發(fā)布時(shí)間：2020-11-10 11:04

　　 蕙蘭(Cymbidium faberi)是蘭科植物中地生蘭的一種,廣泛分布于中國(guó)、韓國(guó)、日本等地區(qū)。在中國(guó)主要分布于陜南地區(qū)、云貴高原和長(zhǎng)江中下游地區(qū)。蕙蘭是我國(guó)栽培歷史悠久的四大國(guó)蘭之一,因其植株高大,花型健美,花香四溢,擁有高雅的象征寓意而受到人們的追捧。近年來(lái),由于人為的過(guò)度采挖,導(dǎo)致野生資源日漸枯竭,加之該物種種子細(xì)小不易萌發(fā),本身繁殖速度慢,生長(zhǎng)周期長(zhǎng),野生資源的保護(hù)迫在眉睫;同時(shí)蕙蘭兼具觀賞和藥用價(jià)值,具有深入開(kāi)發(fā)利用的潛力。本研究對(duì)陜南地區(qū)3個(gè)樣地(陜西省略陽(yáng)縣、南鄭區(qū)和洋縣)的野生蕙蘭根部?jī)?nèi)生真菌進(jìn)行分離,利用高通量測(cè)序技術(shù)和純培養(yǎng)方法進(jìn)行蕙蘭內(nèi)生真菌多樣性分析;對(duì)內(nèi)生真菌的吲哚乙酸(IAA)活性、鐵載體活性等促生潛力進(jìn)行研究,篩選出5株(NZ5、LY65、LG37、NZ80和LG19)具有促生能力的內(nèi)生真菌菌株進(jìn)行蕙蘭盆栽試驗(yàn);通過(guò)向不同試驗(yàn)組中添加促生內(nèi)生真菌,并測(cè)定蕙蘭的生物量和生理指標(biāo),來(lái)研究蕙蘭促生內(nèi)生真菌對(duì)蕙蘭的促生作用。以期為開(kāi)發(fā)利用蕙蘭內(nèi)生真菌資源和促進(jìn)蕙蘭生長(zhǎng)發(fā)育提供基礎(chǔ)。試驗(yàn)主要結(jié)論如下:1.從3個(gè)采樣地中共獲得211 517條有效序列,分為986個(gè)OTUs,包括8個(gè)真菌門(mén),113個(gè)屬。Basidiomycota為優(yōu)勢(shì)門(mén),Guehomyces為優(yōu)勢(shì)屬。不同地點(diǎn)的樣品內(nèi)生真菌群落組成不同但有相似性,洋縣蕙蘭多樣性最豐富,略陽(yáng)與南鄭之間相對(duì)而言相似度更高。實(shí)驗(yàn)中僅檢測(cè)出Thanatephorus、Ceratobasidiaceae和Russulaceae三種菌根真菌,但豐度較低(0.1%),這表明菌根真菌在蕙蘭內(nèi)生真菌群落中所占比例較低。2.在3個(gè)樣地中共分離出內(nèi)生真菌216株,46個(gè)屬,木霉屬Trichoderma為優(yōu)勢(shì)屬分離率和分離頻率分別為18.52%、23.15%。其中略陽(yáng)樣地分離出90株26個(gè)屬,8個(gè)獨(dú)有屬;南鄭65株21個(gè)屬,5個(gè)獨(dú)有屬;洋縣61株21個(gè)屬,7個(gè)獨(dú)有屬。多樣性分析結(jié)果顯示,略陽(yáng)樣地分離的內(nèi)生真菌多樣性指數(shù)、均勻度指數(shù)和豐富度指數(shù)最高,略陽(yáng)與洋縣的內(nèi)生真菌群落結(jié)構(gòu)相似,這一結(jié)果與高通量測(cè)序結(jié)果并不相同。實(shí)驗(yàn)中分離的內(nèi)生真菌中包含角擔(dān)菌屬Ceratobasidium和亡革菌屬Thanatephorus兩個(gè)屬的菌根真菌,表明陜南蕙蘭偏好與角擔(dān)菌屬或亡革菌屬菌根真菌共生。3.對(duì)蕙蘭內(nèi)生真菌的IAA活性等促生能力進(jìn)行研究,篩選出促生內(nèi)生真菌NZ5(Trichoderma sp.)、LY65(Trichoderma sp.)、LG37(Hypocrea sp.)、NZ80(Mucor sp.)和LG19(Nectriopsis sp.),對(duì)5株真菌進(jìn)行培養(yǎng),并向蕙蘭中添加促生內(nèi)生真菌。實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,通過(guò)添加促生內(nèi)生真菌,蕙蘭的生物量及生理指標(biāo)均有顯著性增加或降低,綜合實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析,T1(NZ5)處理對(duì)蕙蘭的促生作用最顯著。通過(guò)所篩選的促生內(nèi)生真菌對(duì)蕙蘭幼苗的促生試驗(yàn),研究蕙蘭促生內(nèi)生真菌對(duì)蕙蘭幼苗生長(zhǎng)發(fā)育的影響,以期促進(jìn)蕙蘭的生長(zhǎng)發(fā)育,對(duì)蕙蘭野生資源的保護(hù)提供參考。
【學(xué)位單位】：陜西理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：S682.31;Q93
【部分圖文】：

陜南地區(qū)包括秦嶺山地、漢江河谷盆地及大巴山山地 3 個(gè)伏明顯[43]。A 為洋縣，地處漢江河谷盆地邊緣，屬漢江流域。秦嶺山地腹地，屬嘉陵江流域。C 為南鄭區(qū)地處大巴山山地北該區(qū)域地處暖溫帶和北亞熱帶過(guò)渡區(qū)，是中國(guó)南北氣候、生物生態(tài)系統(tǒng)復(fù)雜，生物多樣性豐富，適宜野生蕙蘭的生長(zhǎng)，是我分布地區(qū)之一。因此研究陜南地區(qū)野生蕙蘭內(nèi)生真菌多樣性及蘭生長(zhǎng)發(fā)育的影響，對(duì)促進(jìn)蕙蘭的生長(zhǎng)發(fā)育及其資源開(kāi)發(fā)具有

圖 2-1 各采樣地樣品間 OTU 數(shù)量關(guān)系韋恩圖Fig.2-1 Venn plot among all samples真菌群落組成r 做分析，隨機(jī)抽取測(cè)序樣品中的有效序列，以equences)為橫坐標(biāo)，以 OTUs 數(shù)目 (Observed O通過(guò)稀釋曲線(xiàn)不僅可以判斷樣品量是否充分，還種豐富度進(jìn)行預(yù)測(cè)。如圖 2-2 所示，隨著測(cè)序數(shù)于平坦，說(shuō)明測(cè)序結(jié)果基本覆蓋了樣品中絕大多續(xù)分析。結(jié)果表明，抽樣 reads 在 20 000 以下時(shí)增加，在 20 000-40 000 之間緩慢增加，超過(guò) 4達(dá)到飽和，增加測(cè)序數(shù)據(jù)無(wú)法再找到更多的 O

圖 2-2 內(nèi)生真菌的稀釋曲線(xiàn)Fig. 2-2 The dilution curve of endophytic fungi總體樣本內(nèi)生真菌群落結(jié)構(gòu)分析用 RDP classifier 分類(lèi)器對(duì) OTUs 依次進(jìn)行門(mén)(Phylum)、綱(Class)、、科(Family)及屬(Genus)水平上的物種分類(lèi)注釋。結(jié)合 3 個(gè)樣本的 O果進(jìn)行總體分析，采用 GraPhlAn 方法繪制蕙蘭內(nèi)生真菌的群落組成和樹(shù)，如圖2-3所示為豐度前100的物種進(jìn)化分類(lèi)樹(shù)，將豐度前22個(gè)物種出) 所對(duì)應(yīng)的門(mén)按不同的顏色標(biāo)出, 圈和星號(hào)的大小代表豐度大小, 外中顏色深淺隨物種豐度變化。此可見(jiàn), 蕙蘭的內(nèi)生真菌蕙蘭的內(nèi)生真菌中 Basidiomycota 為優(yōu)勢(shì)門(mén)lomycetes 為優(yōu)勢(shì)綱，Cystobasidiales 為優(yōu)勢(shì)目，Cystofilobasidiaceae 為Guehomyces 為優(yōu)勢(shì)屬(用字母 R 表示)。
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本文編號(hào)：2877856