發(fā)布時間：2018-01-13 06:00

  本文關(guān)鍵詞：T細(xì)胞受體變化對慢乙肝抗病毒治療結(jié)局的影響　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：研究背景急性乙型肝炎患者中HBV特異性CD4+及CD8+T細(xì)胞通過其表面的T細(xì)胞受體(TCR)識別多個病毒抗原表位,產(chǎn)生多克隆的強(qiáng)效免疫應(yīng)答,控制HBV感染;而在慢性乙型肝炎(CHB)患者的HBV特異性T細(xì)胞功能耗竭。核苷(酸)類似物(NUC)抗病毒治療降低病毒載量及HBV抗原水平,T細(xì)胞功能得到短暫性部分恢復(fù)。但研究方法局限于組織相容性抗原-肽染色、細(xì)胞因子檢測等方法。而CHB患者其TCR基因表達(dá)變化與抗病毒治療結(jié)局的關(guān)系仍未明確。研究目的該研究采用無偏差的5'端cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)(RACE)擴(kuò)增TCRβ鏈(TRB)片段以及高通量測序,深度分析發(fā)生乙肝e抗原(HBeAg)血清學(xué)轉(zhuǎn)換與否的CHB患者在抗病毒治療早期其外周血CD4+及CD8+T細(xì)胞TRBCDR3的差異;并分析TRB CDR3動態(tài)變化與治療期間HBV DNA以及HBV抗原水平的相關(guān)關(guān)系。研究方法1.研究對象所有研究對象來源于一項替比夫定治療臨床隊列的22例HBeAg陽性CHB患者。收集治療0、12、24、52、104周血清及外周抗凝血。根據(jù)治療52周及104周的應(yīng)答情況分為完全應(yīng)答組(CR,n=10)及非完全應(yīng)答組(NCR,n=12)。CR組定義為治療52周及104周HBeAg發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換及HBV DNA水平300 copies/mL;NCR組定義為治療52周及104周HBeAg維持陽性及HBV DNA水平300 copies/mL;2.分離治療基線、12周、24周外周血單個核細(xì)胞,流式細(xì)胞儀分選CD4+及CD8+T細(xì)胞,提取總RNA;5'RACE技術(shù)及巢式PCR擴(kuò)增TRB鏈基因全長;構(gòu)建測序文庫及Illumina Hiseq上機(jī)測序;3.測序數(shù)據(jù)處理及分析采用免疫組庫分析軟件MiXCR進(jìn)行V、D、J基因片段比對,識別出有效TRB及CDR3序列。相同CDR3序列稱為一種克隆型。根據(jù)兩兩時間點(diǎn)每種克隆型頻率變化,分為消失、下降、持續(xù)、增生及新增5類克隆型。結(jié)果1.CHB患者抗病毒治療過程中外周血TRB文庫多樣性分析CR組在治療過程中其CD4細(xì)胞TCR文庫多樣性比NCR組低,尤其在12周(VDJ組合數(shù)量,P=0.035;CDR3氨基酸克隆型數(shù)量,P=0.03;Shannon指數(shù)值,P=0.041);而CR組CD8細(xì)胞TCR文庫多樣性比NCR組高,尤其在基線(CDR3氨基酸克隆型數(shù)量,P=0.041)�？v向分析發(fā)現(xiàn),無論CD4或CD8細(xì)胞,CHB患者TRB文庫多樣性在治療基線至12周均呈下降趨勢,而在CR組患者,尤其在CR組的CD4克隆中(Shannon指數(shù),P=0.022)更為顯著。2.抗病毒治療過程中TRB CDR3克隆動態(tài)變化通過分析基線、治療12周及24周兩兩時間點(diǎn)克隆型的動態(tài)變化,發(fā)現(xiàn)在CD4+及CD8+T細(xì)胞中,CR組持續(xù)克隆型比例顯著低于NCR組(P0.001);CR組新增與增生克隆型比例顯著高于NCR組,尤其在基線與治療12周期間(P=0.021)。CR組新增與增生CD4克隆型的累積頻率低于NCR組,在CD8亞群中兩組無差異,提示CR組患者的CD4+以及CD8+T細(xì)胞存在多克隆增生,但每種克隆型增生個數(shù)較NCR組受限。3.HBV血清學(xué)指標(biāo)水平與T細(xì)胞克隆動態(tài)變化的相關(guān)分析治療12周時CHB患者乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、HBeAg及HBVDNA水平與CD4、CD8持續(xù)克隆型比例呈正相關(guān)關(guān)系;與新增及增生克隆型比例呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(Spearman correlation,P0.05)。治療12周較基線時HBeAg水平下降幅度與CD4、CD8持續(xù)克隆型比例呈負(fù)相關(guān)關(guān)系;與新增及增生克隆型比例呈正相關(guān)關(guān)系(P0.05)。結(jié)論在抗病毒治療早期T細(xì)胞針對多表位的強(qiáng)效克隆增生與CHB患者發(fā)生HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換、HBV抗原及病毒載量下降相關(guān)。NUC治療早期T細(xì)胞克隆的動態(tài)變化對CHB患者T細(xì)胞應(yīng)答重建具有重要作用。將來,NUC聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)治療的策略,如過繼性回輸含有針對多表位嵌合HBV特異性TCR的T細(xì)胞,可有望重建T細(xì)胞功能,實(shí)現(xiàn)對HBV完全的控制。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R512.62

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本文編號：1417735