發(fā)布時(shí)間：2020-12-10 22:37

　　目的:通過(guò)鑒定小鼠睪丸、附睪和前列腺組織細(xì)胞外囊泡（extracellular vesicles,EVs）的蛋白,明確睪丸、附睪和前列腺來(lái)源的細(xì)胞外囊泡的蛋白組分在精子發(fā)育成熟及功能維持方面所發(fā)揮的不同作用。方法:使用TEI（Total Exosome Isolation）方法分別富集小鼠睪丸、附睪和前列腺組織的EVs,用免疫印跡分析EVs標(biāo)記蛋白的表達(dá),在透射電鏡下觀察EVs形態(tài),用動(dòng)態(tài)光散射粒徑分析儀（dynamic light scattering,DLS）分析顆粒大小分布。通過(guò)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC MS/MS）分析三種EVs的蛋白組分。運(yùn)用DAVID 6.8在線(xiàn)分析工具從細(xì)胞組分、分子功能和生物學(xué)過(guò)程三方面對(duì)小鼠睪丸、附睪和前列腺組織的EVs蛋白進(jìn)行GO（gene ontology）富集分析。結(jié)果:1.免疫印跡分析富集到的EVs表達(dá)CD63、TSG101等細(xì)胞外囊泡標(biāo)記物。在透射電鏡下觀察EVs多呈圓形杯狀,用動(dòng)態(tài)光散射粒徑分析儀（dynamic light scattering,DLS）分析顆粒大小分布,發(fā)現(xiàn)睪丸組織來(lái)源的EVs分布范圍較大（13-450nm）,以30-1... 

【文章來(lái)源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】：93 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

免疫印跡分析睪丸、附睪和前列腺組織EVs的標(biāo)記蛋白提取小鼠睪丸、附睪和前列腺組織和EVs蛋白，12%的SDS-PAGE凝膠，組織上樣量10μg，EVs上樣量30μg

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文92.2睪丸、附睪和前列腺組織EVs的電鏡觀察與DLS粒徑測(cè)量透射電鏡觀察小鼠睪丸，附睪和前列腺組織的EVs，多呈圓形杯狀，睪丸和附睪標(biāo)本中大小囊泡均可見(jiàn)到，前列腺標(biāo)本中以小囊泡多見(jiàn)（見(jiàn)圖1-2）。為了進(jìn)一步明確睪丸、附睪和前列腺組織的EVs大小分布，我們用DLS對(duì)睪丸、附睪和前列腺組織EVs的樣品進(jìn)行測(cè)量。結(jié)果顯示睪丸組織EVs在13-450nm之間廣泛分布，直徑為30-140nm的囊泡數(shù)量最多；附睪組織EVs直徑大小分布在13-24nm、24-50nm、50-250nm三個(gè)區(qū)段，直徑在105nm左右的囊泡數(shù)量最多；前列腺組織EVs中30-220nm的囊泡數(shù)量是最多的，其中在50nm和90nm左右有兩個(gè)峰值，另外在7-28nm處還有集中的一群小囊泡（見(jiàn)圖1-3）。DLS結(jié)果與電鏡下觀察到的結(jié)果相一致，表明睪丸、附睪和前列腺組織EVs的大小分布確實(shí)有一定的差異。圖1-2電鏡觀察睪丸、附睪和前列腺組織EVs的形態(tài)電鏡下，通過(guò)負(fù)染顯示EVs呈“杯狀”。(A)睪丸組織EVs；(B)附睪組織EVs；(C)前列腺組織EVs。箭頭指示EVs，標(biāo)尺為100nm。圖1-3DLS分析睪丸、附睪和前列腺組織EVs的粒徑分布范圍

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文92.2睪丸、附睪和前列腺組織EVs的電鏡觀察與DLS粒徑測(cè)量透射電鏡觀察小鼠睪丸，附睪和前列腺組織的EVs，多呈圓形杯狀，睪丸和附睪標(biāo)本中大小囊泡均可見(jiàn)到，前列腺標(biāo)本中以小囊泡多見(jiàn)（見(jiàn)圖1-2）。為了進(jìn)一步明確睪丸、附睪和前列腺組織的EVs大小分布，我們用DLS對(duì)睪丸、附睪和前列腺組織EVs的樣品進(jìn)行測(cè)量。結(jié)果顯示睪丸組織EVs在13-450nm之間廣泛分布，直徑為30-140nm的囊泡數(shù)量最多；附睪組織EVs直徑大小分布在13-24nm、24-50nm、50-250nm三個(gè)區(qū)段，直徑在105nm左右的囊泡數(shù)量最多；前列腺組織EVs中30-220nm的囊泡數(shù)量是最多的，其中在50nm和90nm左右有兩個(gè)峰值，另外在7-28nm處還有集中的一群小囊泡（見(jiàn)圖1-3）。DLS結(jié)果與電鏡下觀察到的結(jié)果相一致，表明睪丸、附睪和前列腺組織EVs的大小分布確實(shí)有一定的差異。圖1-2電鏡觀察睪丸、附睪和前列腺組織EVs的形態(tài)電鏡下，通過(guò)負(fù)染顯示EVs呈“杯狀”。(A)睪丸組織EVs；(B)附睪組織EVs；(C)前列腺組織EVs。箭頭指示EVs，標(biāo)尺為100nm。圖1-3DLS分析睪丸、附睪和前列腺組織EVs的粒徑分布范圍

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]附睪小體功能蛋白及sRNA研究進(jìn)展[J]. 肖娟,王訊,羅毅,李曉開(kāi),李學(xué)偉.  遺傳. 2018(03)
[2]調(diào)控精子成熟和功能的生殖道胞外囊泡研究進(jìn)展[J]. 李坤,倪崖.  生命科學(xué). 2017(06)
[3]細(xì)胞外囊泡研究新進(jìn)展[J]. 王琎,陳建英.  中國(guó)組織工程研究. 2017(04)
[4]外泌體與生殖細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育的研究進(jìn)展[J]. 胡頲,胡蓉.  國(guó)際生殖健康/計(jì)劃生育雜志. 2017(01)



本文編號(hào)：2909395