發(fā)布時間：2018-01-14 13:34

  本文關鍵詞：殼聚糖磁性溫敏凝膠作為絲裂霉素載體改善膀胱腫瘤灌注治療的研究　出處：《山東大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：研究背景膀胱癌是人類泌尿生殖系統(tǒng)中最為常見的惡性腫瘤之一,隨著人口總體老齡化,霧霾等空污染加重,工廠的致癌物質(zhì)以及煙草的濫用等因素的潛在影響,膀胱癌的總體發(fā)病率在逐年攀升。中國癌癥統(tǒng)計報告顯示,2015年有80500例患者確診膀胱癌,32900例死于膀胱癌。其中,非肌層浸潤性膀胱癌(Non-muscle invasive bladder cancer,NMIBC)約占膀胱腫瘤的80%,雖然經(jīng)尿道膀胱腫瘤切除術(Transurethral resection of bladder tumor,TURBT)是治療 NMIBC 的金標準,但術后5年復發(fā)率在50～70%,因此,對NMIBC患者術后輔以膀胱灌注治療以預防腫瘤復發(fā)。紋裂霉素(Mitomycin C,MMC)可以通過破壞細胞DNA復制以及蛋Qg質(zhì)合成發(fā)揮抗腫瘤活性,價格低廉,且灌注療效與其他抗腫瘤藥物無明顯差異,性價比高,是臨床中常用的膀胱灌注化療藥物。然而傳統(tǒng)的MMC膀胱灌注化療療效有限,平均降低膀胱腫瘤復發(fā)率僅約14～17%,而且部分患者膀胱腫瘤甚至發(fā)生進展。這些不足主要歸因于傳統(tǒng)的膀胱灌注化療方式。部分患者難以忍受MMC對膀胱黏膜的刺激,藥物在膀胱內(nèi)保留不足2h;也存在部分患者對MMC不敏感,雖然能保留MMC2h,但是隨著尿液的產(chǎn)生,不僅稀釋了 MMC濃度,而且過多的尿液促使周期性排尿,并不能保留MMC過多時間。為提高灌注療效,單純增加MMC濃度又會使副作用更凸顯。總的來說,傳統(tǒng)膀胱灌注方式使得藥液在膀胱內(nèi)滯留時間有限,作用時間較短,不能使時間、濃度依賴性的MMC有效的發(fā)揮抗腫瘤活性。多項新技術用于研究改善膀胱灌療效,如藥物聯(lián)合透明質(zhì)酸、二甲基亞砜灌注,可以提高藥物在膀胱黏膜的吸收;化學熱療法或電化學方法也有報道用于膀胱灌注,以改善藥物通透能力;光動力學治療在膀胱灌注中也有潛在的優(yōu)點。然而,以上新技術存在諸多缺點,如療效欠佳,化學毒性,價格昂貴等,限制了其在膀胱灌注中的應用。近年來,利用藥物載體增加藥物濃度梯度、延長藥物的作用時間以及進行靶向治療是醫(yī)藥領域的研究熱點。在筆者的前期實驗中,成功制備了具有磁性和溫敏特性的凝膠載體系統(tǒng)。該系統(tǒng)是一種特殊的原位成型沉淀(In situ forming depot,ISFD)系統(tǒng),由殼聚糖(chitosan,CS),β-甘油磷酸鈉(β-glycerophosphate,GP),Fe3O4 磁性納米顆粒(Fe3O4magnetic nanoparticle,Fe3O4-MNP)組成,其最突出的特性是在制備完成時為液體,而在體溫環(huán)境下,則能迅速轉(zhuǎn)化為凝膠固體,形成藥物的暫時儲存?zhèn)}庫,黏附于周圍組織。而且,該載體系統(tǒng)具有良好的生物相容性,生物降解性,生物黏附性,無毒性,藥物緩釋、控釋,靶向等特性,是局部藥物投送載體中最有前途的候選者。有學者研究發(fā)現(xiàn),裝載胰島素的溫敏凝膠系統(tǒng)注射入大鼠皮下后,可以緩釋胰島素超過5天。磁性載體搭載阿霉素灌注進入豬膀胱內(nèi),在外加磁場的牽引下,可以靶向治療膀胱腫瘤,并且藥物滯留時間較傳統(tǒng)灌注方式明顯延長。因此,筆者設想,磁性溫敏凝膠載體系統(tǒng)或許可以用來改善傳統(tǒng)膀胱灌注化療方式,延長MMC在膀胱內(nèi)作用時間,提高抗腫瘤活性,降低術后膀胱腫瘤復發(fā)率。研究目的本研究首先制備載藥磁性溫敏凝膠系統(tǒng)(Fe3O4-MMC-CS/GP),進行體內(nèi)外抗腫瘤實驗,并與MMC傳統(tǒng)膀胱灌注化療進行比較,明確該載藥體系是否能提高MMC膀胱灌注抗腫瘤療效;同時對該體系的凝膠轉(zhuǎn)化、磁響應性、微觀表征、溶脹性、降解性、藥物釋放特性、滯留能力等進行研究,以明確其增強MMC灌注化療抗腫瘤活性的原理和機制。實驗方法1.體外實驗部分1.1載藥磁性溫敏凝膠系統(tǒng)(Fe3O4-MMC-CS/GP)的構(gòu)建及磁響應性檢測根據(jù)相關文獻及筆者的前期實驗,將Fe3O4-MMC-CS/GP制備方法簡述如下:1)將一定量的CS溶于0.1mol/L的稀鹽酸中,室溫下磁力攪拌2h,過濾掉其中不溶性顆粒;2)蒸餾水溶解一定量的GP;3)將上述兩種溶液置于冰浴中10min(或4℃冰箱中儲存1Omin);4)在冰浴、CS溶液持續(xù)攪拌狀態(tài)下,將GP溶液逐滴滴加入CS溶液中,直至形成均一透明溶液;5)在混合溶液中加入Fe3O4-MNP及MMC,通過超聲分散或機械攪拌混勻。取小塊凝膠置于盛蒸餾水的燒杯中,在外置磁鐵的情況下,觀察凝膠的磁響應性。1.2 Fe3O4-MMC-CS/GP體外凝膠轉(zhuǎn)化時間檢測及影響因素凝膠化時間采用經(jīng)典的試管倒置法進行檢測。在前期研究中,筆者已經(jīng)明確,不同的CS和GP配比會影響凝膠轉(zhuǎn)化時間,本研究中采用凝膠轉(zhuǎn)化速度最快的CS/GP配比,用不同分子量(Molecular weight,Mw)和小同脫乙酸度(Deacetylation degree,DD)的CS在不同溫度下進行凝膠轉(zhuǎn)化時間檢測,研究此三種因素對Fe3O4-MMC-CS/GP凝膠轉(zhuǎn)化時間的影響。1.3 Fe3O4-MMC-CS/GP體外藥物釋放檢測采用透析法對Fe3O4-MMC-CS/GP凝膠系統(tǒng)進行藥物釋放實驗,明確其藥物釋放行為特點,并與傳統(tǒng)膀胱灌注相比較。將適量的載藥凝膠置于透析袋中,然后放入盛有溶出介質(zhì)的燒杯中,37℃恒溫水浴搖床,溶出介質(zhì)每2h更換一次,以模擬排尿周期,收集的溶出樣本過濾后-80℃儲存,等待批量檢測。MMC濃度檢測采用高效液相色譜法(High performance liquid chromatography,HPLC),統(tǒng)計數(shù)據(jù)后繪制濃度-時間曲線,釋放總量時間曲線,并計算藥時曲線下而積(Area under the curve,AUC),并與傳統(tǒng)膀胱灌注比較統(tǒng)計學差異,同時研究CS分子量,Fe304-MNP以及載藥量對該載藥系統(tǒng)藥物釋放的影響。1.4掃描電子顯微鏡及數(shù)碼顯微鏡檢測Fe304-MMC-CS/GP凝膠表征Fe3O4-MMC-CS/GP凝膠化后凍干,取少量樣品,噴金增加導電性,置于掃描電子顯微鏡(Scanning electronmicroscope,SEM)下觀察其內(nèi)部結(jié)構(gòu)并進行分析;取適量凝膠制作冰凍切片,然后行蘇木精-伊紅(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色,置于數(shù)碼顯微鏡下觀察其內(nèi)部結(jié)構(gòu)并拍攝數(shù)碼照片。1.5溶脹及降解檢測為檢測Fe3O4-MMC-CS/GP凝膠吸水溶脹及儲藥能力,評估體內(nèi)應用安全性及降解速率,采用重量分析法檢測其溶脹率及降解速率。溶脹實驗:稱量一定量的干凝膠,放入PBS中,間隔一定時間取出凝膠,濾紙擦干表面水分,稱量濕重,計算溶脹率。分析Fe3O4-MNP及MMC對凝膠溶脹的影響。體外降解實驗:稱量一定量的干凝膠,放入PBS緩沖液中,37℃水浴搖床,每天記錄凝膠干重,并更換PBS緩沖液,計算降解速率。分析溶菌酶、Fe3O4-MNP及MMC對凝膠載體系統(tǒng)降解的影響。1.6 Fe3O4-MMC-CS/GP凝膠系統(tǒng)體外抗腫瘤細胞活性檢測明確Fe3O4-MMC-CS/GP對腫瘤細胞活性的影響,并與傳統(tǒng)MMC膀胱灌注比較抗腫瘤療效,采用CCK-8試劑盒進行檢測。96孔板接種T24細胞后分為5組,分別接受不同處理,組1:空白對照組,無特殊處理;組2:外加磁場;組3:外加磁場+Fe3O4-CS/GP凝膠;組4:外加磁場+MMC溶液;組5:外加磁場+Fe3O4-MMC-CS/GP凝膠。每2h更換培養(yǎng)基,模擬周期性排尿。處理24h后加入CCK-8試劑進行光密度(Optical density,OD)值測量。比較Fe3O4-MMC-CS/GP與傳統(tǒng)膀胱灌注MMC溶液抗腫瘤細胞活性的差異。1.7 Fe3O4-MMC-CS/GP凝膠體外誘導腫瘤細胞凋亡檢測因MMC主要通過誘導腫瘤細胞發(fā)生凋亡來起到抗腫瘤作用,因此筆者采用流式細胞儀來分析Fe3O4-MMC-CS/GP對腫瘤細胞的凋亡誘導作用,并與MMC溶液的凋亡誘導相比較。T24細胞接種6孔板,分組處理如實驗1.6所述。24h后收集處理細胞,用Annexin V-FITC和PI進行雙染,流式細胞儀檢測各組細胞凋亡。2.體內(nèi)實驗部分2.1 Fe3O4-MMC-CS/GP體內(nèi)滯留實驗為明確磁性凝膠載體系統(tǒng)是否能延長MMC灌注后在膀胱腔內(nèi)存留時間,筆者用雌性大鼠進行了體內(nèi)滯留實驗。新鮮配制Fe3O4-MMC-CS/GP體系液體溶液,用自制3F導尿管對27只雌性Wistar大鼠進行膀胱灌注,每只大鼠灌注0.1ml。灌注治療完成后的大鼠置于0.4T磁場的環(huán)境中飼養(yǎng)。灌注后在2,4,6,8,10,12,24,48,72h分別處死3只大鼠,解剖取出大鼠膀胱,做冰凍切片后行HE染色,觀察灌注后不同時間點Fe3O4-MMC-CS/GP在膀胱內(nèi)的存留情況。2.2 Fe3O4-MMC-CS/GP體內(nèi)釋放實驗為進一步驗證、分析MMC從磁性凝膠載體中釋放的規(guī)律,筆者用Wistar大鼠進行Fe3O4-MMC-CS/GP的體內(nèi)釋放實驗。雌性Wistar大鼠麻醉后,導尿排空膀胱,實驗組灌注0.1ml的Fe304-MMC-CS/GP溶液(含0.1mg的MMC),對照組灌注0.1ml的MMC溶液(同樣含0.lmg的MMC)。灌注后將大鼠置于0.4T磁場的代謝籠中,并開始收集2,4,6,8,10,12,24,48,72h時間段內(nèi)的尿液,過濾后置于-80℃,等待HPLC批量檢測MMC濃度,繪制濃度-時間曲線,MMC釋放量-時間曲線,計算AUC,分析Fe3O4-MMC-CS/GP藥物緩釋行為,并與傳統(tǒng)MMC灌注相比較。2.3 Fe3O4-MMC-CS/GP膀胱灌注體內(nèi)抗腫瘤實驗分析并比較Fe304-MMC-CS/GP與傳統(tǒng)MMC膀胱灌注體內(nèi)抗腫瘤療效。32只雌性Wistar大鼠隨機分為4組。所有大鼠在成瘤期正常飲食,于飲水中添加BBN喂養(yǎng)8周。10周后所有大鼠進入膀胱灌注治療期,組1灌注PBS,組2灌注Fe3O4-CS/GP,組3灌注MMC溶液,組4灌注Fe3O4-MMC-CS/GP。所有大鼠每周灌注1次,共6周。組2、4給予外加磁場處理。20周后處死所有大鼠,解剖留取大鼠膀胱、雙側(cè)輸尿管及雙腎,統(tǒng)計各組大鼠膀胱內(nèi)腫瘤大小及數(shù)量并進行對比分析。2.4生存率評估為進一步評價Fe3O4-MMC-CS/GP膀胱灌注抗腫瘤療效以及對生存率的影響,從膀胱灌注治療期開始,統(tǒng)計各組大鼠生存率及死亡率,并繪制生存曲線,比較各組大鼠生存率差異。2.5免疫組織化學評估腫瘤凋亡膀胱腫瘤在MMC的作用下出現(xiàn)凋亡,是MMC抗膀胱腫瘤的重要作用機制。為進一步對比分析Fe3O4-MMC-CS/GP與單純MMC溶液的體內(nèi)抗腫瘤作用強弱,用免疫組化(Immunohistochemistry,IHC)分析各組大鼠腫瘤的凋亡情況。將各組大鼠膀胱腫瘤放入4%多聚甲醛中固定24h,石蠟包埋后切片,采用cleaved caspase-9和cleaved caspase-3抗體免疫組化染色的方法評估各組大鼠膀胱腫瘤的凋亡強弱。2.6統(tǒng)計分析使用Graphpad Prism 5.0對各實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理。根據(jù)數(shù)據(jù)類型選用單因素方差分析、Fisher卡方檢驗或配對t檢驗進行統(tǒng)計分析。本實驗研究中計量資料以平均值±標準差表示,選用雙側(cè)檢驗。P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。實驗結(jié)果1.1載藥磁性溫敏凝膠(Fe304-MMC-CS/GP)構(gòu)建成功并具有良好的磁響應性筆者用磁性溫敏凝膠成功裝載了 MMC,室溫下該體系為流動的液體,性質(zhì)均一,呈黑色,有一定的黏度,流動性好。加熱至37℃時,該體系迅速由液體轉(zhuǎn)變?yōu)楣腆w,呈凝膠狀,性質(zhì)均一,質(zhì)地略柔軟,不易變形,但施加強作用力后可破裂。取小塊Fe304-MMC-CS/GP凝膠置于盛水的燒杯中,在外加磁場的作用下,凝膠迅速移動并吸附于燒杯壁上,表現(xiàn)出良好的磁響應性。1.2 Fe3O4-MMC-CS/GP體外凝膠化時間檢測及影響因素筆者測試了 3種Mw以及2種DD的CS在不同溫度下的凝膠轉(zhuǎn)化時間,結(jié)果顯示Mw、DD以及溫度均可以影響Fe3O4-MMC-CS/GP由液體轉(zhuǎn)化為固體凝膠的速率。在同一溫度下,隨著Mw的增加,DD的升高,凝膠轉(zhuǎn)化時間明顯縮短;同一種CS配制的Fe3O4-MMC-CS/GP體系,在較高溫度時,凝膠轉(zhuǎn)化時間有所縮短。1.3 Fe3O4-MMC-CS/GP具有良好的緩釋藥物特性Fe3O4-MMC-CS/GP在溶出介質(zhì)中持續(xù)釋放MMC,2h藥物濃度達峰值,此后藥物濃度逐漸下降,呈現(xiàn)出先快后慢的釋放趨勢。藥物體外持續(xù)釋放時間約24h,而且突釋濃度顯著降低(75.33 ±0.85μg/ml,較對照組下降23.48%)。對照組模擬傳統(tǒng)膀胱灌注,單純MMC溶液濃度在前2h保持最高,突釋強(98.44± 0.52 μg/ml),更換溶出介質(zhì)后,濃度為0,且此后無MMC繼續(xù)釋放。兩者AUC無明顯差異。因此Fe304-MMC-CS/GP凝膠具有良好的緩釋藥物作用,可以持續(xù)釋放MMC,抗腫瘤作用時間明顯長于傳統(tǒng)膀胱灌注。Mw以及MMC含量會輕微影響凝膠載體系統(tǒng)的緩釋行為,但不顯著,Fe3O4-MNP對藥物釋放幾乎無影響。1.4掃描電鏡及數(shù)碼顯微鏡檢測Fe3O4-MMC-CS/GP凝膠表征掃描電鏡下觀察凍干CS/GP凝膠,可以觀察到凝膠成疏松多孔的網(wǎng)絡結(jié)構(gòu),孔徑大小比較均一,基質(zhì)表面光滑;Fe3O4-MMC-CS/GP同樣呈現(xiàn)疏松多孔的網(wǎng)絡結(jié)構(gòu),但基質(zhì)表面呈粗糙的顆粒狀,因MMC及Fe3O4-MNP黏附或包埋于基質(zhì)表面及內(nèi)部而產(chǎn)生。數(shù)碼顯微鏡觀察凝膠冷凍切片,凝膠因HE染色呈現(xiàn)紅色,同樣為疏松多孔的網(wǎng)絡結(jié)構(gòu),性質(zhì)均一,可見黑色的Fe3O4-MNP顆粒,高倍鏡下可觀察到藍色的MMC顆粒。載藥體系的微觀表征,有利于液體進入凝膠內(nèi)部,使裝載的藥物得以溶出,并被運送至凝膠外,產(chǎn)生藥物釋放行為。1.5 Fe3O4-MMC-CS/GP具有良好的溶脹及降解特性實驗數(shù)據(jù)顯示,在PBS溶液中,CS/GP與Fe3O4-MMC-CS/GP干凝膠會在1h內(nèi)迅速溶脹,幾乎達峰值,溶脹率分別為255.19%±16.02%和196.64%±22.63%,因此該凝膠系統(tǒng)有著良好的吸水能力,有利于MMC的溶出、暫時儲存及緩釋。Fe3O4-MMC-CS/GP的溶脹率略低,主要是由于MMC及Fe3O4-MNP占據(jù)了凝膠內(nèi)部部分空間,導致吸水量相對減少所致。體外降解實驗顯示,在不含溶菌酶的PBS溶液中,CS/GP與Fe3O4-MMC-CS/GP凝膠降解緩慢,10天約降解了20%,而在含溶菌酶的PBS溶液中,兩種凝膠系統(tǒng)降解速度明顯加快,10天降解了約80%,可以預測該凝膠系統(tǒng)在體內(nèi)有著良好的生物降解性。1.6 Fe3O4-MMC-CS/GP體外抗腫瘤細胞活性較單純MMC溶液更強CCK-8實驗結(jié)果顯示,在中、低劑量 MMC實驗中,單純MMC溶液處理以及Fe3O4-MMC-CS/GP凝膠處理后,其 OD值明顯低于不含MMC處理的前3組,且Fe3O4-MMC-CS/GP處理組的OD值要低于單純MMC溶液處理組的 OD 值(中劑量組:0.537 ±0.009 vs.0.323 ± 0.003,P= 0.00070.001;低劑量組:1.727 ±0.029 vs.0.626 ±0.010,P=0.00030.001),且差異有統(tǒng)計學意義,提示Fe3O4-MMC-CS/GP體外抗膀胱癌細胞活性更強。在高劑量MMC實驗中,雖然差異無統(tǒng)計學意義,但Fe3O4-MMC-CS/GP的OD值仍低于單純MMC溶液處理組。1.7 Fe304-MMC-CS/GP凝膠體外誘導更多腫瘤細胞發(fā)生凋亡細胞凋亡流式檢測結(jié)果顯示,單純MMC處理以及Fe304-MMC-CS/GP處理組凋亡細胞數(shù)目顯著增加,明顯高于不含MMC處理的前3組,且Fe3O4-MMC-CS/GP組凋亡細胞數(shù)目顯著多于MMC處理組,分別為27.33%±4.51%和10.20%± 2.80%,差異具有統(tǒng)計學意義。提示相同條件下Fe304-MMC-CS/GP凝膠誘導更多T24腫瘤細胞發(fā)生凋亡。2.1 Fe3O4-MMC-CS/GP在膀胱內(nèi)具有強大的滯留特性通過留取不同時間點的人鼠膀胱組織,切片后HE染色觀察發(fā)現(xiàn),灌注后的Fe3O4-MMC-CS/GP混合溶液在膀胱腔內(nèi)形成凝膠并黏附于膀胱壁,隨著時間的流逝,Fe3O4-MMC-CS/GP凝膠在腐蝕、酶解等作用下質(zhì)量逐漸減少,灌注后72h留取的大鼠膀胱中,仍可以觀察到少量的凝膠黏附于膀胱壁,且高倍鏡下可見凝膠中的MMC顆粒。提示Fe3O4-MMC-CS/GP體內(nèi)滯留時間可長達72h。2.2 Fe3O4-MMC-CS/GP體內(nèi)釋放實驗大鼠體內(nèi)釋放試驗顯示,Fe3O4-MMC-CS/GP凝膠在大鼠膀胱腔內(nèi)釋放MMC長達72h,與單純MMC溶液灌注相比,延長了約17倍,半衰期增加至5.34±1.67h。從釋放行為上看,Fe3O4-MMC-CS/GP的緩釋作用使MMC釋放更加平穩(wěn),釋放時間延長,無明顯藥物突釋。藥時曲線下面積結(jié)果顯示,Fe3O4-MMC-CS/GP較傳統(tǒng)單純MMC灌注有著更明顯的優(yōu)勢(418.70±12.79 vs.191.70± 57.45,P=0.01820.05),生物利用度增加了 118.41%。不僅如此,MMC作用時間延長,導致通過膀胱黏膜吸收的MMC量增加了 172.44%。2.3 Fe304-MMC-CS/GP體內(nèi)抗腫瘤活性較傳統(tǒng)MMC灌注更強4組大鼠經(jīng)過成瘤期,膀胱灌注治療期結(jié)束后,全部處死,統(tǒng)計結(jié)果顯示,組1、組2中所有大鼠均存在膀胱腫瘤,且腫瘤體積較大,基底寬,活動度差,部分腫瘤表面出現(xiàn)白色鈣化沉淀,兩組中均存在腫瘤侵及輸尿管引起梗阻,致同側(cè)輸尿管、腎擴張積水的大鼠病例。組3(MMC)、組4(Fe304-MMC-CS/GP)的膀胱腫瘤體積較小,且組4中的平均腫瘤體積明顯小于組3(3.30±0.56 mm3 vs.5.88 ±0.65 mm3,P = 0.0083),抑制腫瘤體積生長43.88%。但成瘤大鼠的膀胱內(nèi)平均腫瘤數(shù)目上無明顯差異。2.4 Fe3O4-MMC-CS/GP灌注治療組大鼠具有最高的生存率4組大鼠從膀胱灌注治療期開始觀察統(tǒng)計生存、死亡數(shù)目,并繪制生存曲線,至20周時結(jié)束。結(jié)果顯示,組1、組2中因終點事件死亡大鼠數(shù)目分別為5 只和4只,MMC灌注組因終點事件死亡大鼠1只,Fe3O4-MMC-CS/GP灌注組無終點事件出現(xiàn)。因此,組4生存率較其他三組高,且差異具有統(tǒng)計學意義(P= 0.02610.05)。2.5免疫組織化學評估腫瘤凋亡4組大鼠膀胱腫瘤經(jīng)免疫組化染色顯示,cleaved caspase-3在組1、組2中染色較淺,表達較低,而經(jīng)過MMC及Fe3O4-MMC-CS/GP治療的組3、組4中,表達增高。經(jīng)軟件Image-Pro Plus 6.0處理后統(tǒng)計各組切片每個視野組織面積(Area)及積分光密度值(IOD),并計算IOD/Area,結(jié)果提示組4中cleaved caspase-3 蛋白表達明顯高于組 3(159.64± 14.95 vs68.32± 14.31,P0.0001),差異具有統(tǒng)計學意義,提示組4中腫瘤細胞凋亡更明顯。cleaved caspase-9是caspase-3上游caspase-9的活化形式,表達趨勢與cleaved caspase-3相同,同樣提示組4中更多腫瘤細胞發(fā)生凋亡。實驗結(jié)論在本實驗研究中,筆者成功將MMC與磁性溫敏凝膠載體相結(jié)合,制備了一種新型的膀胱灌注系統(tǒng)Fe3O4-MMC-CS/GP。該系統(tǒng)具有良好的磁響應性,在室溫下為流動的液體,灌注進入膀胱后能迅速轉(zhuǎn)化為凝膠,黏附于膀胱壁或在外加磁場引導下黏附于靶點。該凝膠系統(tǒng)具有無毒性、良好的組織相容性及生物降解性,體內(nèi)、體外均緩慢釋放MMC,并且延長MMC在膀胱內(nèi)的滯留時間,增加膀胱黏膜對MMC的吸收,與傳統(tǒng)膀胱灌注相比,具有更好的抗腫瘤細胞活性,能誘導更多的腫瘤細胞凋亡,提高膀胱腫瘤大鼠模型的存活率。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.14

【參考文獻】

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1 曾敬;貝翠翠;梁爽;董卓;代鑫;婁陽;王彤;辛興;;殼聚糖基水凝膠的制備及溶脹性能研究[J];沈陽師范大學學報(自然科學版);2016年03期

2 易文清;李新法;陳金周;牛明軍;;殼聚糖水凝膠微球的制備與溶脹性能[J];功能高分子學報;2010年04期

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本文編號：1423806