本文選題：腫瘤壞死因子α + mRNA表達(dá)譜　； 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：喉癌是一種常見的頭頸部惡性腫瘤,占全身惡性腫瘤的1-5%,雖在全身惡性腫瘤中占據(jù)的位置不高,但在呼吸道及頭頸部惡性腫瘤中的位置較為重要,在呼吸道惡性腫瘤中僅次于肺癌,占第二位,在頭頸腫瘤中占第2-5位。喉癌多發(fā)生于40歲以上年齡人群,其中世界男女發(fā)病率之比大約為10:1,部分地區(qū)男女發(fā)病率差異略小,如我國東北地區(qū)男女發(fā)病率差異則小于世界水平。目前流行病學(xué)調(diào)查顯示,吸煙和飲酒是喉癌發(fā)病的高危因素,但具體發(fā)病過程是個復(fù)雜的生物學(xué)變化,同所有的腫瘤一樣,喉癌的發(fā)病和癌基因活化、抑癌基因失活有關(guān),同時很多其它因素也可促進(jìn)喉癌的發(fā)生和發(fā)展,如炎癥狀態(tài)、機(jī)體內(nèi)離子通道功能改變等。喉癌的臨床癥狀多表現(xiàn)為聲音嘶啞、呼吸困難甚至吞咽困難等,若合并頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移則表現(xiàn)為頸部包塊。喉癌的病理類型大多數(shù)為鱗狀細(xì)胞癌。目前喉癌的治療提倡以手術(shù)治療為主,結(jié)合放化療的綜合治療方法,雖然喉癌的治療經(jīng)歷了百余年的進(jìn)展,喉癌發(fā)病及治療的基礎(chǔ)研究也在不停的進(jìn)步,但喉癌患者的五年生存率及術(shù)后生存質(zhì)量并未得到大幅改善。瞬時受體電位通道超家族(transient receptor potential,TRP)是一種非選擇性鈣離子通道,在鈣離子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中起重要作用。TRP通道目前一般分為兩大類,第一類包括TRPA、TRPC、TRPN、TRPV,第二類包括TRPP和TRPML,他們均具有類似的結(jié)構(gòu),結(jié)構(gòu)中均有一內(nèi)嵌的發(fā)卡通道結(jié)構(gòu),TRP通道分布廣泛,主要通過介導(dǎo)的鈣離子內(nèi)流作用參與調(diào)節(jié)機(jī)體的機(jī)械感覺、痛覺、味覺、肌肉收縮、細(xì)胞增生、分化、凋亡等眾多生理病理反應(yīng)。但各種TRP通道的作用并不完全相同,部分TRP通道亞類可以相互或協(xié)同作用調(diào)節(jié)生命活動。TRPP2通道作為TRP超家族中的一員,又稱之為PKD2(polycystin-2),目前研究較多和確實(shí)的證據(jù)認(rèn)為TRPP2的突變與多囊腎的發(fā)病密切相關(guān)。TRPP2在多種組織中廣泛表達(dá),如血管內(nèi)皮平滑肌細(xì)胞、上皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腎上腺和卵巢細(xì)胞。目前研究認(rèn)為TRPP2的亞細(xì)胞定位有一定的爭議,認(rèn)為可表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)膜、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和原纖毛中,其中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的定位最為認(rèn)同。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中,TRPP2作為細(xì)胞內(nèi)鈣離子釋放的通道,聯(lián)合三磷酸肌醇受體和雷尼丁受體調(diào)節(jié)胞內(nèi)鈣離子的平衡,參與鈣庫介導(dǎo)的鈣離子內(nèi)流過程((store-operated calcium entry channels,SOCE),從而發(fā)揮各種生理和病理功能,如參與細(xì)胞增殖、凋亡、自吞噬等過程。腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorɑ,TNF-ɑ)最初是以抗腫瘤因子被發(fā)現(xiàn),是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的抗腫瘤因子,腫瘤壞死因α是一種多向性細(xì)胞因子,其在炎癥反應(yīng)、細(xì)胞分化、免疫調(diào)節(jié)以及抗感染、抗腫瘤方面有重要作用,但研究也表明腫瘤壞死因子α對腫瘤的作用因條件的不同可產(chǎn)生不同的結(jié)果,雖然是最強(qiáng)的抗腫瘤因子,但在某些情況下也可表現(xiàn)為促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展。生物信息學(xué)是近年來廣泛應(yīng)用于臨床與基礎(chǔ)研究的一門交叉學(xué)科,它結(jié)合了信息學(xué)、計算機(jī)學(xué)、統(tǒng)計學(xué)等多種技術(shù)對大量的生物數(shù)據(jù)從分子水平通過序列對比、通路分析、生物聚類、統(tǒng)計分析等進(jìn)行分析、篩選,發(fā)現(xiàn)疾病的異常信息,可作為進(jìn)一步證實(shí)研究的篩選手段,避免盲目無效性的研究。本研究應(yīng)用人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞系,通過表達(dá)譜測序、生物信息學(xué)技術(shù)、蛋白印跡、流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、鈣成像以及si RNA技術(shù)分兩部分闡述了腫瘤壞死因子α對人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞的m RNA表達(dá)譜的影響以及腫瘤壞死因子α通過抑制TRPP2的表達(dá)及其介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上鈣離子釋放來增強(qiáng)人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞系的增殖。為進(jìn)一步闡明TRPP2和腫瘤壞死因子α在人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞增殖中的作用以及相關(guān)機(jī)制提供新的依據(jù),有助于闡明喉癌的發(fā)生發(fā)展過程,并有利于對喉癌開發(fā)新的潛在治療方向,為治療喉癌提供實(shí)驗(yàn)室證據(jù)。1.腫瘤壞死因子α對人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞m RNA表達(dá)譜的影響及分析既往研究發(fā)現(xiàn)腫瘤壞死因子α對腫瘤的作用是雙方面的,因?yàn)闂l件的不同可表現(xiàn)為促進(jìn)或抑制。為探討腫瘤壞死因子α對人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞的作用,本研究利用m RNA測序技術(shù)、生物信息學(xué)分析技術(shù),揭示了TRPP2相關(guān)m RNA在腫瘤壞死因子α處理的人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞PKD2基因的m RNA表達(dá)水平顯著下降(和對照組相比),由此推測分析腫瘤壞死因子α可能是通過下調(diào)TRPP2導(dǎo)致人喉鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增殖的改變。但結(jié)論需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。2.腫瘤壞死因子α通過抑制TRPP2的表達(dá)促進(jìn)人喉鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞Hep-2增殖的實(shí)驗(yàn)研究腫瘤壞死因子α和TRPP2都參與機(jī)體細(xì)胞的多種功能,研究表明,鈣離子通道在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用,TRPP2作為鈣離子通道中的一員,我們推測其在喉癌的增殖和發(fā)展中發(fā)揮著重要作用,通過第一部分的研究我們對經(jīng)過腫瘤壞死因子α處理的人喉鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞Hep-2較對照組未處理的人喉鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞Hep-2在m RNA表達(dá)譜的分析中發(fā)現(xiàn),TRPP2m RNA表達(dá)顯著減少,為進(jìn)一步驗(yàn)證TRPP2是否參與腫瘤壞死因子α對人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞的影響過程,我們進(jìn)行了進(jìn)一步的機(jī)制研究。本研究結(jié)果表明腫瘤壞死因子α通過抑制TRPP2的表達(dá)調(diào)節(jié)PERK-e IF2α信號通路以及TRPP2介導(dǎo)的鈣離子通道途徑增強(qiáng)了Hep-2細(xì)胞的增殖。主要結(jié)果如下:(1)腫瘤壞死因子α能顯著減少人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞的TRPP2的表達(dá)和ATP引發(fā)的鈣離子釋放。(2)si RNA特異敲低TRPP2可顯著抑制ATP引發(fā)的鈣離子釋放、消除腫瘤壞死因子α對ATP引發(fā)的鈣離子釋放減少的效應(yīng)。(3)人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞經(jīng)過腫瘤壞死因子α處理或特異敲低TRPP2處理未影響IP3R-I表達(dá)水平和細(xì)胞內(nèi)基礎(chǔ)鈣離子濃度。但腫瘤壞死因子α處理和特異性敲除TRPP2對抑制TRPP2的表達(dá)有增強(qiáng)效應(yīng)。(4)腫瘤壞死因子α處理增強(qiáng)了人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞的增殖及G2/M期的比例,但是減少了G0/G1的比例。而si RNA特異敲低TRPP2后,人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞增殖也增加,其表現(xiàn)為S期和G2/M期比例增加,但G0/G1期細(xì)胞比例減少。(5)腫瘤壞死因子α顯著下調(diào)p-PERK和p-e IF2α的表達(dá)水平,但不影響PERK和e IF2α的表達(dá)水平。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R739.65

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本文編號：1930886