發(fā)布時間：2018-01-13 12:29

  本文關鍵詞：益生菌對高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響及機制　出處：《青島大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：第一章 益生菌對原發(fā)性高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響及機制目的:檢測原發(fā)性高尿酸血癥發(fā)生時腸道乳酸桿菌和雙歧桿菌的變化,以及益生菌治療對原發(fā)性高尿酸血癥血清尿酸水平及腸道尿酸轉運蛋白ABCG2/BCRP表達的影響及機制。方法:1.構建尿酸氧化酶(Uricase,Uox)基因敲除的C57BL/6小鼠原發(fā)性高尿酸血癥模型,采用Real-time PCR及Western-blot技術方法對該模型的敲除效率進行驗證;2.實驗小鼠分為4組(每組12只)。正常組:正常對照C57BL/6小鼠,每天灌胃0.2ml生理鹽水;高尿酸組:Uox基因敲除的原發(fā)性高尿酸血癥C57BL/6小鼠,每天灌胃0.2ml生理鹽水;正常組+益生菌組(益生菌N組):正常C57BL/6小鼠每天灌胃益生菌(分別含雙歧桿菌和乳酸桿菌1.0×106 CFU,溶解于0.2ml生理鹽水);高尿酸組+益生菌組(益生菌H組):Uox基因敲除的原發(fā)性高尿酸血癥C57BL/6小鼠每天灌胃益生菌(分別含雙歧桿菌和乳酸桿菌1.0×106 CFU,溶解于0.2ml生理鹽水)。3.提取各組小鼠糞便樣本中總DNA,基于16S r RNA設計特異性引物,絕對定量RT-PCR法檢測腸道菌群特別是乳酸桿菌及雙歧桿菌的變化;采用全自動生化儀及相關檢測試劑盒檢測各組小鼠血清尿酸(Uric Acid,UA)、內毒素(Lipopolysaccharides,LPS)以及黃嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase,XO)的活性水平;采用RT-PCR及Western-blot法檢測各組小鼠腸道尿酸轉運蛋白ABCG2/BCRP m RNA及蛋白表達變化;采用酶比色法檢測腸道菌群對尿酸的分解水平。在實驗進行第0、7、14、21、28及35天檢測上述指標。4.采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學分析。結果:與正常組比較,高尿酸組小鼠腸道中雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量明顯下降(P0.05)。血清尿酸、內毒素以及黃嘌呤氧化酶活性水平明顯升高(P0.01)。腸道菌群對尿酸的分解水平顯著降低(P0.05)。腸道尿酸轉運蛋白ABCG2/BCRP表達顯著增加(P0.05)。益生菌N組腸道中雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量明顯升高(P0.05),其余指標未見顯著差異。與高尿酸組比較,益生菌H組腸道中雙歧桿菌和乳桿菌的數(shù)量明顯增加(P0.05)。血清尿酸、內毒素以及黃嘌呤氧化酶活性水平明顯降低(P0.01),但數(shù)值仍高于正常組(P0.05)。腸道菌群對尿酸的分解水平顯著升高(P0.05),腸道尿酸轉運蛋白ABCG2/BCRP表達水平未見顯著差異。結論:1.Uox基因敲除成功建立原發(fā)性高尿酸血癥C57BL/6小鼠模型,原發(fā)性高尿酸血癥模型鼠腸道雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量減少。2.益生菌干預治療改變原發(fā)性高尿酸血癥C57BL/6小鼠模型腸道菌群的結構,使腸道雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量增加。3.益生菌干預治療使原發(fā)性高尿酸血癥C57BL/6小鼠模型血清內毒素和黃嘌呤氧化酶活性水平降低,進而尿酸生成減少,血清尿酸水平降低;4.原發(fā)性高尿酸血癥C57BL/6小鼠模型尿酸腸道轉運蛋白ABCG2/BCRP表達水平代償性增加。益生菌干預治療并未進一步上調ABCG2/BCRP的表達,但可增加尿酸在腸道中的分解,進而尿酸腸道排泄增加,血清尿酸水平降低。第二章益生菌對輪狀病毒感染導致的繼發(fā)性高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響及機制目的:兒童輪狀病毒(rotavirus,RV)腸胃炎(gastro-enteritis,GE)發(fā)生時,可能會伴隨高尿酸血癥。因此,我們建立RV GE小鼠模型,進而檢測血清尿酸(Uric Acid,UA)水平,以及腸道尿酸轉運蛋白ABCG2/BCRP的表達變化。同時,應用益生菌乳酸桿菌及雙歧桿菌治療RV GE小鼠,進一步觀察血清尿酸以及腸道尿酸轉運蛋白ABCG2/BCRP的表達變化。方法:通過灌胃RV建立RV GE小鼠模型。日齡為3天的小鼠隨機分為4組:正常組,RV GE組,益生菌N組及益生菌RV組。RV GE組及益生菌RV GE組給予灌胃0.2 ml含RV培養(yǎng)液(2×108 PFU),正常組及益生菌N組給予不含病毒的培養(yǎng)液灌胃0.2 ml。益生菌N組及益生菌RV GE組給予灌胃0.2 ml培養(yǎng)液后,同時每天給予益生菌灌胃治療(分別含雙歧桿菌和乳酸桿菌1.0×106 CFU,溶解于0.1 ml生理鹽水),正常組及RV GE組每天灌胃0.1 ml生理鹽水。采用全自動生化儀檢測各組小鼠血清尿酸。采用RT-PCR法檢測各組小鼠腸道尿酸轉運蛋白ABCG2/BCRP的m RNA表達變化。在實驗灌胃RV后第1、2、3、4、5、6、7、10天檢測上述指標。結果:與正常組比較,RV GE組及益生菌RV組血清尿酸水平在實驗進行第2,3,4,5,6,7天顯著升高(P0.01),益生菌N組血清尿酸水平未見明顯差異;與RV GE組比較,益生菌N組血清尿酸水平在實驗進行第2,3,4,5,6,7天顯著降低(P0.01),益生菌RV組血清尿酸水平實驗進行第3,4,5,6,7,10天顯著降低(P0.05),但數(shù)值在各時間點仍高于正常組。與正常組比較,RV GE組腸道尿酸轉運蛋白ABCG2/BCRP m RNA表達水平在實驗進行第3,4,5,6,7,10天顯著降低(P0.05),益生菌N組ABCG2/BCRP m RNA表達水平未見明顯差異,益生菌RV組在個時間點ABCG2/BCRP m RNA表達水平降低,在實驗第2,3,4天差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與RV GE組比較,益生菌N組ABCG2/BCRP m RNA表達水平在實驗進行第3,4,5,6,7,10天顯著升高(P0.05),益生菌RV組ABCG2/BCRP m RNA表達水平在各時間點升高,在實驗進行第3,4,5,6,7,10天差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),但數(shù)值在各時間點仍低于正常組。結論:1.RV灌胃成功建立了輪狀病毒感染小鼠模型。2.輪狀病毒感染小鼠模型血清尿酸水平增加。3.輪狀病毒感染小鼠腸道尿酸轉運蛋白ABCG2/BCRP表達下降。4.益生菌增加輪狀病毒感染小鼠腸道尿酸轉運蛋白ABCG2/BCRP表達,降低了模型小鼠血清尿酸水平。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R589.7

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本文編號：1418850