目的:通過鑒定小鼠睪丸、附睪和前列腺組織細胞外囊泡（extracellular vesicles,EVs）的蛋白,明確睪丸、附睪和前列腺來源的細胞外囊泡的蛋白組分在精子發(fā)育成熟及功能維持方面所發(fā)揮的不同作用。方法:使用TEI（Total Exosome Isolation）方法分別富集小鼠睪丸、附睪和前列腺組織的EVs,用免疫印跡分析EVs標記蛋白的表達,在透射電鏡下觀察EVs形態(tài),用動態(tài)光散射粒徑分析儀（dynamic light scattering,DLS）分析顆粒大小分布。通過液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC MS/MS）分析三種EVs的蛋白組分。運用DAVID 6.8在線分析工具從細胞組分、分子功能和生物學過程三方面對小鼠睪丸、附睪和前列腺組織的EVs蛋白進行GO（gene ontology）富集分析。結(jié)果:1.免疫印跡分析富集到的EVs表達CD63、TSG101等細胞外囊泡標記物。在透射電鏡下觀察EVs多呈圓形杯狀,用動態(tài)光散射粒徑分析儀（dynamic light scattering,DLS）分析顆粒大小分布,發(fā)現(xiàn)睪丸組織來源的EVs分布范圍較大（13-450nm）,以30-1... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

免疫印跡分析睪丸、附睪和前列腺組織EVs的標記蛋白提取小鼠睪丸、附睪和前列腺組織和EVs蛋白，12%的SDS-PAGE凝膠，組織上樣量10μg，EVs上樣量30μg

山西醫(yī)科大學碩士學位論文92.2睪丸、附睪和前列腺組織EVs的電鏡觀察與DLS粒徑測量透射電鏡觀察小鼠睪丸，附睪和前列腺組織的EVs，多呈圓形杯狀，睪丸和附睪標本中大小囊泡均可見到，前列腺標本中以小囊泡多見（見圖1-2）。為了進一步明確睪丸、附睪和前列腺組織的EVs大小分布，我們用DLS對睪丸、附睪和前列腺組織EVs的樣品進行測量。結(jié)果顯示睪丸組織EVs在13-450nm之間廣泛分布，直徑為30-140nm的囊泡數(shù)量最多；附睪組織EVs直徑大小分布在13-24nm、24-50nm、50-250nm三個區(qū)段，直徑在105nm左右的囊泡數(shù)量最多；前列腺組織EVs中30-220nm的囊泡數(shù)量是最多的，其中在50nm和90nm左右有兩個峰值，另外在7-28nm處還有集中的一群小囊泡（見圖1-3）。DLS結(jié)果與電鏡下觀察到的結(jié)果相一致，表明睪丸、附睪和前列腺組織EVs的大小分布確實有一定的差異。圖1-2電鏡觀察睪丸、附睪和前列腺組織EVs的形態(tài)電鏡下，通過負染顯示EVs呈“杯狀”。(A)睪丸組織EVs；(B)附睪組織EVs；(C)前列腺組織EVs。箭頭指示EVs，標尺為100nm。圖1-3DLS分析睪丸、附睪和前列腺組織EVs的粒徑分布范圍

山西醫(yī)科大學碩士學位論文92.2睪丸、附睪和前列腺組織EVs的電鏡觀察與DLS粒徑測量透射電鏡觀察小鼠睪丸，附睪和前列腺組織的EVs，多呈圓形杯狀，睪丸和附睪標本中大小囊泡均可見到，前列腺標本中以小囊泡多見（見圖1-2）。為了進一步明確睪丸、附睪和前列腺組織的EVs大小分布，我們用DLS對睪丸、附睪和前列腺組織EVs的樣品進行測量。結(jié)果顯示睪丸組織EVs在13-450nm之間廣泛分布，直徑為30-140nm的囊泡數(shù)量最多；附睪組織EVs直徑大小分布在13-24nm、24-50nm、50-250nm三個區(qū)段，直徑在105nm左右的囊泡數(shù)量最多；前列腺組織EVs中30-220nm的囊泡數(shù)量是最多的，其中在50nm和90nm左右有兩個峰值，另外在7-28nm處還有集中的一群小囊泡（見圖1-3）。DLS結(jié)果與電鏡下觀察到的結(jié)果相一致，表明睪丸、附睪和前列腺組織EVs的大小分布確實有一定的差異。圖1-2電鏡觀察睪丸、附睪和前列腺組織EVs的形態(tài)電鏡下，通過負染顯示EVs呈“杯狀”。(A)睪丸組織EVs；(B)附睪組織EVs；(C)前列腺組織EVs。箭頭指示EVs，標尺為100nm。圖1-3DLS分析睪丸、附睪和前列腺組織EVs的粒徑分布范圍

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]調(diào)控精子成熟和功能的生殖道胞外囊泡研究進展[J]. 李坤,倪崖.  生命科學. 2017(06)
[3]細胞外囊泡研究新進展[J]. 王琎,陳建英.  中國組織工程研究. 2017(04)
[4]外泌體與生殖細胞生長發(fā)育的研究進展[J]. 胡頲,胡蓉.  國際生殖健康/計劃生育雜志. 2017(01)



本文編號：2909395