綿羊卵裂期早期胚胎經(jīng)歷了受精卵形成、合子基因組激活、卵裂球壓實(shí)等四個階段,涉及胚胎轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)的劇烈變化,研究8-細(xì)胞、16-細(xì)胞、桑椹胚階段綿羊體外受精胚胎轉(zhuǎn)錄組,對了解早期胚胎生長發(fā)育規(guī)律十分重要。本研究為獲得綿羊體外受精胚胎樣本進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序,對綿羊體外受精培養(yǎng)體系進(jìn)行優(yōu)化;分別用單細(xì)胞裂解液和PicoPure?RNA Isolation Kit獲得RNA,篩選有效單個胚胎RNA獲取方法,純化mRNA,將mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,Smart-Seq2擴(kuò)增cDNA構(gòu)建綿羊IVF 8-細(xì)胞、16-細(xì)胞、桑椹胚期單個胚胎轉(zhuǎn)錄組測序文庫,采用Illumina HiSeq Xten高通量測序技術(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序;篩選不同卵裂期胚胎差異表達(dá)基因,進(jìn)行GO功能分析及KEGG分析。獲得結(jié)果如下:1.在綿羊卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)液中添加10μg/mL的LH卵母細(xì)胞的成熟率為76.60%,卵裂率為63.24%,桑椹胚率為30.81%,顯著高于添加0μg/mL、5μg/mL、15μg/mL、20μg/mL LH的成熟培養(yǎng)液(P<0.05)。2.用單細(xì)胞裂解液裂解綿羊單個胚胎,純化mRNA,將mRNA逆轉(zhuǎn)錄成...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1卵丘擴(kuò)散及第一極體出Figure.2-1domediffusionandfirstpolarrelease

塔里木大學(xué)碩士學(xué)位論文第2章促黃體素對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟及卵裂的影響15圖2-1卵丘擴(kuò)散及第一極體出Figure.2-1domediffusionandfirstpolarrelease注：圖a：紅色實(shí)線箭頭所指為卵丘擴(kuò)散卵母細(xì)胞，紅色虛線箭頭所指為卵丘未擴(kuò)散卵母細(xì)胞；圖b:黑....

圖2-2卵母細(xì)胞成熟率

塔里木大學(xué)碩士學(xué)位論文第2章促黃體素對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟及卵裂的影響15圖2-1卵丘擴(kuò)散及第一極體出Figure.2-1domediffusionandfirstpolarrelease注：圖a：紅色實(shí)線箭頭所指為卵丘擴(kuò)散卵母細(xì)胞，紅色虛線箭頭所指為卵丘未擴(kuò)散卵母細(xì)胞；圖b:黑....

圖2-3受精卵卵裂（400×）

塔里木大學(xué)碩士學(xué)位論文第2章促黃體素對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟及卵裂的影響16圖2-3受精卵卵裂（400×）Figure2-3zygotecleavage(400×)成熟卵母細(xì)胞卵裂率如圖2-4。由圖2-4可知，C組培養(yǎng)成熟的COCs其卵裂率顯著高于其它各組（P<0.05），B、D、....

圖2-4卵母細(xì)胞卵裂率

塔里木大學(xué)碩士學(xué)位論文第2章促黃體素對綿羊卵母細(xì)胞體外成熟及卵裂的影響16圖2-3受精卵卵裂（400×）Figure2-3zygotecleavage(400×)成熟卵母細(xì)胞卵裂率如圖2-4。由圖2-4可知，C組培養(yǎng)成熟的COCs其卵裂率顯著高于其它各組（P<0.05），B、D、....

本文編號：3984144