目的:體外培養(yǎng)小鼠MIN6細(xì)胞,并給予Ang(1-7)干預(yù),利用免疫熒光技術(shù)在共聚焦顯微鏡下觀察細(xì)胞表面因子MafA、Ngn3的表達(dá)情況,及FoxO1在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)位置的變化,從而探討Ang(1-7)能否改善高糖誘導(dǎo)下的MIN6細(xì)胞去分化。方法:1.將小鼠MIN6細(xì)胞用按照一定比例配制的DMEN培養(yǎng)基接種于25ml培養(yǎng)瓶中,置于37℃、5%CO2濃度的細(xì)胞孵箱中進(jìn)行培養(yǎng)。每24小時(shí)更換培養(yǎng)液1次,待細(xì)胞生長(zhǎng)至貼滿瓶壁80%時(shí)進(jìn)行傳代培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況,選取第3-4代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。2.將細(xì)胞隨機(jī)分為四組,A組為正常對(duì)照無干預(yù)措施;B組加入提前配制的25mmol/L高糖溶液;C組加入25mmol/L高糖溶液+10^-5mol/L的Ang(1-7)溶液,(先加入Ang(1-7),30分鐘后加入高糖溶液);D組加入25mmol/L高糖溶液+10^-5mol/L的Ang(1-7)+10^-5mol/L的A-779溶液(先加入A-779,30分鐘后加入Ang(1-7),再過30分鐘加高糖溶液);相同條件下共同培養(yǎng)24小時(shí)。3.利用免...

【文章頁數(shù)】：43 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
常用縮寫詞中英文對(duì)照表
前言
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
    1.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑
    1.3 實(shí)驗(yàn)主要儀器
    1.4 實(shí)驗(yàn)主要試劑配制方法
2 研究方法
    2.1 MIN-6 小鼠胰島細(xì)胞培養(yǎng)
    2.2 細(xì)胞爬片
        2.2.1 玻片制備
        2.2.2 細(xì)胞爬片
    2.3 實(shí)驗(yàn)分組
    2.4 細(xì)胞免疫化學(xué)染色
    2.5 激光共聚焦顯微鏡成像
    2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 顯微鏡下觀察各組MIN-6 細(xì)胞生長(zhǎng)狀況
    3.2 MIN-6 細(xì)胞表面標(biāo)志物MafA、Ngn3 的表達(dá)情況
    3.3 不同干預(yù)條件下 MIN6 細(xì)胞去分化標(biāo)志物 Ngn3 表達(dá)情況
    3.4 不同干預(yù)條件下 Fox O1 在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)位置情況
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：4004621