發(fā)布時間：2020-12-06 16:45

　　精子發(fā)生與成熟是影響哺乳動物繁殖效率的主要因素之一。睪丸曲細(xì)精管中,雄性生殖細(xì)胞經(jīng)歷一系列分化步驟及形態(tài)變化形成成熟的雄性配子,此過程通常伴隨著表觀修飾的調(diào)控。組蛋白賴氨酸去甲基化酶是表觀修飾的調(diào)節(jié)因子之一,參與配子形成及胚胎發(fā)育等過程。前期研究表明,多個KDMs家族成員參與精子發(fā)生及胚胎發(fā)育。KDM2A是KDMs家族成員之一,可通過調(diào)節(jié)H3K36甲基化水平和相關(guān)信號通路的表達(dá),對細(xì)胞增殖、分化、凋亡和衰老起調(diào)控作用,進(jìn)而影響發(fā)育和腫瘤形成。然而,目前關(guān)于KDM2A對于精子發(fā)生晚期的影響還未見報道。因此,本研究通過qRT-PCR（Real-time quantification PCR,qRT-PCR）、免疫組織化學(xué)染色、免疫熒光染色等技術(shù)分析KDM2A在睪丸和精子發(fā)育中的表達(dá)規(guī)律,并利用Cre-loxP系統(tǒng)建立精子細(xì)胞KDM2A特異性敲除小鼠模型;通過HE染色、體外受精、交配實驗以及統(tǒng)計學(xué)分析方法比較KDM2A敲除后小鼠睪丸發(fā)育、精子成熟以及生育能力的表型變化。結(jié)果如下:1.對KDM2A進(jìn)行組織表達(dá)譜分析發(fā)現(xiàn),該基因mRNA在睪丸中高表達(dá),且在睪丸發(fā)育中KDM2A的表達(dá)呈動態(tài)分布,其... 

【文章來源】：西南民族大學(xué)四川省

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

小鼠精子發(fā)生過程（Hogarthetal.,2010）

II的啟動子轉(zhuǎn)錄（Venkateshetal.,2012）。同時H3K36me2可抑制基因啟動子的異常啟動，并且這種功能在哺乳動物中得到保留（McDanieletal.,2017;Lietal.,2009;Xieetal.,2011;Carvalhoetal.,2013）。而H3K36me3主要存在于3"端區(qū)域，其在果蠅中被Bam激活后，可促進(jìn)生殖細(xì)胞分化（Muksietal.,2015;Schmahlingetal.,2018）。H3K36的甲基化涉及許多不同的生物學(xué)過程，例如轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)，基因劑量補償，前體mRNA剪接，異染色質(zhì)形成，DNA復(fù)制，重組和DNA損傷修復(fù)等（Shinetal.,2014;Paietal.,2014;Larsonetal.,2017;Pfisteretal.,2014）。圖1.2賴氨酸的甲基化衍生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)（Husmannetal.,2019）Fig1.2Chemicalstructuresofmethylatedderivativesoflysine.1.3組蛋白賴氨酸去甲基化酶1.3.1KDMs家族介紹組蛋白賴氨酸甲基化修飾是一個動態(tài)的、可逆過程，分別由賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶（KMTs）和去甲基化酶（KDMs）兩個家族催化甲基化與去甲基化，以介導(dǎo)基因表達(dá)、染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和細(xì)胞周期等。迄今為止，已發(fā)現(xiàn)約24個組蛋白賴氨酸去甲基化酶。組蛋白去甲基化酶在真核生物的進(jìn)化中高度保守（Zhangetal.,2012;Qianetal.,2015）。目前將其分為：不含JmjC結(jié)構(gòu)域的KDM1，又名LSD1/2，一種黃素腺嘌呤二核苷酸(Flavinadeninedinucleotide,FAD)依賴性胺氧化酶，只能通過FAD依賴的胺

特異性KDM2A基因敲除小鼠模型的建立及其對雄性生殖的影響26圖2.1小鼠KDM2A基因的組織表達(dá)Fig2.1TissuesexpressionofKDM2Ageneinmouse注：**表示差異極顯著（P<0.01）；*表示差異顯著（P<0.05），下同Note:**showextremelysignificantdifference(P<0.01);*showsignificantdifference(P<0.05),thesameasbelow.2.3.3小鼠發(fā)育過程中KDM2A的表達(dá)利用qRT-PCR，以內(nèi)參基因PPIA作為參照，檢測KDM2A基因在小鼠不同發(fā)育階段睪丸中mRNA的表達(dá)情況（圖2.2）。結(jié)果顯示，在小鼠睪丸發(fā)育過程中，該基因的表達(dá)水平隨睪丸發(fā)育的進(jìn)行呈先上升后穩(wěn)定的趨勢。KDM2A在3-9周齡小鼠睪丸中的表達(dá)均顯著高于1周齡，其中3周齡時睪丸的KDM2AmRNA表達(dá)水平最高，大約是1周齡的2.6倍(P<0.01)。


本文編號：2901710