發(fā)布時(shí)間：2018-01-03 17:41

  本文關(guān)鍵詞：常用菌草的細(xì)胞核型和ISSR分析　出處：《福建農(nóng)林大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 狼尾草屬 遺傳多樣性 ISSR分析 核型分析

【摘要】：為了構(gòu)建菌草種質(zhì)資源圃,完善菌草種質(zhì)的信息,為進(jìn)一步的研究提供理論基礎(chǔ),因此探討常用菌草的親緣關(guān)系及構(gòu)建其DNA指紋圖譜成為亟需解決的問題,然而異地引種導(dǎo)致了命名混亂。本文主要內(nèi)容有常用菌草的狼尾草屬中24種植物ISSR遺傳多樣性研究及采用傳統(tǒng)壓片法對(duì)象草(Pennisetum purpureum)和巨菌草(Pennisetum spp.)的細(xì)胞染色體核型分析。目的是從分子水平上探討狼尾草屬植物間的親緣關(guān)系,為其遺傳育種及大面積推廣應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)；從細(xì)胞和分子水平上為鑒定巨菌草品種提供理論依據(jù)。具體結(jié)果如下：1)優(yōu)化象草的核型分析的反應(yīng)條件本研究采用傳統(tǒng)壓片法進(jìn)行染色體分析,分別比較取材部位、預(yù)處理、解離,選擇最優(yōu)的條件。結(jié)果表明：取材部位為根尖,預(yù)處理的方法是0.05%秋水仙素處理2h,1 M鹽酸解離8 min,為最優(yōu)結(jié)果。2)象草和巨菌草染色體核型分析象草和巨菌草的染色體形態(tài)較為一致,大部分由中部(m)和近中部(sm)著絲粒的染色體組成,其中象草和巨菌草的核型公式分別為2n=4x=28=20m+8sm、 2n=4x=28=16m+8sm+4st;象草和巨菌草染色體相對(duì)長度組成分別為2n=4x=28=6L+6M2+10M1+6S、2n=4x=28=4L+8M2+10M1+6S。研究認(rèn)為：象草和巨菌草的不對(duì)稱系數(shù)都接近50%,均屬于較原始的類型,核型分類均為2A型。3)采用單因素實(shí)驗(yàn)建立了象草ISSR-PCR引物UBC847的反應(yīng)體系及程序和優(yōu)化其他引物的退火溫度引物UBC847的反應(yīng)體系：在20μL的反應(yīng)體系中,引物濃度0DNA量40 ng。反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性2min,95℃變性45s,50.4℃退火45s,72℃延伸60s,35個(gè)循環(huán),72℃延伸5 min,4℃保存。保持反應(yīng)體系及程序,只設(shè)定退火溫度變化范圍,優(yōu)化其他77條引物的退火溫度。4)ISSR標(biāo)記的聚類分析采用ISSR分子分析狼尾草屬24個(gè)品種間的遺傳關(guān)系,結(jié)果表明：從78條引物中共篩選出13個(gè)引物,共擴(kuò)增出303條帶,其中多態(tài)性條帶為297條,多態(tài)位點(diǎn)達(dá)98.0%,13條引物擴(kuò)增譜帶范圍為15～37條,分布范圍較寬,每條引物擴(kuò)增26.9個(gè)多態(tài)性條帶。實(shí)驗(yàn)表明在這24個(gè)品種間具有較高的遺傳多樣性。利用UPGMA聚類分析結(jié)果,當(dāng)相似性系數(shù)為0.826時(shí)可分為4類。5)闡述了巨菌草和象草的親緣關(guān)系巨菌草和象草染色體數(shù)目是一致的,形態(tài)有些差別即在染色體核型公式和組成上有一些差別,無明顯的差異,巨菌草的進(jìn)化程度高于象草。結(jié)合ISSR分析中兩者的相似性系數(shù)為0.814,被分為同一大類。核型分析和ISSR分析結(jié)果較為一致,這兩者有一定的親緣關(guān)系。
[Abstract]:In order to improve the construction of JUNCAO germplasm resources, Germplasm JUNCAO information, provide a theoretical basis for further study, so the study on genetic relationships and build the common JUNCAO DNA fingerprint has become a urgent problem, however, led to the introduction to the main contents in this paper. Naming confusion is commonly used in the grass Pennisetum 24 plant genetic ISSR research on diversity and the traditional compression method using object (Pennisetum purpureum) and grass Jujun grass (Pennisetum spp.) analysis of chromosome karyotype. Aims to explore the relationship between Pennisetum plants at the molecular level, which lays the theoretical foundation for the popularization and application of the genetic breeding and large area; from the cellular and molecular level and provide a theoretical basis for the for the identification of Jujun grass varieties. The main results are as follows: 1) the reaction condition optimization of Elephantgrass karyotype analysis in this study using the traditional compression method of dyeing Analysis, compare the different parts, preprocessing, dissociation, select the optimum conditions. The results show that the derived part is the root, the pretreatment methods of 0.05% colchicine 2h, 1 M hydrochloric acid dissociation of 8 min,.2) for optimal results of karyotype analysis of chromosome Elephantgrass and Jujun grass like morphology of grass and Jujun grass is the most consistent, central (m) and (SM) composition near middle centromere chromosome, the karyotype formula of Elephantgrass and Jujun grass were 2n=4x=28=20m+8sm and 2n=4x=28=16m+8sm+4st; the relative length of Elephantgrass and Jujun grass chromosomes were 2n=4x=28=6L+6M2+10M1+6S, 2n=4x=28=4L+8M2+10M1+6S. study shows that the asymmetry coefficient of Elephantgrass and Jujun grass are close to 50%, belong to the type is original, karyotype classification were 2A type.3) by single factor experiment established the reaction system and program of elephant grass and optimize their ISSR-PCR primers UBC847 The reaction system UBC847 primer primer annealing temperature he: in the reaction system of 20 L, 40 0DNA primer concentration ng. reaction procedure: 95 C predegeneration 2min 95 C 45s 45s degeneration, annealed at 50.4 C, 72 C extension 60s, 35 cycles, 72 degrees extension 5 min, 4 degrees to save. Keep the reaction system and procedures, only set the range of annealing temperature, annealing temperature of.4 to optimize other 77 primers) clustering analysis with ISSR markers by ISSR molecular analysis of Pennisetum genetic relationship among 24 varieties. The results showed that: from 78 primers were screened out of 13 primers, 303 bands were amplified, among them 297 polymorphic bands, 98% polymorphic loci, amplified bands ranged from 15~37 to 13 primers, wide distribution, amplified 26.9 polymorphic bands per primer. The experimental results show that the genetic diversity was high in the 24 varieties. The use of UPGMA cluster analysis results, when The similarity coefficient of 0.826 can be divided into 4 categories:.5) describes the number of Elephantgrass Jujun grass and related Jujun grass and Pennisetum chromosome is consistent with some differences in morphology, karyotype formula and composition have some differences, no significant differences, evolution degree is higher than that of Elephantgrass Jujun grass. Combined with ISSR analysis the similarity coefficient of 0.814, were divided into the same categories. Karyotype analysis and ISSR analysis results are consistent, there are some relationships both.

【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：Q943

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