本文關鍵詞：BCL11A在中國急性髓系白血病病人中的表達水平及其調(diào)控機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《蘇州大學》 2015年

BCL11A在中國急性髓系白血病病人中的表達水平及其調(diào)控機制研究

尹甲偉  

【摘要】：目的：選取5個急性髓系白血病(AML)相關基因,對新診斷的中國和歐洲血統(tǒng)占主要優(yōu)勢的西方AML患者進行基因突變差異比較。研究BCL11A在中國AML患者中的表達水平。對BCL11A上游調(diào)控機制進行深入研究,包括轉錄起始位點鑒定,啟動子活性分析,髓系分化關鍵調(diào)控因子CEBPa在BCL11A啟動子上結合位點的鑒定以及CEBPa對BCL11A的轉錄調(diào)控研究。進一步探討B(tài)CL11A在白血病發(fā)生過程中起到的致癌基因作用。方法：(1) 收集AML患者骨髓樣本269例,PCR擴增NF1,TP53,NRAS, FLT3, DNMT3A5個AML相關基因并進行測序鑒定,分析鑒定其突變情況。(2)TaqMan探針實時熒光定量方法,精確定量AML患者中BCL11A的表達水平,并與12例正常人骨髓樣本進行比較,分析其表達是否失調(diào)。(3) 生物信息學分析及5'-RACE方法對BCL11A轉錄起始位點進行鑒定。(4) 構建MBCL11A啟動子及啟動子系列缺失體,通過雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)分析啟動子活性。對活性顯著的啟動子再次進行生物信息學分析,分析其可能的轉錄因子結合位點。(5) 通過構建CEBPA相關表達載體,與BCL11A啟動子共轉染,CEBPA突變,啟動子結合位點突變等實驗鑒定CEBPa對BCL11A啟動子活性的影響。(6)通過過表達CEBPA實驗驗證其對內(nèi)源BCL11A表達的影響。(7) 構建HL-60細胞分化模型,通過分化等實驗來研究ATRA誘導HL-60髓系分化過程中BCL11A所起的作用。結果：(1) NF1, TP53, DNMT3A, NRAS, FLT3在中國AML患者中的突變頻率分別為0,1%,6%,7%,23%。且這5個基因突變與臨床特征包括年齡、性別、FAB-type和細胞遺傳學等沒有顯著的聯(lián)系。除FLT3-ITD外,其余四個基因在中國AML患者中的突變頻率均低于歐洲血統(tǒng)占主要優(yōu)勢的西方AML患者。(2) BCL11A在中國AML患者中表達失調(diào),表現(xiàn)出一定的高表達。(3) 5'-RACE實驗發(fā)現(xiàn)BCL11A存在新轉錄起始位點,在NCBI公布的轉錄起始位點基礎上繼續(xù)向上游延伸142bp。(4) BCL11A新轉錄起始位點上游500bp堿基序列具有顯著的啟動子活性。(5) 轉錄因子CEBPα抑制BCL11A啟動子活性,且抑制作用隨著CEBPA表達時間的延長和表達量的增加而加深。CEBPA基因突變后,抑制作用消失。對BCL11A啟動子上CEBPα可能的結合位點進行定點突變后,BCL11A啟動子活性上升約40%。(6) CEBPA過表達抑制內(nèi)源BCL11A表達。(7)HL-60細胞分化過程中,CEBPA表達水平上升,BCL11A表達水平降低,兩者呈現(xiàn)負相關。而過表達BCL11A則會抑制HL-60細胞分化。結論：本研究發(fā)現(xiàn)與西方研究相比,AML發(fā)生密切相關的基因在中國AML患者中突變頻率普遍偏低,提示在中國AML的發(fā)生發(fā)展中可能有其他基因通過其他尚未被發(fā)現(xiàn)的機制起作用。首次發(fā)現(xiàn)BCL11A在中國AML患者中表達失調(diào)。并在隨后的BCL11A分子遺傳調(diào)控網(wǎng)絡研究中鑒定了新的BCL11A轉錄起始位點,還首次發(fā)現(xiàn)髓系分化過程中關鍵的調(diào)控因子CEBPα可能作為一個主要的轉錄因子抑制BCL11A的表達,并且抑制作用隨著CEBPA表達時間的延長和表達量的增加而加深。HL-60細胞分化過程中,內(nèi)源CEBPA表達上升并抑制內(nèi)源BCL11A的表達,兩者呈現(xiàn)負相關,并且BCL11A高表達會抑制HL-60細胞分化。提示BCL11A的表達下調(diào)是介導CEBPα誘導髓系分化的重要事件。為進一步證實BCL11A在白血病發(fā)生過程中起到致癌基因作用打下堅實的基礎。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R733.71
【目錄】：

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