目的闡明腎主骨生長(zhǎng)發(fā)育的中醫(yī)理論內(nèi)涵及現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究情況。以Cx43蛋白及其介導(dǎo)的GJIC功能為切入點(diǎn)探討腎主骨生長(zhǎng)發(fā)育的理論實(shí)質(zhì),并通過大鼠BMSCs體外培養(yǎng)軟骨向誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn),進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究,論證左歸丸對(duì)Cx43蛋白的調(diào)控作用及機(jī)制。方法1、理論研究:理論研究從理論淵源、理論內(nèi)涵、理論運(yùn)用角度,闡明祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)“腎主骨生長(zhǎng)發(fā)育”理論的認(rèn)識(shí)。根據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)腎主骨生長(zhǎng)發(fā)育研究情況,探討其理論的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)質(zhì)。2、實(shí)驗(yàn)研究:SPF級(jí)2月齡SD雄性大鼠中藥濃縮劑灌胃,通過血清藥理學(xué)方法,制備體積分?jǐn)?shù)為10%的含藥血清培養(yǎng)液,進(jìn)行共培養(yǎng)。采用密度梯度離心法制取BMSCs培養(yǎng)傳代,加入誘導(dǎo)液進(jìn)行成軟骨誘導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)分組:設(shè)立正常對(duì)照A組(培養(yǎng)基加入灌服生理鹽水動(dòng)物血清配制的誘導(dǎo)液)、左歸丸含藥血清B組(培養(yǎng)基加入左歸丸含藥血清配制的誘導(dǎo)液),左歸丸含藥血清+縫隙連接阻滯C組(同B組+AGA)。細(xì)胞分組處理后,每3d換液一次,誘導(dǎo)培養(yǎng)21d。培養(yǎng)過程中進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察;第14天采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)Cx43、GDF-5mRNA表達(dá)、免疫熒光染色檢測(cè)Cx43蛋白表達(dá),劃痕染料標(biāo)記示蹤法檢測(cè)細(xì)胞GJIC功能;第...

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)學(xué)觀察注:倒置相差顯微鏡×100倍

基于CX43研究腎主骨生長(zhǎng)發(fā)育理論與相關(guān)實(shí)驗(yàn)313結(jié)果3.1培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察原代細(xì)胞培養(yǎng)初期呈梭形或紡錘形，旋渦狀向四周擴(kuò)增生長(zhǎng)，見圖1-A；傳代細(xì)胞呈梭形波浪狀排列，見圖1-B。軟骨向分化誘導(dǎo)培養(yǎng)初期細(xì)胞為梭型，有星形多突起，見圖1-C；培養(yǎng)第7天，細(xì)胞增殖、體積增大，伸展出....

圖2目的基因瓊脂糖凝膠電泳圖

湖北中醫(yī)藥大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文32圖2目的基因瓊脂糖凝膠電泳圖注:數(shù)字0代表Mark;1,2代表A組;3,4代表B組;5,6代表C組。表2各組細(xì)胞目的基因Cx43、GDF-5mRNA相對(duì)表達(dá)量(sx)組別A組B組C組Cx431.000±0.0001.722±0.013*1.....

圖3免疫熒光染色檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞Cx43蛋白表達(dá)注：A、B、C代表實(shí)驗(yàn)的三個(gè)分組；1為目的蛋白Cx43染色，2為細(xì)胞DAPI核染，3為前兩種染色的疊加

基于CX43研究腎主骨生長(zhǎng)發(fā)育理論與相關(guān)實(shí)驗(yàn)33圖3免疫熒光染色檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞Cx43蛋白表達(dá)注：A、B、C代表實(shí)驗(yàn)的三個(gè)分組；1為目的蛋白Cx43染色，2為細(xì)胞DAPI核染，3為前兩種染色的疊加。（熒光顯微鏡×400倍）表3各組細(xì)胞Cx43蛋白表達(dá)定量(sx)組別A組B組C組平均....

圖4各組細(xì)胞縫隙連接熒光黃染料標(biāo)記

湖北中醫(yī)藥大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文34間的擴(kuò)散距離，B組與A組對(duì)比，差異顯著（P<0.O5），加用AGA后，GJIC功能明顯下降，C組與B組比較，P<O.O5。結(jié)果見圖4、表4。圖4各組細(xì)胞縫隙連接熒光黃染料標(biāo)記注：A、B、C代表實(shí)驗(yàn)的三個(gè)分組。(熒光顯微鏡×200倍)表4各組....

本文編號(hào)：4020848