)增效率在90%～120%之....

圖2陽(yáng)性微滴與總微滴的比例

圖1引物和探針的特異性實(shí)驗(yàn)圖3雞,羊的擴(kuò)增圖和標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖3雞,羊的擴(kuò)增圖和標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2陽(yáng)性微滴與總微滴的比例1.3羊肉、雞肉質(zhì)量與基因拷貝數(shù)的關(guān)系

圖4雞肉質(zhì)量與基因拷貝數(shù)的關(guān)系

以不同雞肉質(zhì)量含量的DNA作為模板，分別檢測(cè)雞、羊肉的擴(kuò)增Ct值，按照公式1計(jì)算獲得各混合樣品中雞肉所占的質(zhì)量百分比。以雞肉含量測(cè)量值和實(shí)際值為X、Y軸作圖，當(dāng)雞肉含量在1%～80%范圍內(nèi)，實(shí)際值與測(cè)量值呈線性關(guān)系響應(yīng)，相關(guān)系數(shù)r2為0.9946(圖6)，線性關(guān)系良好，樣品測(cè)....

本文編號(hào)：3979044