發(fā)布時(shí)間：2020-12-05 13:43

　　魚卵作為一種營(yíng)養(yǎng)豐富、味道鮮美的海鮮產(chǎn)品,深受大家的喜愛(ài),尤其是鱘魚卵所制的魚子醬,價(jià)格昂貴,更是被譽(yù)為“黑色黃金”。但在國(guó)內(nèi)外,有關(guān)魚卵引起過(guò)敏的報(bào)道卻屢見(jiàn)不鮮。研究發(fā)現(xiàn),魚卵是一種潛在的含有過(guò)敏原的食物,其主要的過(guò)敏原為βP-c糖蛋白。大多數(shù)因魚卵過(guò)敏的病例都被歸類為I型過(guò)敏癥,由過(guò)敏原與IgE特異性結(jié)合引起。目前,與其他食物過(guò)敏原相比,魚卵中過(guò)敏性蛋白的生化特性以及結(jié)構(gòu)方面的信息較少,β’-c糖蛋白的結(jié)構(gòu)信息尚不明確,而糖基化承載了大量的生物學(xué)信息。因此,分析魚卵中主要過(guò)敏原β’-c糖蛋白的結(jié)構(gòu)非常重要,其可為深入研究魚卵致敏機(jī)理提供理論基礎(chǔ)。本課題以俄羅斯鱘魚（Acipenser gueldenstaedti）魚卵為試驗(yàn)材料,提取、分離、純化鱘魚卵中的β’-c糖蛋白,并對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征。主要研究結(jié)果如下:1.鱘魚卵β’-c糖蛋白的提取及分離純化:采用氯化鈉鹽溶液提取法制備卵黃蛋白提取物,測(cè)定提取物中總蛋白和多糖的含量。再利用硫酸銨分級(jí)沉淀法對(duì)卵黃蛋白提取物進(jìn)行初步粗分離,隨后采取熱處理、堿處理及超速離心的方法對(duì)卵黃蛋白進(jìn)一步分離純化,并用PAS染色法鑒定糖蛋白。結(jié)果表明:氯化鈉... 

【文章來(lái)源】：浙江工商大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：85 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 魚卵的研究進(jìn)展
        1.1.1 魚卵的概況
        1.1.2 魚卵的加工現(xiàn)狀
        1.1.3 鱘魚卵及副產(chǎn)品
        1.1.4 魚卵過(guò)敏原的研究狀況
    1.2 魚卵中卵黃蛋白原的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 卵黃蛋白原簡(jiǎn)介
        1.2.2 魚類卵黃蛋白原的結(jié)構(gòu)特性
        1.2.3 魚類卵黃蛋白原的免疫功能
    1.3 糖蛋白的研究現(xiàn)狀
        1.3.1 糖蛋白簡(jiǎn)介
        1.3.2 蛋白質(zhì)糖基化
        1.3.3 糖蛋白的質(zhì)譜研究
        1.3.4 糖蛋白研究所面臨的挑戰(zhàn)
    1.4 本研究的目的和意義
    1.5 本論文的主要研究?jī)?nèi)容
第2章 鱘魚卵β'-c糖蛋白的提取及分離純化
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.2.1 材料與處理
        2.2.2 主要儀器和試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 卵黃糖蛋白粗提物的制備
        2.3.2 卵黃糖蛋白粗提物的初步分離
        2.3.3 BCA試劑盒測(cè)定卵黃糖蛋白蛋白含量
        2.3.4 苯酚硫酸法測(cè)定卵黃糖蛋白多糖含量
        2.3.5 SDS-PAGE電泳分析
        2.3.6 熱處理分離純化卵黃糖蛋白
        2.3.7 堿處理分離純化卵黃糖蛋白
        2.3.8 超速離心法進(jìn)一步純化卵黃糖蛋白
        2.3.9 PAS染色法鑒定糖蛋白
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 卵黃糖蛋白蛋白含量分析
        2.4.2 卵黃糖蛋白多糖含量分析
        2.4.3 卵黃糖蛋白初步分離結(jié)果比較
        2.4.4 熱處理與堿處理分離純化卵黃糖蛋白
        2.4.5 PAS染色法鑒定糖蛋白
        2.4.6 超速離心法進(jìn)一步純化卵黃糖蛋白
    2.5 本章小結(jié)
第3章 鱘魚卵β'-c糖蛋白蛋白部分的結(jié)構(gòu)表征
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.2.1 材料與處理
        3.2.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器和試劑
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 卵黃糖蛋白組分亞基分析
        3.3.2 蛋白質(zhì)膠條內(nèi)酶切
        3.3.3 液相質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS/MS）分析
        3.3.4 蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)檢索分析
        3.3.5 鱘魚卵卵黃糖蛋白生物信息學(xué)分析
        3.3.6 氨基酸序列同源性分析
        3.3.7 圓二色（CD）光譜分析糖蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 卵黃糖蛋白組分亞基分析
        3.4.2 鱘魚卵卵黃糖蛋白鑒定結(jié)果分析
        3.4.3 鱘魚卵卵黃糖蛋白生物信息學(xué)分析
        3.4.4 鱘魚卵β'-c蛋白同源性分析
        3.4.5 圓二色（CD）光譜分析β,-c糖蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)
    3.5 本章小結(jié)
第4章 鱘魚卵β'-c糖蛋白糖肽及糖鏈的結(jié)構(gòu)表征
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        4.2.1 材料與處理
        4.2.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器和試劑
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 N-型糖苷鍵的鑒定
        4.3.2 O-型糖苷鍵的鑒定
        4.3.3 糖蛋白中糖肽的制備及富集純化
        4.3.4 糖肽中N-糖鏈的釋放及分離純化
        4.3.5 糖肽中N-糖鏈的完全甲基化及分離純化
        4.3.6 ESI（+）多級(jí)質(zhì)譜分析N-糖鏈結(jié)構(gòu)
n液質(zhì)聯(lián)用分析糖肽結(jié)構(gòu) ">        4.3.7 HILIC-MSⁿ液質(zhì)聯(lián)用分析糖肽結(jié)構(gòu)
        4.3.8 糖鏈及糖肽的數(shù)據(jù)分析
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 N-型糖苷鍵的鑒定結(jié)果分析
        4.4.2 O-型糖苷鍵的鑒定結(jié)果分析
        4.4.3 鱘魚卵β'-c糖蛋白糖鏈的結(jié)構(gòu)鑒定
        4.4.4 鱘魚卵β'-c糖蛋白糖肽的結(jié)構(gòu)鑒定
    4.5 本章小結(jié)
第5章 總結(jié)
    5.1 主要研究結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 展望
參考文獻(xiàn)
附錄: 中英文縮略詞對(duì)照
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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