發(fā)布時間：2021-07-20 16:49

　　建立了測定嬰幼兒營養(yǎng)強化奶粉中5種核苷酸含量的高效液相色譜法。樣品經(jīng)堿性磷酸酯酶水解,將核苷酸轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的核苷,采用硼酸凝膠吸附凈化,使用Boston pHlex ODS色譜柱（250 mm×4.6 mm,5.0μm）分離,流動相A為含2 mmol/L 1-己烷磺酸鈉的20.9 mmol/L NH₄Ac（pH為4.3）;流動相B為6.0%乙腈-離子對試劑（含2 mmol/L 1-己烷磺酸鈉的20.9 mmol/L NH₄Ac,pH為4.3）,梯度洗脫后,二極管陣列檢測器檢測,檢測波長為260 nm,內(nèi)標(biāo)法定量。結(jié)果表明,5種核苷在線性范圍內(nèi)相關(guān)性好,相關(guān)系數(shù)R²大于0.999;5種核苷酸的回收率在80.00%～111.23%范圍,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.8%～6.3%之間。檢出限為0.4～1.0 mg/kg,定量限為1.0～3.0 mg/kg。該方法凈化效果顯著,分離效果好,是嬰幼兒營養(yǎng)強化奶粉中5種核苷酸的有效檢測方法。 

【文章來源】：分析科學(xué)學(xué)報. 2020,36(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

7種核苷混合標(biāo)準(zhǔn)溶液高效液相色譜圖

樣品溶液中7種核苷高效液相色譜圖

核苷酸帶有磷酸基團,酸性強,極性大,降低被測樣品分子的極性,在常規(guī)色譜柱上保留能力比較差,目標(biāo)物和雜質(zhì)不能有效分離。雖然文獻也有報道采用HILIC模式[18]進行分離,但是由于其強極性樣品很難進行有效的凈化。而核苷相對于核苷酸其分子的極性較弱,在堿性磷酸酶催化下脫去核苷酸上的磷酸基團,水解核苷酸生成核苷,降低了檢測的目標(biāo)物的極性,有效增加了使各化合物在色譜柱上的保留時間,如圖3所示,腺嘌呤核苷酸在堿性磷酸酯酶作用下水解為腺嘌呤核苷,從而降低了極性。采用水解法將核苷酸水解成為核苷后,雖然降低了極性,但是乳粉基質(zhì)復(fù)雜且添加了各種營養(yǎng)強化劑,僅采用蛋白質(zhì)沉淀法達不到很好的效果,采用凝膠對復(fù)雜基質(zhì)樣品中核苷進行吸附清洗后,再將目標(biāo)核苷釋放出來,達到了富集和凈化目的,從而排除基質(zhì)的干擾能夠準(zhǔn)確的測定核苷的含量,從而間接準(zhǔn)確測得核苷酸的含量。在檢測過程中采用了內(nèi)標(biāo)法進行定量,進一步提高了定量的準(zhǔn)確性。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]高效液相色譜法同時測定嬰幼兒配方乳粉中5種游離核苷酸[J]. 鄭紅,于文江,薛霞,程志,尹麗麗,王駿,祝建華,劉艷明.  分析試驗室. 2018(01)
[2]高效液相色譜法測定嬰幼兒奶粉中5種核苷酸的含量[J]. 顧穎娟,秦宇,潘思奕,林毅侃,龐貝妮,劉洋.  食品工業(yè). 2017(09)
[3]改進的高效液相色譜法測定嬰幼兒配方奶粉中5種核苷酸[J]. 勵炯,王姣斐,邱紅鈺,李瑋.  色譜. 2017(08)
[4]反相高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定母乳及奶粉中核苷和核苷酸的含量[J]. 張婷婷,曾明飛,金燕,劉綠葉.  分析化學(xué). 2014(04)
[5]毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測定冬蟲夏草及鹿茸制品中核苷和堿基成分[J]. 祝玲,申貴雋,王莉莉,侯曉蘭,華欣.  分析科學(xué)學(xué)報. 2012(03)
[6]超聲波破碎-高效液相色譜法定量檢測核酸[J]. 董蓮華,盛靈慧,王晶,黎朋.  分析化學(xué). 2011(09)



本文編號：3293208